1、G8/T 5413. 13-1997 前占一日维生素B，的测定有化学法、微生物法、分光光度法、气相色谱法等，本标准给出的反相高压液相色谱法，是在参阅了有关国内外资料的基础上，经反复实验而确定的，具有快速、经济、准确度高的优点。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85。本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位z国家乳制品质量监督检验中心.本标准参加起草单位z卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人s杨金宝、鄂来明、王芸、*，J波。273 中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉维
2、生素B6的测定Mllk powder and formula foOO8 for 恒fantand yOUDg chlldren -Determination of vitamiD B, content 1 范围本标准规定了用反相液相色谱法测定维生素B，的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素队的测定。2 方法提要GB/T 5413.13-1997 代替GB5413-85 样品经热水萃取等前处理后，经C18色谱柱分离，荧光梭测器检测，外标法定量维生素B，(毗哆醇、毗哆霞、E比哆胶的含量。3试jIIJ所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3. 1
3、 高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase)0 3.2 盐酸溶液，c(HCl)为5.Omol/L , o. lmol/L. 3. 3 氢氧化纳溶液，c(NaOH)为5.0mol/L、O.lmol/Lo3. 4 冰乙酸z优级纯.3. 5 元水甲醇z色谱纯.3. 6 辛烧磺酸销z优级纯.3.7 三乙胶z体积分数注99.9%。3.8标准溶液3. 8. 1 咐哆醇、毗哆霞、毗哆胶标准贮备溶液，浓度均为200g/mL。准确称取毗哆醇、毗哆隆、毗哆R费标准品各20.00mg，用水溶解并定容至100mL容量瓶中。3.8.2 毗哆醇、毗哆酸、口比哆胶标准工作溶液，浓度均为2.0g/mL。取1.OmL标准贮备溶
4、液(3.8.1)，用水定容至lOOmL。4 仪器常用实验室仪器及84. 1 超声波振荡器.4.2 高压液相色谱仪z带荧光检测器。4.3 色谱柱，VarianMCH-IOm 3OcmX4mm，C18或具有同等性能的色谱柱。4.4 酸度计。回京技术监督局1997-05-28批准274 1998-09-01实施G/T 5413.13-1997 5 操作步骤5. 1 样品预处理5. 1. 1 含淀粉的样品精确称取5.Og样品，放入150mL锥形瓶中，加入0.5gTaka淀粉酶(3.1).再加入25mL45 50 C 的蒸馆水，混合均匀后，用氮气排除瓶内空气，盖上瓶塞，置45C烘箱内30min，取出冷却
5、至室温。5. 1. 2 不含淀粉的样品精确称取5.0g样品，放入150mL锥形瓶中，加入25mL60C的蒸馆水，振摇，静置5，._，1 Omin，使样品充分溶解并降至室温。5.2 测定液的制备5. 2. 1 用盐酸溶液(3.2)慢慢调节样品溶液的pH值至1.70.放置约lmin，再用氢氧化销溶液(3.3)调节样品溶液的pH值至4.50。5.2.2 将样晶溶液转移到50mL容量瓶中，用蒸馆水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于50mL容量瓶中，并用水定容至50mL，5.2.3 把上述容量瓶放入超声波水浴(4.1)中，振荡lOminc5. 2. 4 另取50mL容量瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把样品溶液倒入
6、其中，自然过滤。滤液再经0.45m微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为样品待测液。5.3 色谱条件检测灵敏度，0.002AU/MV. 检测器条件z荧光激发波长E.，293nm.发射波长Em，395nm。柱温，30C。流速，1.OOmL/min 流动相:体积分数为5.0%的甲醇、0.20g/100mL辛烧磺酸锅、体积分数为0.25%的三乙胶水溶液，用乙酸调pH=3.00，5.4 定量分析(外标法)注射一定量的标准工作液(3.8.2)进入色谱仪，得到组分z的峰高(或峰面积)A;，注射等体积的样品待测液进入色谱仪，得到组分z的峰高(或峰面积)B6分析结果寝述祥品中维生素队的含量(mg/100g)= X. + X瞌+x舷. .,. . . . . ( 1 ) 注.样晶中维生.B.吉量是各组分的啻量之和.样品中各级分含量(mg/10口g)= X B, X V X 100 mXA咆X1000 式中gB，一一样品组分i的峰高或面积3A，一一标准工作液中组分i的峰高或面积，C一一标准工作液中组分z的质量浓度，问/mL，m一一样品的质量.g，V一-样品揭穿液体积.mL。. ( 2 ) 275 GB/T 5413. 13-1997 7 允许楚同一样晶两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。276
