1、GB!T 5413.27-1997 前-f E习在婴幼儿配方食品中添加DHA、EPA是近两年的科技成果，对其含量的检测l方法尚在探索阶段。本标准给出的方法是在参考了大量国内外文献的基础上，经反复实验、验证而确定的，具有操作简便、快速、灵敏度高的特点。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85. 本标准由中国轻工总会提出.本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位g国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人z刘波、杨金宝、王芸。330 中华人民共和国国家标准婴幼儿配
2、方食品和乳粉DHA、EPA的测定M iJk powder and formula foods for infant and young cblJdren -J)etermlnation of J)HA and EP A contents 1 范围本标准规定了用气相色谱法测定DHA和EPA的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中DHA和EPA含量的测定。2 方法提要GB/T 5413. 27-1997 代替GB5413-85 抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气相色谱，火焰离子化检测器定量测定样品中的DHA和EPA的含量。3试1IIJ所有试剂.如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注
3、明其他要求，均指三级水。3. 1 高峰氏淀粉酶(Taka-Diastasel。3.2氨水体积分数;25%。3.3 乙醇体积分数;:，095%。3.4 乙酶，3.5 石油田童:沸程，3060C。3.6 正己烧2色谱纯。3. 7 氢氧化御的甲醇溶液，c(KH)为4mol/L，使用无水甲醇。3. 8 标准榕液3.8.1 标准贮备液:准确称取.0锦标准鱼油(EPA163. 9mg饵，DHA135.30mg/g)，用正己烧溶解并定容至50mLEPA的浓度为3.2678mg/mL、DHA的浓度为2.7060mg/mL)，冷冻保存。3.8.2 标准工作液z取标准贮备液.OOmL，用正己烧烯释并定容至10mL
4、(EPA的浓度为O.3268mg/mL，DHA的浓度为O.2706mg/mL)，使用前配制，以防止溶剂挥发而使浓度改变。4 仪器和玻璃器皿常用实验室仪器及24. 1 毛氏抽脂瓶。4.2 离心机。4.3 水浴锅。4.4 振摇器.4.5 气相色谱仪。国家技术监督局1997-05-28批准1998-09-01实施331 GB/T 5413. 27-1997 4.6 火馅离子化检测器。4. 7 包i柱，2m.10%EG55. GA5-CHROM QM/100-200目，不锈钢柱。5 操作步骤5. 1 仰川处理5. 1. 1 含淀粉样品准确称取1.OOOOg样品放入毛氏抽脂瓶中，加入O.lgTaka淀粉
5、酶，再加入10mL45-50C的蒸馆水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45C烘箱内30mn，取出冷却室温。5. 1. 2 不含淀粉样品准确称取样品1.0000日放入毛氏抽脂瓶(4.1)中，用10mL65C的热水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷至室温。5.2 测定液的制备5. 2. 1 于上述样品溶液中加入2mL体积分数为25%的氨水(3.2) .置于65.C水浴(3.3)中lSmin，取出，轻摇，冷至室温。5.2.2 加入10mL乙醇(3.3) .混匀。加入25mL乙酷(3.4) .塞上塞子振摇lmino加入25mL石油酷( 3.日，塞上塞子振摇lmno再加入25mL石油酶，塞上
6、塞子振摇lmino离心或静止，使酷层、水层分开。有机层转入烧瓶中。第二次提取加入的试剂为5mL乙醇、15mL乙融、15mL石油酶，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15mL乙艇和15mL石油酶，如上操作。5.2.3 把提取的隧液合并，减压浓缩至近干，用正己烧溶解残留物并定容至10mL.摇匀。准确吸取2mL此液于10mL带盖离心管中，加入0.2mL氢氧化僻的甲醇溶液(3.7) .振摇lmin以上，放置lOmin(甲基化反应)。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。5. 3 测定5. 3. 1 测定条件a)进样器温度，230C，b)检测椿FID温度，250.C，c)进样体积.2.
7、OpL , d)灵敏度010 , e)衰减，5，f)氮气流速，50mL/min，氯气流速，Z5mL/min;空气流速，300mL/min，u柱温，190C。5. 3. 2 定性测定根据保留时间定性.改变色谱条件，如柱温度、载气流速，使标准组分EPA和DHA的保留时间发生改变。如果样品中的某个峰随标准品中的某个峰的保留时间有同样的改变.p证明样品中含有与标样相同的某个组分。5.3.3 定量测定外标定量法.注射一定量的标准工作液进入气相色谱仪，得到EPA和DHA的峰面积礼，注射等体积的样品待测液迸入色谱仪，得到样品中EPA和DHA的峰面积B，。6 分析结果的寝迷样品中m或DHA的含量(mg/100g) =旦在主式中:B，一样品中组分i(EPA或DHA)对应峰面积$) l 332 GB/T 5413.27-1997 C 标准样中组分，的质量浓度，mg/mL;v一一待i四l样品的总体积.mL.;.4, 标准r:作液中组分r的峰面积;川样品的质址.g 0 7 允许磐同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。333
