1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1682-2005 蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法Protocol of diagnosis for European foulbrood of honey bees 2005皿09-30发布,_. 川、，3 2006-05心1实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T 1682-2005 剧吕本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)制定的陆生动物诊断试验和疫苗标准手册)2004版。本标准附录A、陆录B均为资料性附录。本标准出国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人:陈世松、苏
2、琳、朱开元、王建。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I 蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法1 范围本标准规定了蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的诊断方法。本标准适用于蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的检疫。2 诊断原理SNjT 1682-2005 蜜蜂欧洲幼虫腐臭病(EuropeanFoulbrood of Honey Bees)是由蜂房蜜蜂球菌(Melissococcus luton)引起的蜜蜂幼虫的一种细菌性传染病。该病通常使(34)日龄的未封盖幼虫死亡。幼虫患病后常作不正常的运动而使位置错乱。同时，患病幼虫又可随时被工蜂清除，形成卵、幼虫、空房相间的插花子牌。临床上发现死亡幼虫景黄白或暗褐色，并有酸臭气味，无粘性，
3、即可疑为欧洲幼虫腐臭病。由于病原体为细菌，故可将临床上疑似蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的幼虫或死亡幼虫进行染色直接镜检可如步诊斯为蜜蜂欧洲幼虫腐臭病，确诊需经分离培养后染色镜检。在普通光学显微镜下，蜂房蜜蜂球菌景单个或成串或头尾相接成对或成短链状或成簇状排列的短披针形球菌，大小为0.5mX10 m。3 设备、材料和试剂3. 1 设备3. 1. 1 普通光学显微镜。3.1.2 COz培养箱。3.2 材料和试剂3.2.1 元菌平血。3.2.2 载玻片。3.2.3 试管(10mL)。3.2.4 2%石炭酸复红溶液。3.2.5 元菌生理盐水。3.2.6 牛肉膏琼脂平板。3.2.7 牛肉膏琼脂斜面。4 采梓4.
4、1 采样比例一批蜂(幼蜂)数量小于或等于30只时全部采样。数量为30只100只时，以30只采样量为基础，每增加10只，采样量增加1只。数量大于100只时，按每批总数的30%采样。4.2 采样方法从蜂群中髓机抽取子脾一张，按照5点式采样方法，分别从巢牌四角与中央各检查幼虫房30个，观察是否有患病幼虫存在。采样时尽量采取变色或死亡幼虫送实验室检查。5 方法与判定5. 1 亘接检章法5. 1. 1 挑取被检样品少许，加少囊元菌生理盐水制成悬浮液。5. 1.2 将上述悬浮液1漓2滴，放在干净的载玻片上涂匀，自然风干或置火焰上慢慢干燥。1 SN/T 1682-2005 5. 1. 3 周2%石炭酸复红液
5、(参见附录A)染色1.5 rnin2 rnin，水洗，用滤纸吸干。5.1.4 在普通光学显微镜(1OOOXl 500X)下进行检查。5. 1. 5 结果判定:发现0.5rnXIO rn大小成单个或成串或头尾相接成对或成短链状或成簇状排列的短披针形球菌时，可初步判定为蜜蜂欧洲蜂幼虫腐臭病。5.2 分离培葬法5.2. 1 按无菌操作，取被检样品少许，加少量无菌生理盐水制成悬浑液。5.2.2 用接种环取上述悬浮液，以划线法接种于牛肉膏琼脂参见附录B)平板，置5%COz的培养箱中，在350C370C条件不，培养24h48 h。5.2.3 挑取单个菌落，接种子牛肉膏琼脂斜面，置5%COz的培养箱中，在3
6、50C37:C条件下培养24 h48 ho 5.2.4 经过分离纯化的菌株，即可用接种环挑取菌落，放在干净的载波片上，加1滴2滴生理盐水涂匀后风干或干燥。用5.1.3的染色方法染色后，在普通光学显微镜下检查。5.2.5 结果判定:发现0.5rnXIO rn大小成单个或成串或头尾相接成对或成短链状或成簇状排列的短披针形球菌时，可判定为蜜蜂欧洲蜂幼虫腐臭病。2 SN/T 1682-2005 附录A(资料性酣录)2%石炭酸复红液的制备碱性复红4g，溶于95%乙黯100mL中，再取此液10mL与5%石炭酸溶被90mL昆匀即成。附录B(资料性附录)牛肉膏琼脂培养基的制备牛肉膏1g，蛋白陈1g，氧化铀0.
7、5g，琼脂2g，蒸锦水100mL，将上述各种成分混合，加溶解，调节pH值至7.0，在0.068MPa压力下，高温灭菌消毒15min。SON-NFHZ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法SN/T 1682-2005 告奋中菌标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址www.bzcbs:com 电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷A 开本880X 1230 1/16 印张0.5字数5千字2006年1月第一版2006年1月第一次印刷印数12000咱书号:155066 2-16606 定价6.00元SN/T 1682 2005
