1、ICS 65120B 46中华人民共和国国家标准农业部1063号公告一4200820080715发布饲料中纳多洛尔的检测高效液相色谱法Determination of nadolol in feedsHighperformance liquid chromatography2008-0715实施中华人民共和国农业部发布刖 舌农业部1 063号公告一42008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心(北京)、河南省饲料产品质量监督检验站、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：
2、索德成、李兰、赵根龙、班付国、贾振民、刘素美、李金超。农业部1063号公告一4-2008饲料中纳多洛尔的检测 高效液相色谱法1范围本标准规定了测定饲料中纳多洛尔含量的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料中纳多洛尔的测定。方法最低检出限为01 mgkg，最低定量限为1 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这衅文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法GBT
3、146991饲料采样GBT 20195动物饲料试样的制备3原理试样中纳多洛尔经甲醇提取，用SPE柱净化分离，浓缩后，用高效液相色谱仪荧光检测器进行测定。4试剂和溶液除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合OgT 6682规定的一级用水。4 1乙腈：色谱纯。4 2甲醇。4 3甲酸。44氨水。4 5 05甲酸溶液：取5mL甲酸于1 000mL容量瓶中，用水定容至刻度。4 6稀释液：取50mL乙腈与1 000mL容量瓶中，用05甲酸溶液(44)定容至刻度。47 5氨化甲醇：取25 mL氨水(44)加入500 mI。甲醇溶液。4 8纳多洛尔标准品：纯度均应大于95。4 9纳多洛尔标准溶液4
4、 9 1纳多洛尔标准贮备液：准确称取已知纯度的纳多洛尔标准品50 mg(精确至0000 1 g)，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇(42)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀。该溶液中纳多洛尔浓度为1 000“gmI。4 9 2纳多洛尔标准工作液：准确移取一定量的纳多洛尔标准贮备液，置于棕色容量瓶中，用稀释液(46)稀释，定容至刻度，配成1 fgmL、2 pgmL、5 pgmL、10 figmL、20 ffgmL、50 pgmL的标准工作液。5仪器和设备除实验室常用仪器和设备外，还包括：1农业部1063号公告一420085 1高效液相色谱：配荧光检测器。5 2振荡器。53电子天平：感量为000
5、1 g和00001 g各一台。5 4滤膜：o45“m。5 5离心机：5 000 rmin。56氮吹仪。5 7涡旋混合器。5 8固相萃取净化柱：阳离子混合型固相萃取净化(SPE)柱，6mI，150mg。6试样的选取和制备6 1按GBT 146991采样。6 2选取有代表性饲料样品至少500 g，按GBT 20195制备样品。7分析步骤7 1提取准确称取配合饲料5 g(精确至0001 g)，于50mL离心管中，准确加入甲醇25mL，涡旋混合，超声10 min后，5 000 rmin离心5 min，取上清液备用。7 2净化依次用3 mL甲醇、3 mI。水活化固相萃取柱，用移液管准确吸取上清液5 mL
6、过萃取柱，用3 mL甲醇冲洗柱子，抽干。5 mL 5氨化甲醇溶液(46)洗脱，收集洗脱液。将洗脱液50水浴下氮气吹干。用1 mL稀释液(46)溶解，过045“m的滤膜，上机测定。7 3测定731液相色谱条件色谱柱具有c8填料的柱子(粒度为5“m)：柱长150mm，内径46mm。柱温：25。流动相A：05甲酸溶液B：乙腈，梯度洗脱程序见下表。流速：10 mLrain。表1梯度洗脱程序时间 o5甲酸溶液 乙腈mm 0 5 958 45 5512 5 9515 5 95检测器荧光检测器，激发波长为230 hill，发射波长300 nnl。732定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。对纳多洛
7、尔标准工作液(492)及试液(71)进行检测，采用单点或多点校准法定量。7 3 3结果计算试样中纳多洛尔的含量X以质量分数(ragkg)表示，按式(1)计算：2v P：VC盯V。x一F而掰式中：P，试样溶液峰面积值；V样品的总稀释体积，单位为毫升(mL)；C”标准T作溶液浓度，单位为微克每毫升(pgmL)V。标准工作溶液进样体积，单位为微升(“L)；P。标准丁作溶液峰面积平均值；m试样质量，单位为克(g)；V；试样溶液进样体积，单位为微升(“L)。平行测定结果用算术平均值表示，保留i位有效数字。农业部1063号公告一420088重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10。农业部1 063号公告一42008A 1 纳多洛尔标准溶液色谱图见图A1。附录A(资料性附录)纳多洛尔标准图谱0图A 1 纳多洛尔标准溶液色谱图0u猫|呈坫m，拍
