1、ICS 65120B 46中华人民 共禾口 国国家标准农业部1063号公告一72008饲料中8种13一受体激动剂的检测气相色谱一质谱法Simultaneous determination of 8 kinds of3-adrenergic agonists in feedstuffsGas chromatography-mass spectrometry20080715发布 20080715实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部1063号公告一72008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部饲料效
2、价与安全监督检验测试中心(北京)、国家饲料质量监督检验中心(JL京)、北京市饲料监察所。本标准主要起草人：张丽英、王宗义、尚彬如、范理、丁美方、贺平丽、杨文军、苏晓鸥、苏淑清。农业部1 063号公告一72008饲料中8种p一受体激动剂的检测气相色谱一质谱法1范围本标准规定了测定饲料中8种8受体激动剂的气相色谱一质谱法(GC MS)。本标准适用于配合饲料中氯丙那林、马布特罗、特布他林、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、齐帕特罗、班布特罗、莱克多巴胺的测定。本方法的定量限和检H限：莱克多巴胺为05 mgkg和01 ragkg，其他7种类药物分别为005 ragkg和001 ragkg。2规范性引用文件下列文
3、件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和实验方法GBT 146991饲料采样GBT 20195动物饲料试样的制备3方法原理试样经乙酸钠缓冲溶液提取，提取液过固相萃取柱(SPE)净化，吹干，经衍生后，直接在气相色谱质谱联用仪上测定。4试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水符合GBT 6682二级用水规定。4 1氨水。4 2冰乙酸。4 3三水
4、合乙酸钠。4 4衍生剂：双三甲基三氟乙酰胺(BsTFA)+三甲基氯硅烷(TMCS)一99+1。4 5甲苯：色谱纯。4 6甲醇：色谱纯。47标准品：纯度985。4 8氮气：普通氮气。4 9氦气：纯度99999。410混合型阳离子固相萃取柱：3 mL60rag。4 11乙酸钠缓冲液：称取3163 gi水合乙酸钠(43)溶于水，加入116mL冰乙酸(42)，pH约为48，用水稀释至1 L。4 12 1toolL乙酸溶液：移取57mL冰乙酸(42)于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。4 13洗脱液：取35 mL氨水(41)于100 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。4 14标准溶液的配
5、制农业部1063号公告一720084 14 1标准贮备液：200gmL，称取氯丙那林、马布特罗、特布他林、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、齐帕特罗、班布特罗、莱克多巴胺标准品各5mg(精确至0000 01 g)，分别溶解于甲醇中，并定容至25mL。于冰箱中4。C保存，保存期1个月。4 14 2标准T作液：移取标准贮备液(4131)于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成o05 pgmL、010 ugmL、020 pgmL、050 pgmL、100 pgmL、400pgmL标准系列。5仪器、设备51天平：感量001 g和感量0000 01 g各一台。52振荡器。5 3固相萃取净化装置。5 4氮吹装
6、置。5 5电热恒温鼓风干燥箱。56气相色谱一质谱联用仪。6试样制备按照GBT 146991规定方法采样，采取样品量至少500 g，按GBT 20195制备样品，样品以四分法缩减至200 g，粉碎过042 mm孔径筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤71试样提取准确称取试样5 g，准确至001 g，置于250mI，三角瓶中，准确加入乙酸钠缓冲液(411)50mL，振摇使之全部浸湿，盖紧塞子，放在旋转振荡器上，振荡25 min取下，溶液通过定性滤纸过滤，收集30 mL备用。7 2净化将固相萃取柱(410)固定于SPE净化装置(53)上，依次用3 mL甲醇和3 mL水活化、平衡。然后，精确吸取
7、2 mL试样溶液(71)全部加到小柱上，控制过柱速度不超过1 mLrain，分别用2 mL乙酸溶液(412)和3 mL甲醇淋洗一次，最后用3 mL洗脱液(413)洗脱于5 mL衍生瓶中，洗脱速度不超过1mLmin。将洗脱液置于40。C水浴条件下，用氮气吹干。同时取标准溶液2mL于5mL衍生瓶中，加1 mL洗脱液(413)，40。C水浴条件下氮气吹干。73衍生在衍生瓶中加入甲苯(4，5)100 pL，衍生剂(44)100 pL，充分涡旋混合后，置70。C烘箱中，反应1 h。冷却至室温后上机测定。7 4测定741色谱条件a)色谱柱：AB一5MS(DB一5MS)：长30 nl，内径025mm，液膜厚
8、025”m；b)载气：氦气(纯度99999)，流速1 mLmin；c)进样口温度：250；d)进样量：1”L，不分流，分流阀关闭时间lt 0min；e)柱温程序：100。C保持1min，lomin升温至280。C保持4min。742质谱条件a)EI源电子轰击能：70 eV；b)源温度：230；2c)转接口温度：280；d)四极杆温度：150；e)溶剂延迟：9 min。f)8种8一受体激动剂三甲基硅烷衍生物选择离子监测见表1。农业部1063号公告一72008表1 8种B一受体激动剂三甲基硅烷衍生物的监测离子监测离子日一受体激动剂氯丙那林 270，72104，180马布特罗 277204，296，
9、311特布他林 356，280，336426克伦特罗 262，212，243，277沙丁胺醇 369，72，116，203齐帕特罗 308，218，291，405班布特罗 354，282，309，439莱克多巴胺 267，179，250，5027 4 3定性定量方法7 4 3 1 定性方法：样品与标准品保留时间的相对偏差不大于05。特征离子基峰百分数与标准品相差不大于20。7 4 3 2定量方法；选择离子监测(SIM)法计算峰面积，标准工作液和样品溶液中响应值均应在仪器的线性范围内。如果浓度过高，需要适当稀释。外标法定量。8分析结果的计算试样中B一受体激动剂含量(x)以质量分数表示(pgg)，
10、可用公式(1)计算：dX一焘nPs(1)式中：A，试样溶液峰峰面积响应值；A。标准溶液色谱峰响应值；P。标准溶液浓度，单位为微克每毫升(gmL)；m试样质量，单位为克(g)；n稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9重复性同一实验室同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于20。农业部1063号公告一72008Abund一2600024 00022 0002000018 00016 0001400012 000100008 0006 0004 0002000Time+附录A(资料性附录)饲料中8种p一受体激动剂气相色谱一质谱总离子流色谱图1000 11 00 12 00 1300 14 00 15 00 1600 1700 18 00 19 00 2000 2l 00 22001氯丙那林；2 马布特罗；3 特布他林；4克伦特罗；图A5沙丁胺醇；6齐帕特罗；7班布特罗；8 莱克多巴胺1 饲料中8种B一受体激动剂气相色谱一质谱总离子流色谱图
