1、ICS 65120B 46中华人民共和国国家标准农业部1068号公告一5200820080725发布饲料中阿那曲唑的测定高效液相色谱法Determination of anastrozole in feedsHighperformance liquid chromatography20080725实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部1 068号公告一52008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料丁业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(济南)、中国农业科学院饲料研究所、河北省饲料监察所。本标准主要起草人：梁萌
2、、任爱丽、陈淑沂、李俊玲、张萍、李文香、陈宝明、孟凡胜、汤文利。饲料中阿那曲唑的测定高效液相色谱法农业部1 068号公告一520081范围本标准规定了用高效液相色谱法(HPLc)测定饲料中阿那曲唑的方法。本标准适用于配合饲料中阿那曲唑的测定。本方法定量限为1 ragkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法GBT 146
3、991饲料采样GBT 20195动物饲料试样的制备3原理试样用提取液提取，经固相萃取柱净化，洗脱液用氮气吹干，流动相溶解，在高效液相色谱仪上分离、测定，外标法定量。4试剂与材料除方法另有规定外，试剂均为分析纯，实验室用水符合GBT 6682中一级水的规定。4 1乙腈：色谱纯。4 2甲醇：色谱纯。4 3磷酸：优级纯，用微孔滤膜(416)过滤。4 4盐酸溶液：c(HCI)一01toolL。准确移取盐酸90mL于1 000mL容量瓶中，用水定容。45氨水。46 5氨化甲醇溶液：氨水(45)+甲醇(42)一5+95。4 7提取液：乙醚+二氯甲烷一3J_2。4 8 HPLC流动相：乙N(41)+水+磷酸
4、(43)一30+70+05。4 9阿那曲唑标准贮备溶液(100“gmL)：准确称取101 mg阿那曲唑标准品(99o)于ioo mL容量瓶中，用流动相(48)溶解、定容。置于4。C冰箱中保存，有效期1个月。4 10阿那曲唑标准工作溶液：分别准确移取阿那曲唑标准贮备溶液(49)100 mL、500 mL于100mI。容量瓶中，100mI3 00ml5 00ml。于10mI。容量瓶中，用流动相稀释、定容，配制成标准工作溶液，浓度分别为100 pgmL、500肛gmL、1000 pgmL、3000肛gmL、5000肛gmL。现用现配。4 11 MCX阳离子交换固相萃取小柱：60 mg3 mL，或其他
5、性能类似的小柱。412氮气：纯度9999。4 13 10mL具塞试管。4 14 5mL具塞试管。农业部1 068号公告一520084 15带盖塑料离心管：100mL。4 16滤膜：022“m，水系。4 17滤膜：o22“m，有机系。5仪器与设备5 1实验室用样品粉碎机。5 2分析天平：感量01mg。53离心机：4 000 rmin。54超纯水器。5 5旋涡混合器。5 6固相萃取装置。5 7氮吹仪。5 8高效液相色谱仪，具紫外检测器和二极管阵列检测器。6试样的制备按GBT 146991采样。选取有代表性饲料样品至少500 g，按GBT 20195制备样品。7分析步骤7 1提取称取约5 g试料，精
6、确到0Img，放人离心管(415)中，加入10m1水充分浸润。加入提取液(47)200 mL，轻摇数秒；加盖密封，旋涡(55)混匀数秒，放气；旋涡混匀30 S 2次；离心机(53)离心10 min；准确吸取上层有机溶液500 mL于10 mI，(413)具塞试管中，在40。C下氮气(412)吹干，用200 mL流动相(48)溶解残渣，旋涡混匀。7 2净化用甲醇3mL(42)和一级水3mL活化固相萃取小柱(411)，准确移取试液(7I)100m1，注入固相萃取小柱，用01 toolL盐酸溶液(44)3 mL和甲醇(42)3 mL淋洗，再准确移取氨化甲醇(46)2mL洗脱，收集洗脱液于5mL具塞试
7、管(414)中，在40。C下氮气(412)吹干，用1oomL流动相(48)溶解残渣，旋涡混匀，过微孔滤膜(417)，上HPLC测定。7 3 HPLC测定参数的设定色谱柱：c8柱，柱长150mm，内径40mm，粒度5“m。或性能类似的分析柱。柱温：室温。流动相：乙腈+水十磷酸一30+7005。流速：100 mLmin。检测器：紫外检测器和二极管阵列检测器。检测波长：220 nm。进样量：20L。74定性定量方法7 4 1定性方法除用保留时间定性外，还必须用二极管阵列检测器测定阿那曲唑紫外光区的特征光谱，即在196 nm、214 nm处有2个依次变低的吸收峰。742定量方法2农业部1 068号公告
8、一52008用紫外检测器测定标准系列溶液(410)和试料溶液(7，2)中阿那曲唑峰面积，用多点校准法定量。8结果计算饲料中阿J$fttt唑的含量x，以毫克每T克(mgkg)表示，按式(1)计算 x一迹燃式中：P试样中阿那曲唑的浓度，单位为微克每毫升(gmL)；n试样溶液的稀释倍数；一试料的质量，单位为克(g)。计算结果保留3位有效数字。9重复性在重复性条件下获得的2次独立测试结果的相对偏差不大于10，以2次平行测定结果的算术平均值为钡4定结果。农业部1 068号公告一52008附录A(资料性附录)阿那曲唑标准溶液的紫外色谱图和二极管阵列光谱图A 1 阿那曲唑标准溶液(1“gmL)色谱图(出峰时间104 min)见图A1。图A 1 阿那曲唑标准溶液(1 t,gmC)色谱图(出峰时间10 4 min)A 2阿那曲唑标准溶液(1 ttgmL)t(；谱图见图A2。图A 2阿那曲唑标准溶液(1肛gmL)光谱图wMH他mooo：o
