1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部1163号公告一62009动物性食品中泰乐菌素残留检测高效液相色谱法High performance liquid chromatographic method for thedetermination of Tylosin residues in edible tissues of swine and eggs20090206发布 20090301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部1 163号公告62009本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准由华中农业大学负责起草。本标准主要起草人：袁宗辉、陈冬梅
2、、陶燕飞、刘振利、王玉莲、黄玲利、彭大鹏、戴梦红。1范围农业部1 163号公告+2009动物性食品中泰乐菌素残留检测高效液相色谱法本标准规定了猪可食性组织和鸡蛋中泰乐菌素残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪肌肉、肝脏组织和鸡蛋中泰乐菌素的残留量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法3制样31样品的制
3、备3 1 1猪组织样品取适量新鲜或冷冻空白组织、供试组织，绞碎使均质。312鸡蛋样品取适量新鲜或供试鸡蛋，去壳，匀浆使均匀。3 2样品的保存猪组织样品于一20以下贮存备用；鸡蛋样品于0。C-4。C贮存备用。4测定方法4 1方法提要或原理试料中残留的泰乐菌素用乙腈提取，C，s柱固相萃取净化，用高效液相色谱仪(紫外检测器)测定，外标法定量。42试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GBT 6682规定的二级水。4 2 1泰乐菌素A：含量不低于99。422乙腈：色谱纯。4 2 3甲醇：色谱纯。4 2 4甲酸铵。42 5乙酸铵。42 6 01toolL甲酸铵溶液。称取甲酸铵63
4、 g，用水溶解并稀释到1 000mL，摇匀，045pm膜过滤后即得。427 01 toolI。乙酸铵甲醇溶液：称取乙酸铵77 g，用甲醇溶解稀释到1 000 mL，摇匀即得。428 01 toolL磷酸盐缓冲液；称取磷酸二氢钠156 g。加水1 000 mL，用磷酸调pH为26即得。1农业部1 163号公告一62009429泰乐菌素标准储备液：准确称取泰乐菌素标准溶液100 mg，用甲醇溶解定容至100 mL，配成100 ttgmL的标准储备液。 20以下冰箱中保存，有效期3个月。43仪器和设备43 1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。432分析天平：感量分别为0000 01 g和001 g。
5、4 3 3冷冻高速离一C,VL。4 3 4匀浆机。435旋涡混合器。4 3 6固相萃取装置。4 3 7氮气吹干装置。438 C18固相萃取柱500 mg，3 mL。44测定步骤4 41试料的制备试料的制备包括：取均质后的供试样品，作为供试试料；取均质后的空白样品，作为空白试料。442提取称取猪肌肉或鸡蛋试料(5o05)g，置于具塞离心管中，加乙腈10mL旋涡混合，10 000 rmin 4C离心15rain，取上清液于离心管中，再在试料中加乙腈10mL重复提取一次。合并上清液，10 000 rmin4离心10 rain。取上清液于烧杯中，加水50 mI。，混合均匀，备用。称取猪肝脏试料(5-+
6、005)g，置于具塞离心管中，加磷酸盐缓冲液10 mL和乙腈10 mL，旋涡混合，10 000 rmin 4离心15rain，取上清液于另一离心管中，再在试料中加乙腈10mL重复提取一次。合并上清液，10 000 rmin 4。C离心10min。取上清液于烧杯中，加水50mL，混合均匀，备用。4 4 3净化依次用甲醇、水各3mL活化固相萃取柱，然后将液过柱，控制流速小于2mImin。用水5mL和甲醇溶液1mL淋洗，用乙酸铵甲醇溶液3mL洗脱，收集洗脱液。于40。C45C水浴下氮气吹于，用05 mI。甲醇溶解残渣，10 000 rmin离心5 min，取上清液供高效液相色谱分析。4 4 4标准曲
7、线的绘制准确移取泰乐菌素标准储备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为01 pgmL、02 pgmL、04tgmL、08 pgmI，、16 pgmL、32 pgmL、64 pgmL的标准工作液，高效液相色谱分析，每个浓度重复3次，以得到的峰面积与对应浓度，绘制标准曲线。4 4 5测定4451色谱条件色谱柱：C1。柱，柱长为250 rELrn，内径为46 rnrn，粒径为5 pm。流动相：甲醇+乙腈+甲酸铵溶液一10+35+55。流速：1_0 mLmin。检测波长：286 rim。进样量：20I。柱温：30。4 4 52测定法取试样溶液和相应的标准工作溶液作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标
8、准工作液及2试样中泰乐菌素响应值均应在仪器检测的线性范围之内。泰乐菌素标准工作溶液和试样溶液的液相参考色谱图见附录A。45空白试验除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。46结果计算和表述按式(1)计算试料中泰乐菌素药物的残留量： X-糌(1)式中：x试样中泰乐菌素药物残留量，单位为微克每千克(ttgkg)；A试样溶液中泰乐菌素的峰面积；As标准工作液中泰乐菌素的峰面积；G标准工作液中泰乐菌素的浓度，单位为微克每升(tugL)； 卜溶解残余物所用溶液体积，单位为毫升(mL)；w试样质量，单位为克(g)。5检测方法的灵敏度、准确度、精密度51灵敏度本方法泰乐菌素的检测限为5 pgL，在猪肌
9、肉、肝脏组织和鸡蛋中的定量限为20 vgkg。52准确度本方法为在猪肌肉、肝脏组织和鸡蛋中添加20,ugkg100 ugkg浓度的回收率为70110100 pgkg400gkg浓度的回收率为80110。5 3精密度本方法在猪肌肉、肝脏组织和鸡蛋中，批内、批间变异系数CV15。附录A(资料性附录J高效液相色谱图图A1泰乐菌素标准工作液(0 1 t,gn讥)色谱图图A2猪肌肉空白色谱图图A 3猪肌肉添加浓度(20 pgkg】色谱图农业部1 163号公告62009500图A 4猪肝脏组织空白色谱图图A 5猪肝脏组织添加浓度(20峙kg)色谱图500 1000图A6鸡蛋空白色谱图5农业部1 163号公告620096图A 7鸡蛋添加浓度120|Igkg)色谱图
