1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部1163号公告一9二2009水产品中己烯雌酚残留检测气相色谱一质谱法Determinafion of diethylstilbestrol residues in fishery productsGas chromatography-mass spectrometry method20090206发布 20090301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：山东省水产品质量检验中心、山东省海洋水产研究所。本
2、标准主要起草人：张秀珍、徐英江、宫向红、邢红艳、刘义豪、宋莉辉。1范围水产品中己烯雌酚残留检测气相色谱一质谱法本标准规定了水产品中己烯雌酚残留量的气相色谱质谱测定方法。本标准适用于鱼、虾可食部分中己烯雌酚残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理以乙酸乙酯提取样品中的己烯雌酚，固相萃取柱净化，硅烷化试剂衍生
3、化后，用气相色谱一质谱仪测定，外标法定量。4试剂所有试剂除另有规定外均为分析纯，试验用水符合GBT 6682一级水要求。41 己烯雌酚标准品：纯度99。4 2乙酸乙酯：色谱纯。43甲醇：色谱纯。4 4正己烷：色谱纯。4 5无水乙醚。46无水碳酸钠。4 7碳酸钠溶液：10(WV)。称取10 g无水碳酸钠，溶于100mL水中。48己烯雌酚标准储备液：准确称取己烯雌酚标准品0010 g，用甲醇溶解，定容于100mL容量瓶中，即浓度为100gmL的标准储备液，置于一18。C冰箱中保存，有效期为6个月。49 己烯雌酚标准工作液：临用前，准确吸取己烯雌酚标准储备液，用甲醇稀释成浓度为0005“gmLo25
4、 pgmL标准工作液。410衍生化试剂：N o双一(三甲基硅基)三氟乙酰胺(BSTFA)三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99：1。5仪器5 1气相色谱质谱联用仪：配备电子电离(E1)离子源。52分析天平：感量0000 01 g。5 3旋涡混合器。5 4高速冷冻离心机。1农业部1 163号公告一920095 5氮吹仪。5 6旋转蒸发仪。5 7固相萃取装置。58具塞玻璃离心管：10 mI，。59 SLH固相萃取柱：500 mg，6 mL。510样品反应瓶：2 mL，去活，螺纹口。6测定步骤61样品预处理取水产品可食部分，充分匀浆，冷冻保存备用。62提取称取5 g(精确到001 g)样品于50 mL离
5、心管中，加入碳酸钠溶液(47)3 mL，乙酸乙酯20 mL，均质30 s，7 000 rmln离心10min，移取乙酸乙酯层于100mL梨形瓶中，残渣再加入10mL乙酸乙酯，重复提取一次，合并乙酸乙酯层，于40。C旋转蒸发至干，用2 mL正己烷和乙酸乙酯(体积比为85：15)混合溶液溶解残留物，备用。63净化依次用5 mL正己烷、5 mL乙酸乙酯活化SLH固相萃取柱，取备用液过柱，控制流速不超过2 mLmin，依次用2 mL正己烷，2 mL正己烷和乙酸乙酯(体积比为85：15)混合溶液淋洗小柱，弃淋洗液，将固相萃取柱抽干，用10 mL正己烷和乙酸乙酯(体积比为80：20)混合溶液洗脱，流速控制
6、不超过2mLmin，收集洗脱液于10mI。具塞玻璃离心管中，50C水浴中氮气吹干。用10mL无水乙醚溶解残留物，转移至样品反应瓶(510)中，氮气吹干。6 4衍生化6 4 1试样的衍生化于反应瓶中加人100“L衍生化试剂(410)，盖紧塞子，旋涡混合30 s，80。C烘箱中衍生30 min，用氮气吹干。加入05 mL正己烷，漩涡混合10 S，供GC-MS分析。642标准溶液的衍生化吸取一定量的己烯雌酚标准工作液于2 mL样品反应瓶中，氮气吹干，再按641操作。65测定6 51色谱条件6 5 1 1色谱柱：HP一5 ms石英毛细管柱，30 mX025 mmX025 pm；或相当者；6 5 12载
7、气：高纯氦气，纯度99999，流速10 mLrain；6 5 1 3进样口温度：250。C；6 5 1 4进样方式：无分流进样方式；6 5 1 5进样量：1“L；6 516柱温：初始柱温150。C，以20Cmin升至180。C，保持10rain，再以3Cmin升至230。C，保持4 rain，冉以30min升到280保持2 mln。6 52质谱条件652 1离子源：EI源；652 2离子源温度：230；6 523四极杆温度：150；2农业部1i63号公告-9-20096 524接口温度：280。C；652 5溶剂延迟：12rain；6 52 6选择离子监测(SIM)：己烯雌酚衍生物(mz)：3
8、83、397、412、413。65。3气相色谱一质谱分析65 3 1定性方法样品峰与标准物质的保留时间之差不大于010 min，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的特征离子均应出现，要求样品峰的各选择离子相对强度与标准物质相应选择离子的相对强度之差不大于允许相对标准偏差(表1)。表1选择离子监测表名称 监测离子，mz 相对强度， 允许相对偏差，412 100413 37 士15cis-DES衍生物397 17 土20383 17 士20412 100413 37 土15transDES衍生物397 17 士20383 17 20653 2定量方法以己烯雌酚衍生物定量离子(mz 412)的峰
9、面积单点或多点校准定量。当单点校准定量时，根据样品溶液中己烯雌酚含量情况，选择峰面积相近的标准工作液进行定量，结果以cisDES衍生物峰和tran5一DES衍生物的峰面积之和进行计算。同时，标准工作液和样品液中己烯雌酚响应值均应在仪器检测的线性范围之内。7结果计算样品中己烯雌酚的含量按式(1)计算。x一垡毪等蔷等巡州，式中：义样品中己烯雌酚含量，单位为微克每千克(ttgkg)；G标准工作溶液中己烯雌酚含量，单位为微克每毫升(ugmL)；V样品最终定容体积，单位为毫升(mI。)；Am标准工作溶液中cisDES衍生物的峰面积；Am标准工作溶液中tTansDES衍生物的峰面积；At一一试样液中cis
10、DES衍生物的峰面积；Az试样液中trazl5一DES衍生物的峰面积；m样品质量，单位为克(g)。8灵敏度本方法在鱼、虾中的定量限为05 ugkg。9准确度本方法添加浓度为05 ugkglOo ugkg时，回收率70。3农业部1 163号公告一9200910精密度本方法的批内相对标准偏差小于10，批间相对标准偏差小于15。AbundaneeAbtmdanee附录A(资料性附录】总离子流图和质谱图农业部1 163号公告9_2009tratn DES(OTMS)2cbDES一(OTM乳 上 山0 14 00 1600 1800 2000 2200 2400 2600 2800 3000 3200 3400图A 1 己烯雌酚标准品衍生物总离子流图3f3 317375 380 385 390 395 400 405 410 415 420图A2 己烯雌酚标准品衍生物质谱图咖咖咖咖咖咖咖咖987654321伽咖姗咖姗嘲湖咖姗咖铷。5544332211
