1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准农业部1486号公告-10-2010饲料中三睡仑的测定气相色谱一质谱法Determination of triazolam in feeds一Gas chromatography/mass spectrometry method 2010-11-16发布2010 -11一6实施:C中华人民共和国农业部发布目。吕本标准遵照GB/T1. 1-2009给:B的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会CSAC/TC76)归口。本标准起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心(成都)。农业部1486号公告
2、-10-2010本标准主要起草人:李云、张静、高庆军、李宏、现阳光、林顺全、冯娅。农业部1486号公告一10-2010饲料中三瞌仑的测定气相色谱一质谱法范围本标准规定了测定饲料中气瞠仑含量的气相色谱一质谱法(GC-MS)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。本标准的检测限为0.03mg/峙，定量限为0.1mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20
3、195动物饲料试样的制备3 原理用甲醇从饲料中提取二之瞠仑，离心，取上清液酸化后经阳离子固相萃取小柱净化，吹干，用合适的榕剂洛解，于气相色谱一质谱仪上测定。外标法计算其含量。4 试剂和材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯。4. 1 水:符合GB/T6682一级用水的规定。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 1%乙酸榕液:取1mL冰乙酸，用水稀释至100mL。4.4 5%氨化甲醇:取5mL氢水，用甲醇稀释至100mL。4.5 阳离子固相萃取小柱。mL，60mg)。4.6 气瞠仑标准溶液的配制。4.6. 1 标准储备液:准确称取25.0mg气喽仑标准品，用甲醇溶解并定容至100mL。此储备液浓度为
4、250g/mL。置于20C80C冰箱中保存，有效期气个月。4.6.2 标准中间液T:将标准储备液(4.6.1)用甲醇稀释为100g/mL，置于20C80C冰箱中保存，有效期一个月。4. 6. 3 标准中间液II:将标准储备液(4.6.1)用甲醇稀释为10g/mL，置于20C80C冰箱中保存，有效期一个月。4. 6. 4 标准士作液:分别移取标准中间液II(4. 6. 3) 1. 0 mL、5.0mL、10.0mL于100mL容量瓶中，标准中间液T(4.6.2)2.0 mL、5.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容，配制成浓度分别为0.1g/mL、O.5g/mL、1.0g/mL、2.0g
5、/mL、5.0g/mL的标准丁.作液。置于20C80C冰箱中保存，有效期两周。4. 7 微孔滤膜(0.45m)。农业部1486号公告一10一20105 仪器和设备5.1 气相色i普质谱仪。5. 2 实验室用样品粉碎机。5. 3 分析天平:感量0.0001g。5. 4 天平:感量0.01g。5.5 离心机。5.6 超纯水器。5. 7 超声波清洗器。5. 8 涡旋混合器。5.9 振荡机。5. 10 带盖塑料离心管:50mL。5. 11 氮吹仪。5. 12 固相萃取装置。6 采样和试样的制备按GB/T14699. 1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定选取具有代表性的实验室样品1峙，四分法缩
6、减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7. 1 提取准确称取配合饲料、浓缩饲料或预混饲料2g(精确到0.01g)，置于离心管(5.10)中，准确加入甲醇10.0 mL(浓缩饲料和预混饲料采用20.0mL)，加盖密封，振荡提取15min, 5 000 r/min离心5min。精密量取上清液5.0mL置于具塞试管中，加入1mL 1%乙酸榕液(4.3)，混匀，备用。7. 2 净化将经酸化后的提取液通过JH3 mL!fl醇和3mL水活化过的阳离f国相萃取小柱(4.日，过柱速度不超过2mL/min，依次用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干。最后用4mL 5%氨化甲
7、醇(4.的洗脱，洗脱液于纯吹仪(5.11)40oC下吹干，准确加人甲醇500L，涡旋30s，过0.45m微孔滤膜(4.7)后进行测定。7. 3 测定7. 3. 1 GC/MS测定参数2 色谱柱:5%苯基甲基聚硅氧烧毛细管柱，长30m，内径。.25mm，膜厚0.25m，或相吁者;载气:氮气(纯度99.999%);流速:1. 0 mL/ min; 进样口温度:300oC; 进样量:1. 0L，不分流方式;柱温程序:初始温度150oC，保持1min，然后以20oC/min升至31OoC，保持7min;EI源电f轰击能址:70cV; 离子源温度:230oC; 四极杆温度:1500C ; GC/MS传输
8、线温度:280oC; 农业部1486号公告一10-2010EM电斥:高于调谐电压200V; 榕剂延迟:7min; 质量扫描也罔(m/z): 40 amu400 amu; 选择离子监测(m/z): 137、238、313、342。定量离子:31307. 3. 2 定性定量方法7. 3. 2. 1 定性方法样品与标准品保留时间的相对偏差不大于1%。样品定性离子相对丰度与浓度相近的标准品离子相对丰度比较，偏差不超过表1的规定范罔。表1相对离子丰度的最大允许误差%-u灼,., 度一差乍一明白胆子一许离一允对一大相一最50 :l: 10 2050 :l: 15 1O20 土207.3.2.2 定量方法采
9、用选择离子监测(SIM)法，取适量样品溶液和相应的标准工作溶液进样，以定量离子峰面积为纵坐标，以气瞠仑浓度为横坐标进行单点或多点校准定量。标准丁伞作液和样品溶液中气瞠仑的响应值均应在仪器线性也围以内。8 结果计算饲料中气嗖仑的含量X，以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算:A.r XC XV1 XV X二A、曹7、，2_ (1) 式中:X一一饲料中兰瞠仑的含量，单位为毫克每T克(mg/kg); Ax-样品榕液中气嗖仑的峰面积;人标准溶液中气哇仑的峰面积;c., 标准溶液吨仑的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V1 提取液的体积，单位为毫升(mL);Vz 上机前定容体积，单位为毫升(m
10、L);V3一一移取提取液上固相萃取小柱的体积，单位为毫升(mL);m一一称取饲料的质量，单位为克(g)。计算结果保留气位有效数字。9 精密度在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于20%;以两次平行测定结果的计算平均值为测定结果。3 农业部1486号公告一10-2010A.1 气瞠仑选择离子色谱图见图A.l。1气度附录A(资料性附录)三瞌仑标准图谱12.440 6500000 6000000 5500000 5000000 4500000 4000000 3500000 3000000 2500000 2000000 1500000 1000000 500000 ZA
11、MMLHF斗叫j_叫. 战斗一- . ._r 人._.-_.、_._-_.一H才/8J7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 图A.1三瞠仑选择离子色谱图A.2 气瞠仑选择离子质谱图见图A.20 1主度11 000 10500 10000 9500 9000 8500 8000 238.0 7000 6500 6000 5500 5000 4500 4000 J 137.0 3500 3000 25 2000 1500 1000 500 rrJZ 140 160 180 200 220 240 260 280 图A.2三瞠仑选择离子质i普图4 313.0 300 320 342.0 340
