1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准农业部1486号公告一2-2010饲料中可乐定和赛庚睫的测定液相色谱一串联质谱法Determination of c10nidine and cyproheptadine in feeds一Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2010-11-16发布2010-11-16实施辞中华人民共和国农业部发布目。吕本标准遵照GB/T 1. 1 2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会CSAC/TC76)归口。农业部1486号公告一2
2、-2010本标准起草单位:上海市兽药饲料检测所、国家饲料质量监督检验中心(北京)、浙江省兽药监察所、河南省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人:黄士新、王蓓、顾欣、曹莹、李丹妮、张文刚、严凤、索德成、陈蔷、韦敏臣。I 农业部1486号公告一2一2010饲料中可乐定和赛庚睫的测定液相色谱一串联质谱法范围本标准规定了饲料中可乐定和赛庚脏的液相色谱一串联质谱测定方法(LC-MS/MS)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中可乐定和赛庚睫的测定。方法检测限为0.01mg/峙，定量限为0.02mg/峙。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日
3、期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理试样经盐酸甲醇混合溶液提取后，用固相萃取小柱净化，洗脱液蒸干后用含0.2%甲酸的乙腊水溶液溶解，供液相色谱一串联质谱仪进行检测，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的二级用水。4. 1 甲醇:色谱纯。4. 2 甲酸:色谱纯。4. 3 乙睛:色谱纯04.4 盐酸。4.5 氨水。4.6 O.lmol/L盐酸溶液:取盐酸9mL
4、，用水定容至1000mL。4. 7 盐酸甲醇提取液:取0.1mol/L盐酸(4.6)200mL，加入甲醇800mL混匀。4.8 0.2%甲酸溶液:取1mL甲酸，用水定容至500mL。4.9 0.2%甲酸乙睛水榕液:取0.2%甲酸洛液(4.8)80mL，与20mL乙睛棍合。4.10 5%氨水甲醇榕液:取5mL氨水与95mL甲醇混合。4. 11 盐酸可乐定对照品:纯度二三98%。4.12 盐酸赛庚睫对照品:纯度二三98%。4. 13 可乐定标准贮备被配制:精密称取盐酸可乐定对照品(4.11)适量，加入适量的水溶解，再用甲醇定容，配制成含可乐定浓度约为1mg/mL的标准贮备液，20C80C冷藏保存，
5、有效期六个月。4.14 赛庚院标准贮备液配制:精密称取盐酸赛庚院对照品(4.12)适量，用甲醇配制成含赛庚脏浓度约为1mg/mL的标准贮备液，20C80C冷藏保存，有效期六个月。农业部1486号公告一2-20104. 15混合标准工作液:分别吸取乐定贮备液(4明赛庚脏贮备液(4吨量，置于棕色容量瓶中，用0.2%甲酸乙睛水溶液(4.的稀释成可乐定和赛庚睫浓度均为o.5g/L、1.0g/L、5.。g/L、10.。g/L和50.0g/L的系列对照品工作液，现配现用。4. 16 固相萃取小柱:混合型阳离子交换柱，60mg/3mL;或其他性能类似的小柱。5 仪器和设备| 5. 1 液相色谱串联质谱仪:配
6、有电喷雾电离源。5.2 天平:感量为0川g和ohg各一台。5. 3 旋转蒸发仪。5. 4 离心机:最大离心力不低于8:000 g。5. 5 粉碎机。5. 6 振荡器。5. 7 旋涡振荡器。5. 8 滤膜:0.22m，水系。6 试样制备按GB/T14699.1采样。选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T 20195制备试样，粉碎过。山m孔径筛，充分混匀，装人摩口瓶中备用。7 分析步骤7. 1 提取| 称取2g(精确至0.01g)试样16)于50mL离心管中，加人20.0mL盐酸甲醇提取液(4.7)，充分振荡20min，然后离心10min(离心力8000剖，上清液备用。7.2 净化固相萃取小
7、柱先用3mL甲醇，3mL 71160.1 34 230.2213. 1 43 2. 10 ( Clonidine) 230. 2213. 1 24 赛庚q定288.2 191. 2 30 288.2 191. 2 38 4. 58 ( Cyproheptadine) 288.2215.2 45 7. 3. 3 定性测定每种被测组分选择1个母离子、2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与对照品混合工作液中对应的保留时间偏差在+2.5%之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的对照品工作液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判
8、定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差单位为%相对离子丰度允许的最大偏差50 土20nu 洒一1O20 :1: 30 三三10:f: 50 7. 3. 4 定量测定在仪器最佳工作条件下，对对照品混合工作液进样，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，被测组分浓度为横坐标绘制工作曲线。用单点或工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。上述色谱和质谱条件下，赛庚院和可乐定对照品的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.10 8 计算试样中可乐定或赛庚睫的含量以质量分数Xi计，数值以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算:Xi二CsX A
9、; X V1 X V 2 X 1 000 n . (1) A X m X V3 X 1 000 式中:m一一试样的称样量，单位为克(g); Cs一一药物标准工作溶液浓度，单位为微克每升(g/L); Ai一二样品溶液的色谱峰面积;A一一标准溶液色谱峰面积;V1一一一-试样中加人提取液的体积，单位为毫升(mL);V2一一上机前最终定容体积，单位为毫升(mL);V3一一提取液加入SPE小柱的体积，单位为毫升(mL);3 农业部1486号公告一2-2010 浓缩阳预混料稀释同平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 重复性| 在同一实验室由同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于2
10、0%。4 农业部1486号公告-2-2010附录A(资料性附录)可乐定和赛庚睫的液相色谱一串联质谱图(MRM色谱图)可乐定和赛庚脏的液相色谱串联质谱图(MRM色谱图)见图A.l。1 :MRM of 2 Channels ES+ 2.10 230.2213.1 (clonidine) 100 , -., T 1, 2.08e4 *-1 11 IIMji-fjj巳5.960-10. - -千.， 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 71 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 1 :MRM of 2 Channels ES+ 230.2 160
11、.1 (clonidine) 1.46e4 4.57 100-唱h1rr 1 o ii ; I ii ii i i i , i ii i ii I i ii i i ii ; I i川1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 2:MRM of 2 Channels ES+ 4.57 288.2 191.2 (cyproheptadine) 1001E t 1.45e5 o i i i i i i i i i i i 1; i i; i i i i i i (.:, i 111 i l ，目i;i i i i i i i Time 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 2:MRM of 2 Channels ES+ 288.2 215.2( cyproheptadine) 7.65e4 注:1.可乐定;rr .赛庚晓。圄A.1可乐定和赛庚院对照晶的液相色谱一串联质谱图(浓度为5f1-g/ L) 5
