1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准农业部1486号公告一6-2010饲料中雷琐酸内醋类药物的测定气相色谱一质谱法Determination of resorcylic acid lactones in feeds Gas chromatography-mass spectrometry method 2010-11-16发布2010-11-16实施C中华人民共和国农业部发布目IJ1=1 本标准遵照GB/T1. 1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:中国农业大学动物医
2、学院。农业部1486号公告-6-2010本标准主要起草人:沈建忠、丁双阳、程林丽、张素霞、李建成、吴聪明、曹兴元。农业部1486号公告-6-2010饲料中雷琐酸内醋类药物的测定气相色谱一质谱法范围本标准规定了饲料中雷琐酸内醋类药物的气相色谱质谱检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中-玉米赤莓醇、日-玉米赤霉醇、王米赤霉烯醇、R玉米赤莓烯醇、玉米赤莓烯酣和玉米赤霉闸的测定。本方法的检测限:饲料中6种需琐酸内醋类药物均为2g/kg。本标准的定量限:饲料中6种需琐酸内醋类药物均为5g/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的
3、版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 方法原理用甲醇提取试样中的雷琐酸内醋类药物，浓缩至干后用乙酷榕解。用乙酶一碳酸铀溶液液液分配除去水溶性杂质，-再次浓缩后用乙脂榕解。经乙睛一正巳烧液液分配除去非极性杂质，经HLB固相萃取柱进一步净化，衍生化后进气相色谱一质谱检测，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的二级水。4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 正
4、己烧。4.4 乙醋。4.5 元水碳酸销。4.6 元水硫酸铀。4. 7 衍生化试剂:N，O-双气甲基硅皖基-气氟乙酸胶十气甲基氯硅烧=99十1，即BSTFA十TMCSC99+1)。4.8 HLB固相萃取柱:规格为60mg。4.9 玉米赤莓醇(ZeranoD:纯度二三99%。4. 10 日玉米赤莓醇CTalcranoD:纯度二三99%。4. 11 =t三米赤莓闸CZearalanonc):纯度二三99%。4. 12 玉米赤莓烯醇(ZcaralcnoD:纯度二三99%。4. 13 日玉米赤每烯醇C- ZcaralcnoD :纯度二三99%。农业部1486号公告一6-20104. 14 玉米赤霉烯闸(
5、Zcaralenone):纯度二三99%。4.15 0.1%碳酸铀榕液:称取0.1g无水碳酸饷，加水榕解定容至100mL。4.16 雷琐酸内酣类药物标准贮备液(100g/mL):称取玉米赤霉阳、王米赤莓醇、自玉米赤霉醇、玉米赤霉烯醇、自王米赤霉烯醇和玉米赤莓烯酣(4.9、4.10、4.11、4.12、4.13、4.14)各0.019(精确到0.00001 g)于100mL容量瓶，用甲醇榕解稀释定容。-200C保存气个月。4. 17 雷琐酸内醋类药物标准贮备液(1g/mL):取100g/mL雷琐酸内醋类药物标准储备液(4.16)1 mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，40C保存一个月。4.
6、 18 标准工作液:取适量1g/mL混合标准储备液(4.17)，用甲醇稀释成0.001g/mL、0.01g/mL、0.05g/mL、O.1g/mL、O.5g/mL、1g/mL和10g/mL的标准榕液。4oC保存一周。5 仪器5.1 实验室常用仪器、设备。5. 2 气相色谱质谱联用仪(GC/MS)，配电子轰击离子源(ED。5. 3 分析天平:感量为0.01g和0.00001g。5. 4 离心机。5. 5 涡旋混合器。5. 6 旋转蒸发仪。5. 7 固相萃取装置。5. 8 恒温箱。6 采样与试样制备接GB/T14699. 1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定取1kg样品，四分法缩减取约2
7、00g , 经粉碎，全部过0.45mm孔筛，混匀装人磨口瓶中备用。7 分析步骤7. 1 提职称取5g(精确到0.01g)试样于50mL离心管中，加20mL甲醇，涡动1min, 3 600 r/min离心5mln，分离上清液至鸡心瓶中。下层残渣用20mL甲醇重复提取一次，离心，合并两次提取液。7.2 净化将样品提取液于500C减斥浓缩至干，加20mL乙酶，涡动30s，转移至50mL离心管中，加5mL 0.1%碳酸铀悔液(4.1日，轻摇数下，3800r/min离心5min，弃下层水相，再加5mL 0.1%碳酸饷榕液(4.15)重复操作一次，弃下层水相，有机相中加5g元水硫酸锅，300r/min振荡
8、10min, 3 500 r/ mm离心5min。转移上清液至鸡心瓶中，35oC 戚斥浓缩至于，加1mL乙睛挥手解。分取0.1mL于试管中，加0.9mL乙腊稀释，加0.5mL正己烧，手摇混合，静置1min，弃上层正己烧。下层中再加O.5 mL正己皖重复操作一次，充分除尽正己烧层。50oC氮气吹干。200L乙腊溶解，加800L7(稀释。备用。将HLB固相萃取柱安装于固相萃取装置L依次用2mL乙睛和2mL水预洗，将备用液过柱，5mL水淋洗，抽真空1mi凡4mL乙脂洗脱。上样持平液和洗脱液的流速均控制在1mL/min以内。500C氮气吹干，供衍生化用。同时，取500L标准工作液于试管中，50oC氮气
9、吹干，供衍生化用，作为对照标准品。7. 3 衍生化农业部1486号公告一6-2010加衍生化试剂100L，涡动榕解，600C衍生化15min，冷却至室温后供气相色谱一质谱测定。7.4 测定7. 4. 1 气相色谱条件气相色谱柱:DB5MS柱，30mXO. 25 mmXO. 25m。载气:氮气。载气流速:1. 0 mL/min。进样口温度:2500C。进样量:2L，不分流。柱温程序:起始1200C，以150C/min速度升至2800C，保持10min。7.4.2 质谱条件电子轰击离子源(El)。电子轰击能:70 evo 离子源温度:2300C。四极杆温度:1500C。榕剂延迟:7min。检测模式
10、:选择离子检测。6种雷琐酸内醋类药物的定性离子和定量离子见表1。表1雷琐酸内醋类化合物的定性离子和定量离子药物i东.1.米赤霉酣1.米赤霉烯酬:王米赤莓醇p玉米赤霉醇玉米赤霉烯醇-王米赤霉烯醇7. 4. 3 气相色谱一质谱测定7. I. 3. 定性测定定性离子，m/z449 ,150,335 ,307 462 ,129 ,333 ,305 523 ,133,335 ,307 523 ,133,335 ,307 536 ,131 ,333 ,305 536 ,131, 333 ,305 定量离子，m/z119 333 133 133 305 305 根据试样梅液中药物的含量，选择峰面积相近的标准
11、工作液和样品榕液等体积参插进样。通过气相色谱保留时间与质谱选择离子共同定性。样品中待测药物与标准物质的保留时间相对偏差不大于1%，而且其选择离子的相对丰度的差异不大于20%06种药物的标准榕液总离子流子色谱图见图八.1。7.4.3.2 定量测定分别取适量试样榕液和相应浓度的标准工作液，作单点校准或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，试样液进样过程中应参插标准工作液，以便准确定量。试样液进样过程中应参插标准T作液，以便准确定量。8 结果计算与表达饲料中需琐酸内醋类药物的含量x，以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算:CXVXn x= 一一(1) 1 式中:C一试样液中对应的雷琐酸内醋类药物的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一试样液总体积，单位为毫升(mL);3 农业部1486号公告一6-2010n 稀释倍数;m一-一试样质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留气位有效数字。9 精密度在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于20%。4
