1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准农业部1486号公告一7-2010饲料中9种磺肢类药物的测定高效液相色谱法Determination of nine sulfonamides in feeds一High performance liquid chromatography 2010-11-16发布2010-11-16实施;k中华人民共和国农业部发布目。吕本标准遵照GBjT 1. 1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料t业标准化技术委员会CSACjTC76)归口。本标准起草单位:中国农业大学。本标准主要起草人:任丽萍、孟庆翔、周
2、波、李永山、周振明、郭凯军。农业部1486号公告一7一2010I 农业部1486号公告一7-2010饲料中9种磺肢类药物的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中9种磺胶类药物的高效液相色谱检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混料中磺胶醋酷、磺胶略脏、磺胶口比皖、磺胶二甲基嘈脏、磺胶对甲氧贴嗦、磺胶甲基异略略、磺胶间甲氧嘻脏、磺胶二甲氧喃脏、磺胶哇口恶琳含量的测定。本方法的检测限为0.1mg/kg，定量限为0.5mg/峙。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包拓所有的修改
3、单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理试样中的磺股类药物经乙酸乙醋超声提取后，用氨基固相萃取柱净化，用高效液相色谱法检测，外标法定量。4 试剂和溶液以下所用试剂，除特别注明外均为分析纯试剂。4. 1 水:色谱用水应符合GB/T6682规定的一级水。4.2 乙酸乙醋。4.3 正己烧。4.4 冰乙酸:优级纯。4.5 乙睛:色谱纯。4.6 甲醇:色谱纯。4. 7 洗脱液:乙睛+甲醇十水+乙酸=2十2十9十O.2。4.8 流动相4.8.1 A液:乙睛(4.5)与甲醇(4.6)以1: 1的体积比混合
4、摇匀，脱气，备用。4.8.2 B液:在1000mL容量瓶中加人1mL冰乙酸(4.4)用去离子水定容为乙酸榕液(0.1%)，混合摇匀后过O.45m滤膜，脱气，备用。4.9 9种磺胶类药物标准品:磺胶醋酷、磺胶喃脏、磺胶毗皖、磺胶二甲基喃脏、磺胶对甲氧贴嗦、磺胶甲基异略略、磺胶间甲氧喃脏、磺胶二甲氧喃皖、磺胶哇昭琳，纯度均大于97%。4. 10 标准溶液4. 10. 1 标准贮备液:准确称取磺胶药物的标准品100mg(精确至0.0001g)，分别置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇(4.6)超声使之完全榕解，并定容至刻度，摇匀。该榕液中磺胶药物的浓度为1mg/mL, 农业部1486号公告一7-201
5、0于一18oC保存，有效期6个月。4. 10.2 标准中间液:准确移取9种磺胶标准贮备液(4.10.1)5mL分别于50mL棕色容量瓶中，用甲醇(4.6)定容至刻度。该榕液浓度为100g/mL，于4oC保存，有效期1个月。4. 10.3 标准丁-作液:准确移取9种磺胶标准中间液(4.10.2)5 mL分别于50mL棕色容量瓶中，用20%的甲醇(4.6)水榕液定容至刻度。该辞辛液中磺胶浓度为10g/mL，当日使用。4. 10.4 混合标准t作液:分别移取各磺胶药物标准中间液各5mL于50mL棕色容量瓶中，用20%甲醇(4.6)水洛液定容至刻度。该溶液中磺胶药物的浓度均为10g/mL，当日使用。5
6、 仪器设备5. 1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。5.2 分析天平:感量为0.001g和0.0001g。5. 3 璇涡混合仪。5. 4 旋转蒸发仪。5. 5 离心机。5. 6 过滤器:配0.45m的有机微孔滤膜。5. 7 超声波清洗机。5. 8 固相萃取装置。5. 9 氨基固相萃取柱:500mg/3 mL。6 试样的选取和制备按GB/T 14699. 1的规定采样，按GB/T20195的规定制备试样。7 分析步骤7. 1 提取称取2g(精确至0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加入乙酸乙醋(4.2)15mL，旋涡混匀，30oC水浴中超声提取3min，然后)J4000 r/ min离心3m
7、in，静置。将L清液转移到另一管中，重复提取残渣两次，合并上清液。将上清液转入梨形瓶中400C旋转蒸至近干。加入3mL乙酸乙醋(4.2)，充分摇匀恪解残渣。7.2 净化将上述榕解液过已经用5mL正己皖(4.3)、5mL乙酸乙醋(4.2)预淋过的氨基固相萃取柱(5.的。上样后，首先用5mL正己烧(4.3)淋洗此柱去除杂质，减fk抽干10min，然后用2mL洗脱液(4.7)洗脱，减压抽干10min收集洗脱液并定容为2mL，过O.45m滤膜供高效液相色谱分析。注:上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制在O.8 mL/ min 1. 0 mL/ mino 7. 3 测定7.3. 1 仪器条件色谱柱:C1
8、8色谱柱，柱长150mm，柱内径4.6mm，粒度3.5m，或性能相吁者;流动相:八液，乙睛甲醇1昆合液(4.8.1);B液，0.1%乙酸榕液(4.8.2);流动相梯度洗脱见表1。表1流动相梯度洗脱A液.%15 50 15 M川一协一部一切一部B-时间，mln。30 34 2 流速:o. 8 mL/ min; 检测波长:270nm; 柱温:室温;进样量:20L。7.3.2 样品测定农业部1486号公告一7-2010按(7.3.1)设置仪器条件，取相应的泪合标准工作液和试样榕液，做多点校准，外标法定量。标准榕液和试样榕液中9种磺胶类药物的响应值均在仪器检测线性范围之内。8 结果计算8. 1 饲料中
9、磺胶的含量按(1)式计算:14J.=Pz cz V.(1) P血Xm式中:叫一一试样中磺胶的质量浓度，单位为微克每克(g/ g); P;一一试样榕液峰面积值;V一一定容体积，单位为毫升(mL);c;一一标准榕液的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); p且一-标准济液峰面积的平均值;m一一试样的质量，单位为克(g)。8. 2 按平行测定的算术平均值报告结果，结果保留气位有效数字。9 重复性同一分析者在同一实验室使用同一台仪器，对同一试样进行平行测定结果的相对偏差:(15%。3 农业部1486号公告一7-2010附录A(资料性附录)9种晴肢类药物标准溶液色谱图mAU 6 2 3 4 5 11 11
10、 4 -1 3 2 6 。机二|lJL|LJliJI7 8 。nu l 15 5 磺胶酣敝32-磺胶i!&)脏$3 磺胶H比院;4 磺胶二甲主主峨院;5 磺胶对甲r怯嗦;4 20 6 磺胶41基异略略;7 磺胶问甲氧I密院;8 磺胶二甲氧i!&)院;9 磺胶I噎嗯琳。农业部1486号公告一7一2010附录B(资料性附录)9种横股类药物的中英文名对照、分子式和分子量磺胶药物11文名称磺胶药物英文名称分子式分子垃磺胶醋眈Sulfacetamide C; HlONz03S 211.2 磺胶阵定Sulfadiazine ClO HlO :-I4 Oz S 250.3 磺胶口比院Sulfapyridin
11、e Cl1 Hl1 :-I30 ZS 249.3 磺胶二甲主主哦昵Sulfadimidine C1Z H14 :-14 Oz S 278.3 磺胶对甲氧H达I臻Sulfamethoxypyridazine Cll H1Z=I403S 279.3 磺胶甲基异略I些Sulfamethoxazole ClO Hll =l303S 253.3 磺胶问甲氧嗜皖Sulfamonomethoxine CllH1Z、403S280.3 磺胶二甲氧略q定Sulfadimethoxine CZH14N404S 310.3 磺胶噎略琳(销盐)Sulfaquinoxaline sodium salt C14 H,z N4 Naz S 322.3 5
