1、ICS 65。020B 04中华人民共和国国家标准农业部953号公告一1042007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第4部分：生物多样性影响Evaluation of environmental impact of genetically modified plants andits derived products Insect-resistant maizePart 4：Impact on biodiversity20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部953号公告一10 42007本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。本标准由全国农业转基
2、因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、农业部科技发展中心。本标准主要起草人：王振营、刘信、彭于发、何康来、白树雄、厉建萌。本标准为首次发布。农业部953号公告一10 42007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第4部分：生物多样性影响1范围本标准规定了转基因抗虫玉米对生物多样性及家蚕和柞蚕的影响的检测方法。本标准适用于转基因抗虫玉米对玉米田主要靶标和非靶标害虫、优势天敌种群动态、地上节肢动物群落结构、玉米病害以及家蚕和柞蚕影响的检测，其中对家蚕和柞蚕影响的检测不适用于进口用做加工原料的转基因抗虫玉米的环境安全检测。2规范性引用文件下列文件中的条款
3、通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 44041粮食作物种子禾谷类NYT 7201 2003转基因玉米环境安全检测技术规范第l部分：生存竞争能力检测NYT 7203 2003转基因玉米环境安全检测技术规范第3部分：对生物多样性影响的检测农业部953号公告一101 2007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第1部分：抗虫性3术语下列术语和定义适用于本标准。3 1非靶标生物non-targe
4、t organism转基因抗虫玉米中的目的基因所针对的目标生物以外的其他生物。4要求4 1试验材料转基因抗虫玉米品种(系)和对应的非转基因玉米品种(系)。上述材料的质量应达到GB 44041中不低于二级玉米种子的要求。4 2隔离措施按农业部953号公告一1012007中“42隔离措施”执行。43其他要求按NYT 7201 2003中“3要求”执行。5检测方法5 1试验设计试验设计和播种按NYT 7203 2003的规定执行。5 2对玉米田节肢动物群落结构的影响1农业部953号公告一10420075 21调查方法5 2 1 1直接调查观察法按NYT 72032003的规定执行。5 2 1 2吸虫
5、器调查法按NYT 72032003的规定执行。5 2 1 3陷阱调查法用于地表节肢动物多样性比较。在玉米定苗后10 d开始到成熟，每10 d调查一次，每小区采用对角线5点取样，每点埋设3个塑料杯(015 cruxl0 cm)，杯中放有5的洗涤剂水，不超过杯容积的13，间隔05 m，在埋杯的第二天，调查杯中的节肢动物种类和数量，不易识别的种类进行编号，放人75乙醇溶液中保存，供进一步鉴定。5 2 2调查记录记录所有直接观察到的、用吸虫器抽取或陷阱法得到的节肢动物的名称、发育阶段和数量。5 23结果表述用节肢动物群落的多样性指数、均匀性指数和优势集中性指数3个指标，分析比较转基因抗虫玉米田昆虫群落
6、、害虫和天敌亚群落的稳定性。节肢动物群落的多样性指数按公式(1)计算。H一一式中：H多样性指数；P。NjN；P，lnPN第i个物种的个体数；N总个体数。计算结果保留2位小数。节肢动物群落的均匀性指数按公式(2)计算。一HlnS(2)式中：J一均匀性指数；H多样性指数；S物种数。计算结果保留2位小数。节肢动物群落的优势集中性指数按公式(3)计算。C一只(N：N)2(3)；2l式中：c优势集中性指数；N，第i个物种的个体数；N总个体数。计算结果保留2位小数。5 3对玉米田主要鳞翅目害虫的影响5 31调查方法每小区采用对角线5点取样，每点连续调查相邻4行的20株玉米，在心叶初期、心叶末期和穗期Z农业
7、部953号公告一10 42007(收获前)各调查1次。具体调查对象为靶标害虫亚洲玉米螟，其他鳞翅目害虫棉铃虫、甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Habner)、黏虫、高粱条螟Proceras vennosatum(Walker)、桃蛀螟Conogethes punciferalis(Guen6e)等主要鳞翅目害虫。心叶初期分别调查玉米心叶被棉铃虫、甜菜夜蛾或黏虫为害情况，心叶末期调查玉米心叶被亚洲玉米螟为害情况，收获前剖秆(包括雌穗)调查玉米植株被害情况。对于亚洲玉米螟、高粱条螟和桃蛀螟还应调查蛀孔数和幼虫存活数。53 2调查记录记录不同时期观察到的鳞翅目害虫的种类、数量和玉米被害株
8、数和被害情况。5 3 3结果表述确定转基因抗虫玉米对主要鳞翅目害虫的影响，按公式(4)计算。E=铲100(4)式中：E一 控制效果，单位为百分率()D非转基因对照玉米小区受害植株数或虫数；T转基因抗虫玉米小区受害植株数或虫数。计算结果保留2位小数。5 4对玉米田主要非靶标害虫玉米蚜的影响54 1调查方法5 4 1 1直接调查观察法从定苗后lO d到成熟，每7 d调查一次，每小区采用对角线5点取样，每点固定5株玉米。记载整株玉米蚜(Rhopalosiphum maidis Fitch)的数量。54 1 2吸虫器调查法在玉米定苗15 d后调查第一次，以后在玉米心叶中期、心叶末期、花丝盛期和灌浆后期
9、各调查1次，共计5次，每小区采用对角线5点取样。每点用吸虫器抽取5株玉米(全株)及其地面1 m2范围内的所有节肢动物种类。将抽取的样品带回室内清理和初步分类后，记录其中玉米蚜的数量。5 4 2调查记录记录不同蚜虫的种类和数量。5 4 3结果表述根据转基因抗虫玉米和对照玉米不同生育期玉米蚜的数量，评价转基因抗虫玉米对玉米蚜的种群数量动态的影响。55对玉米病害的影响按NYT 72032003中“534”的规定执行。5 6对家蚕和柞蚕的影响56 1玉米花粉的采集在玉米雄穗抽出、尚未散粉前，用授粉袋将玉米雄穗套住，每小区套10株玉米。在玉米散粉盛期，分别将转基因抗虫玉米和非转基因对照玉米花粉取回到实验
10、室中。采集的花粉用200目的分样筛过筛，除去花药等杂质，放入50mL离心管中，迅速用液氮冷冻后放入一20冰箱中保存备用。5 6 2不同浓度玉米花粉叶片的制备将转基因抗虫玉米和非转基因抗虫玉米花粉按每毫升蒸馏水0 mg、1 mg、5 mg和10 mg的花粉量分别制成不同花粉浓度的悬浮液，将新鲜桑叶或柞树叶片分别放人不同浓度的花粉悬浮液中，并充分摇动，使花粉均匀分布在叶片上，然后取出晾干，制备成0、100、500和1 000粒em2花粉浓度桑叶或柞树叶片，以对应的非转基凶玉米花粉作对照。3农业部953号公告一1 0420075 6 3检测方法取直径20 cm的培养皿，底部铺一湿润的滤纸，放人沾有玉
11、米花粉的新鲜桑树或柞树叶片，然后接人20头家蚕(Bombyxmori L)或柞蚕(Antheraeapernyi Gu6rinM6neville)的初孵幼虫(蚁蚕)，每2d更换一次新鲜叶片，检测在25。C，光照周期16L：8D条件下进行，到第七天结束，每处理重复5次。5 6 4调查记录每二天检查取食沾有玉米花粉叶片的家蚕或柞蚕初孵幼虫的存活率，检查时用毛笔尖轻触虫体无反应为死亡判断标准，第七天对存活的幼虫称重。5 65结果表述根据在取食沾有不同浓度转基因抗虫玉米花粉和对应的非转基因玉米花粉桑叶或柞树叶家蚕或柞蚕初孵幼虫第七天的死亡数和幼虫体重是否存在显著差异，评价转基因抗虫玉米花粉对家蚕和柞蚕的影响。6结果分析采用方差分析方法比较转基因抗虫玉米与非转基因玉米对主要鳞翅目害虫、非靶标害虫蚜虫的种群动态、优势天敌种群数量、地上节肢动物多样性、群落结构以及主要病害的影响。
