1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部958号公告一112007水产品中吡喹酮残留量的测定液相色谱法Determination of praziquantel residues in fishery productsHigh performance liquid chromatography20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 昌农业部958号公告一”一2007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院东海水产研究所。本标准主要起草人：
2、于慧娟、沈晓盛、蔡友琼、毕士川、黄冬梅。I农业部958号公告一112007水产品中吡喹酮残留量的测定液相色谱法1范围本标准规定了水产品中吡喹酮残留量的液相色谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中吡喹酮残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理以乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮，经硅胶柱净化后，用反相色谱柱分离，
3、紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料所有试剂应在吡喹酮出峰处无干扰峰。试验用水应符合OBT 6682一级水的要求。41毗喹酮标准品：纯度大于99。42正己烷：色谱纯。43丙酮：色谱纯。44乙醚：色谱纯。45乙酸乙酯：色谱纯。46乙腈：色谱纯。47毗喹酮标准溶液：准确称取吡喹酮0。010 0 g，乙腈溶解，定容至100 mL，此液浓度为100 ggmL。一18避光保存，保存期2个月。临用前用乙腈配制成所需浓度。48乙醚正己烷混合溶液：量取60mL乙醚，加入到40mL正己烷中。49丙酮一正已烷混合溶液：量取60mL丙酮，加人到40mL正己烷中。4 10层析用碱性氧化铝：100目200目。4 1
4、1 固相萃取柱：500 mg6 mL LCSi柱或性能相当的硅胶柱。5仪器5 1高效液相色谱仪：具紫外检测器。5 2电子天平：感量00001 g和00l g各一台。53均质机。5 4离心机：4 000 rmin。农业部958号公告一11200755旋转蒸发器。56固相萃取装置。57氮吹仪。6测定步骤61样品处理611制样鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳、去肠腺，取肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食部分，样品均质混匀。一18(2以下冷冻保存备用。612提取将样品解冻，称取3 g样品(准确至001 g)置于50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质30 s，加入109碱性氧化铝，震荡10mi
5、n，4 000 rmin离心iomin，将乙酸乙酯层移人100mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50 mL离心管，加入20 n1L乙酸乙酯，清洗均质机30 s，将此液倒人上述残渣中震荡提取iomln，4000 rrain离心10min，将乙酸乙酯层合并至100mL梨形瓶中，于30减压蒸干乙酸乙酯，用10 mL正已烷溶解残渣。613净化将612中的正己烷溶液加人到硅胶柱中(硅胶柱临用前用6mL丙酮、6inL正己烷依次进行活化)，流速控制为每秒一滴，然后用2mL正己烷洗梨形瓶并将溶液加入到柱中，用6mL乙醚正己烷混合溶液(48)洗硅胶柱，弃去流出液，将柱子吹干，用8 mL丙酮一正己烷混合溶液(49)洗
6、脱，将洗脱液接收至离心管中，于50C下氮气吹干。用ImL乙腈溶解残渣，旋涡混合1min，过045“m滤膜后，供液相色谱分析。62样品测定621测定条件6211色谱柱：ZORBAX-SB C1B柱(250 mmX46 mm，5 vm)或性能相当的色谱柱。6212流动相：乙腈+水，梯度洗脱程序见表1。62 1 3流速：09mLmin。6 2 1 4柱温：25。C。6 215进样量：30“L。621 6检测波长：214m。表1流动相梯度洗脱程序时间 乙腈 爿(nun 00 50 5011o 50 50l】1 100 015o IOO o151 50 5021o 50 506 2 2色谱分析分别注入3
7、0“L吡喹酮标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行分析，记录峰面积或峰高，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据吡喹酮标准品的保留时间定性，外标法定2量。标准品色谱图参见附录A。7空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算样品中吡喹酮的残留量按公式(1)计算，计算结果需扣空白值。y一垦丕垒丕旦丕!一 A。m式中：X样品中吡喹酮的残留量，单位为微克每千克(口gkg)；e吡喹酮标准溶液浓度，单位为微克每毫升(rcgmL)；A样品中吡喹酮的峰面积或峰高；卜样品定容体积，单位为毫升(mL)；A；吡喹酮标准溶液的峰面积或峰高；m样品称样量，单位为克(g)。9方法回收率方法回收率70。10方法检出限方法检出限：10 pgkg。11精密度两次平行测定结果相对标准偏差15。12方法线性范围方法线性范围：002,gmL20“gmL。农业部958号公告一1 12007农业部958号公告一”2007附录A(资料性附录)色 谱 图0 6图A 1吡喹酮(Praziquantel)液相色谱分离谱图(吡疃酮：8 395rain)lO86420
