1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部958号公告一52007鸡可食性组织中泰乐菌素残留检测方法高效液相色谱法High performance liquid chromatographic method for thedetermination of Tylosin residues in edible tissues of chicken20071229发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 吾本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准由华中农业大学负责起草。本标准主要起草人：袁宗辉、陈冬梅、陶燕飞、王玉莲、黄玲利、范盛先、彭大鹏
2、、刘振利、戴梦红。本标准系首次发布的行业标准。1范围农业部958号公告一52007鸡可食性组织中泰乐菌素残留检测方法高效液相色谱法本标准规定了鸡可食性组织中泰乐菌素残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于鸡肌肉和肝脏组织中泰乐菌素的残留量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 11 2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则(IS
3、OIEC Directives，Part 3，1997，Rules for the structure and drafting of International Standards，NEQ)OBT 6682-1992分析实验室用水规则和试验方法农业部农牧发200311号兽药残留试验技术规范(试行)3制样31样品的制备取新鲜或冷冻空白组织、供试组织，去除筋膜，绞碎，5 000 rmin均质5 min。32样品的保存20贮存备用。4测定方法4 1方法提要或原理肌肉组织用乙腈提取，肝脏组织用pH 25磷酸缓冲液和乙腈提取。提取液用C。e柱固相萃取净化，乙酸铵溶液洗脱，氮气吹干，甲醇溶解，高效液相色
4、谱仪(紫外检测器)测定，外标法定量。4 2试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外均为分析纯；水为符合GBT 6682-1992规定的二级水。4 2 1酒石酸泰乐菌素标准品：含量994 2 2乙腈：色谱纯。4 2 3甲醇：色谱纯。42 4 磷酸。425磷酸二氢钠。4 2 6甲酸铵。4 2 7 乙酸铵。4 2 8 C。8固相萃取柱：100 mg3 mI。4 2 9甲酸铵溶液0 1 moLL称取甲酸铵63 g，用水溶解并稀释到1 000 mL，配成01 mol。I，甲酸铵溶液，045 pm膜过滤。1农业部958号公告一520074210磷酸缓冲液0 1 tooLL称取磷酸二氢钠156 g，用水溶解，
5、磷酸调整pH为25，用水稀释到1 000 mL，配成01 toolL磷酸缓冲液。4 2 11乙酸铵溶液0 1 tooLL称取乙酸铵77 g，用甲醇溶解稀释到1 000 mL，配成01 tooLL乙酸铵溶液。4212泰乐菌素标准贮备液精确称取泰乐菌素100 mg，用甲醇溶解，定容至100 mI。，配成100 pgmL的标准贮备液，置于一20以下冰箱中保存，有效期3个月。4 3仪器和设备431高效液相色谱仪(配紫外检测器)。4 3 2分析天平：感量0000 01 g。43 3冷冻高速离心机。434匀浆机。4 3 5旋涡混合器。436循环水真空泵。44测定步骤441试料的制备试料的制备包括：一 取均
6、质后的供试样品，作为供试材料。取均质后的空白样品，作为空白材料。442提取准确称取试料10 g+005 g，置于具塞离心管中，)JnK,腈10mL旋涡混合2min，10 000 rmin4。C离一615 min，取上清液于离心管中，再在试料中加乙腈10 mI，重复提取一次。合并上清液，10 000 rmin4。C离心10 rain。取上清液于圆底烧瓶中，45。C水浴减压蒸馏至近干，加水50 ml。溶解残渣，待净化。443净化用甲醇3 mI和水3 mL活化固相萃取柱，将提取液过柱，控制流速小于2 mI。min。用水5 mL和400甲醇1mL淋洗，用01tooLI，乙酸铵溶液1mL洗脱，收集洗脱液
7、。在40C45。C水浴条件下氮气吹干，用10 mI，甲醇溶解残渣，10 000 rmin离心5 rain，取上清液供高效液相色谱分析。4 4 4标准曲线的绘制准确移取泰乐菌素标准储备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为01 pgmL、02 pgmL、04 pgmL、08 pgmL、16 pgmI3 2 pgmL的标准工作液，分别取20 pL供高效液相色谱分析，每个浓度重复3次，将测得的峰面积与对应浓度拟合，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。4 4 5测定445 1液相色谱条件色谱柱：C18柱，5 tLm，200 mmX 46 mrll。流动相：甲醇乙腈甲酸铵溶液(o1 moLL)比例为：103
8、555，VV。流速：1。0 mLrain。紫外检测波长：286 13113,。进样量：20“I。柱温：30。445 2色谱测定2农业部958号公告-5-2007取试样溶液和相应的标准溶液做单点或多点校准，按外标法，以峰面积定量，即得。泰乐菌素标准溶液和试样溶液的液相色谱图见附录A。45空白试验除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。46结果计算和表述试料中泰乐菌素药物的残留量(且gkg)，按式(1)计算：ACsV“A5W式中：x一一试料中泰乐菌素药物残留量，“g蛞；A试样溶液中泰乐菌素的峰面积；Ar一标准工作液中泰乐菌素的峰面积；已标准工作液中泰乐菌素的浓度，“gL；v一一溶解残余物所得
9、溶液体积，mL；w组织样品质量，g。5检测方法的灵敏度、准确度、精密度51灵敏度本方法在鸡肌肉和肝脏组织中的检测限为20 t,gkg，定量限为50 ptgkg。52准确度本方法在鸡肌肉和肝脏组织中添加20 pgkglOO pgkg浓度的回收率为70110。53精密度本方法在鸡肌肉和肝脏组织中，批内、批问变异系数CV、15。农业部958号公告一520074mAU86420-2mA1附录A(资料性附录】高效液相色谱图O图A 1泰乐菌素标准工作液(01gmL)色谱图图A 2鸡肌肉组织添加浓度(20 Ilgkg)色谱图图A3鸡肝脏组织添加浓度(20 Fgkg)色谱图们九Lnii、一fj，jj，n一IniU一一f一：，副
