1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部958号公告一92007动物可食性组织中阿苯达唑及其主要代谢物残留检测方法高效液相色谱法High performance liquid chromatographic method forthe determination of albendazole and its main metabolites residuesin edible tissues of animal20071229发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 置农业部958号公告92007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标
2、准起草单位：华中农业大学。本标准主要起草人：袁宗辉、陈冬梅、陶燕飞、范盛先、王玉莲、黄玲利、彭大鹏、刘振利、戴梦红。本标准系首次发布的行业标准。农业部958号公告9-2007动物可食性组织中阿苯达唑及其主要代谢物残留检测方法高效液相色谱法1范围本标准规定了动物源食品中阿苯达唑及其主要代谢物阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏组织中阿苯达唑及其主要代谢物阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本
3、标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 112000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(isoIEC Directives，Part 3，1997，Rules for the structure and drafting of International Standards，NEO)GBT 6682-1992分析实验室用水规则和试验方法农业部农牧发200311号兽药残留试验技术规范(试行)3制样31样品的制备取新鲜或冷冻空白组织、供试组织，去除筋膜，绞碎，5 000 rmin均质。3 2样品的保
4、存-20以下贮存。4测定方法41方法提要或原理试料中残留的阿苯达唑及其主要代谢物阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜，经乙醚提取，乙腈和正己烷萃取，供高效液相色谱(紫外检测器)测定，外标法定量。4 2试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GBT 6682规定的二级水。42。1阿苯达唑及代谢物对照品：阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜含量均99。422正己烷。423乙腈：色谱纯。424甲醇：色谱纯。4 2 5乙醚4 2 6磷酸氢二钠。1农业部958号公告一92007427磷酸二氢钠。4 2 8冰乙酸。4 2 9阿苯达唑及代谢物标准贮备液取阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜对照品各约1
5、0 mg，用甲醇溶解，定容至100 m1，4。C保存，有效期1个月。4 2 10磷酸缓冲液0 2 tooLL)取十二水合磷酸氢二钠7164 g，加水溶解并稀释至1 000 mL为甲液；取二水合磷酸二氢钠3120g，加水溶解并稀释至1 000 mL为乙液。取甲液810 mL、乙液190 mL，混匀。421 1 阿苯达唑及代谢物标准工作液取阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜标准贮备液，用流动相稀释成适当浓度的标准工作液，现配现用。4 3仪器和设备4 3 1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。432分析天平：感量0000 01 g。4 3 3天平：感量001 g。434匀浆机。4 3 5离心机。4 3
6、 6旋涡混合器。437超声波清洗机。4 4测定步骤4 4 1试料的制备试料的制备包括：一一取均质后的供试样品，作为供试试料。一一取均质后的空白样品，作为空白试料。取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。4。4。2提取称取试料5 g+O05 g，置带盖离心管中，加磷酸缓冲液5 mL，旋涡混合3 rain，静置30 rain；沸水浴加热2 min，冷却，加乙醚10 mL，旋涡混合10 mln，4 000 rrain离心20 rain。移取乙醚层，残渣加乙醚10mI，混匀，离心。合并乙醚层，30。C水浴氮气吹千。加乙腈5mI。，旋涡混合5rain，置4。C冰箱中过夜。4 4 3
7、净化取出提取液，4 000 rmin离心20 rain，取上清液，加正己烷4 mL，旋涡混合30 S，3 000 rrain离心10mln，弃正己烷，重复两次。乙腈相在55水浴中氮气吹干。加流动相05 mI。，旋涡混合5 rain，3 000 rrain离心10 rain，取上清液，供高效液相色谱分析。444标准曲线的制备准确吸取适量阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜的标准贮备液，用流动相稀释，制成浓度为50 ugL、100 pgL、200gL、400gL、800 ugL、1 600 ugI。、3 200 ugL的混合标准工作液，供高效液相色谱分析。445测定445 1色谱条件色谱柱：C18柱
8、，300 mmX40 mm(id)，粒径5“m或相当者。检测波长：292 nm。2进样量：t00L。流动相：A相：乙腈，B相：水，c相：10冰乙酸。表1梯度洗脱程序农业部958号公告92007时间 A相 B相 C相 流速(rain) () () () (mli|rain)0 20 60 20 18 30 50 20 130 55 25 20 131 20 60 20 14 4 5 2测定法取适量试样溶液和相应的标准工作液，作单点或多点校正，以色谱峰面积积分值定量。阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜色谱图见附录A。45空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4 6结果计算和表述
9、试料中阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜的残留量(tzgkg)，按式(1)计算：、，一ACsXV ，1、“一ij矿L1式中：x试料中阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜残留量，t,g妇；A试样溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜的峰面积；As标准工作液中阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜的峰面积；G标准溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜的浓度，gL；V溶解残余物所用流动相的体积，mL；w组织样品质量，g。注：计算结果扣除空白值，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后两位。5检测方法灵敏度、准确度、精密度5 1灵敏度本方法的检测限为5 pgkg，猪、牛、羊肌肉组织中的定量限为10 pgkg，肝脏组织中的定量限为30“gkg。5，2准确度本方法在lO t,gkg300“gkg添加浓度时，回收率为70110。5 3精密度本方法的批内、批间变异系数CV20。农业部958号公告920074mAU202-46附录A(资料性附录)阿苯达唑及其代谢物高效液相色谱图l卜一 图A 2羊肌肉添加药物(10峙kg)色谱图2 5 5 7 5 10 l 2 5 15图A 3羊肝脏添加药物(30 Igkg)色谱图
