1、ICS 67:220.20 X 41一3 中华人民共和国国家标准GB 20713-2006 F 食品添加剂-乙酷乳酸脱竣酶制剂Fod additive一-acetolactatedecarboxylase preparation 2006-07-18发布罐急中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局;由与/中国国家7标准化管理委员会 2007-05-01实施发布GB 20713-2006 目次前言. . . III 引言. . . . . . - IV I 范围.2 规范性引用文件3 术语和定义. . 4 要求-5 试验方法.飞.26 检验规则-. 3 7 标志、包装、运输和贮存. 3 附录A(规
2、范性附录)a-乙酷乳酸脱竣酶酶活力的测定分光光度法.4附录B(规范性附录)a-乙酷乳酸脱竣酶郁活力的测定全自动生化分析仪法，. 7 I GB 207132006 前言本标准的4.3为强制性条款，其余为推荐性条款。本标准的附录A和附录B为规范性附录.本标准由中华人民共和囡国家食品药品监督官理局提出.本标准出全国食品发酵标准化中心和中国疾病预防控制中心营养与食品安全所归口.本标准起草单位诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁邦尔克生物技术有限责任公司。本标准主要起草人:霍文景、黄日波、田惠光、侯炳炎、回栖静、信力行、商继尚、赵力、蒙健宗。111 GB 20713-2006 百|-F司-乙M乳酸脱竣酶
3、是目前广泛用于啤酒生产的食品添加剂。在GB2760-9961997年增补品种中，己批准了-乙酷乳酸脱竣酶可以在啤酒工艺中按照正常生产需要适量使用.合本标准参考了联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会(JECFAH食品加工用酶创剂的通用规范和说明(食品添加剂标准纲要，附件9)以及美国4食品化学品法典第4版(FCC-N)第3增刊中的有关要求，同时根据我国国情增加了菌落总数、重金属和碑的要求。生产商在使用该标准的同时，建议同时参照相应法律、法规和规范(如采用良好操作规范等)，进步提高产品的安全性.本标准附录A的方法修改采用ECFA方法，附录B的方法参考了诺维信生物技术有限公司的全自动生
4、化分析仪法。H GB 20713-2006 食品添加剂-乙酷乳酸脱搓酶制剂1 范围本标准规定了r乙酷乳酸脱竣酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。-田=-_撞地2 规范性引用文件的修改单(不包括勘误3. 1 3短基2-丁酣(乙偶姻)，即为1个酶活力单位，以U/g(或U/mL)表示。注lU=1000mU.4 要求4. 1外1现液体剂型淡黄色、棕色至褐色液体。无异味。无明显沉淀平11分层.4.2 理化要求应符合表1的规定。GB 20713-2006 表1理化要求|酶活力/(川4.3 卫生要求应符合表2的规定。项目指标1 500 表2卫生要求项目指标重金属以铅(Pb)
5、计/(mg/kg) 30 铅/(mg/kg)、产5 碑/(mg/kg) . 运二3 囱部毡数/CFU/mL(或CFU/g)t 、50 x 10 大肠菌群/MPN/JOOmL(.x. MPN/lOO g) r 飞3 X 10 . 沙门氏菌/(个/25g) 不得检出致泻大肠埃希氏菌/(个/25g) 不得检出4.4 净含量见标签标注，允许差按国家质量监督检验检疫总局2005J第75号令执行。5 试验方法好怖队并断判出作观仇儿咿/其查检视同口再昧法气裁其付闰为嗅法中方杯也烧白。hdA J 的录止附n以EJ 。人定倒浦00川叩加旧旧旧驰也也也卢巳呵叫咱呻检检检菌检。或Jkh们盯川234氏6金山附侃侃侃脱
6、脱浦脱缸n丰咄心心。777#7omLUUUU蚊川群川菌门肠口量川力属/崽/菌/氏/大规阳活帧金臼臼落肠臼叮叮南阳时wkl丰酶l重铅呻茵大致;，勾，取。按按按按按按i按E按按nu 1录2345678911 5t555555555 2 GB 20713-2006 6 检验规则6. 1 组批以每一个发酵批次生产或最终同处于一个加工贮罐、品质均一且经包装出厂(或入库)的产品为一批。6.2 抽样抽样时，应采用适宜的方法以保证具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁e对用于微生物检验的取样，应使用无菌操作。成品抽样的样本量见表3。灌装过程中取样的样本量可按照估计的批量参照表3执行，或由生产企业和或)相关方确
7、定。表3抽样量批量/瓶(或件样本量/瓶(或件35 000 13 6. 3 出厂检验每批产品出厂时，应对其外观、酶活力、微生物指标、净含量及包装标签等进行逐项检验。6.4 型式检验正常生产时，至少每年对产品检验一次。如有下列情况之一者，亦应按本标准全部要求进行检验一一正常生产时，如原料、配方或工艺有较大改变，可能影响产品质量时，一一更换设备，或产品长期停产又恢复生产时;一-一出厂检验结果与平常记录有较大差别时;一一一国家质量监督部门提出要求时。6. 5 步IJ定规则出厂检验和(或)型式检验合格时，由质量检验部门出具产品合格证。出厂检验和(或型式检验不合格时，在原批次基础上加倍抽取样品进行复验。如
8、复验仍不合格，贝IJ判该批产品为不合格。7 标志、包装、运输和贮存7. 1 标志产品的外包装宜使用符合GBjT191要求的标志。产品的内包装上应贴有牢固的标签。产品的标签的内容应符合卫生部2002J第26号令第四章的要求。标识内容应包括产品名称、厂名、广址、规格、配方或主要成分、生产日期、批号或代号、保质期限、执行标准号和卫生许可证号等，并在标识上明确标示食品添加剂字样。7.2 包装产品的内包装应采用国家批准的、并符合相应食品包装用标准的材料。包装容器及内涂料应采用国家批准的、并符合相应食品包装用标准的材料。7.3 运输产品在运输过程中应轻拿轻放，严防雨淋和曝晒。运输工具应li洁?无毒、无污染
9、。严禁与有毒、有害、有腐蚀性的物质混装混运团7.4 贮存产品应贮存在阴凉干燥的环境下。严禁与有:t器、有害、有腐蚀性的物质同存。7.5 保质期产品的保质期具体见标签标注。产品在100C下的保质WJ应大于三个月。3 、GB 20713-2006 附录A(规范性附录-乙酷乳酸脱竣酶酶活力的测定分光光度法A. 1 范围A.3 试剂A. 3. 3 荼酣(10.0L)/肌酸(1.0 g/L)显色剂分别称取1茶盼5.0g和肌酸0.5g移入500mL容量瓶中，用约1mol/L的氢氧化纳溶液溶解并定容。该溶液使用前配和tl配制时需避光，并且冰浴。注意，1荼盼可燃，有毒。对眼和粘膜有刺激性。吞咽或经皮肤吸收都能
10、引起中毒。A. 3. 4 乙偶姻。-经基-2-丁丽)储备液(1.000 g/L) a) 取一定量的乙偶姻于民管中，在37C恒温箱中溶解。然后将试管置于冰水中使乙偶姻重结1) Brij 35是适合的市售产品的实例.给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对这一产品的认可，4 G 20713-2006 晶。重结晶后，乙偶姻不含有影响试验结果的乙偶姻二聚体，可用于储备液的配制。b) 称取重结品后的乙偶姻0.100g.精确至0.0001g.移入100mL容量瓶中，用水溶解并定容。乙偶姻对热不稳定，且容易吸潮，因此应放置在干燥器中冷藏(2C6C)保存。如发现物质有明显的吸潮现象，建议放弃不用.该溶
11、液在冷藏条件下的保存期为一周。A. 3. 5 乙偶姻标准溶液乙偶姻标准溶液，用乙偶姻储备液(A.3.4)和水按照表A.j稀释而成，该溶液应每天配制.标准点2 3 4 5 6 a 用水做第一A.4 仪器A. 4.1 A. 4. 2 A. 4. 3 恒温A. 4. 4 分光A. 4. 5 A. 4. 6 A.5 分析步骤A. 5.1 乙偶姻标准曲线表A咽回F础也血、哺乙偶姻/(mg/U O 10.0 20.0 40.0 60.0 80.0 , 分别吸取配制好的乙偶。然后，依次在每个试管反应40.0min后，A. 5. 2 标准对照品的审j备建议使用个有代表性的、稳定的样品作为标准对照品。在每次分析
12、中.将该标准对照品与样品一同进行检测，以判断试验的重复性。A. 5. 3 样品溶液的制备从样品中称取一定量的试料，精确至0.0005g.开l熔液(1.3.1)稀释。其稀释的倍数要使得样品的最终吸光度H，落在乙偶姻标准曲线的范围内。A. 5. 4 酶样品的反应将试料溶液和底物先置于30C水浴中预热约10min.然后，按下述方法处理每一个试料溶液a) 样品值Hll吸取酶样品溶液200.0L于30C土O.jC水浴中的10mL试管里，然后加入预热好的底物200.0L.用激涡震荡器充分混匀，迅速放回到水浴中，并开始计时。5 GB 20713-2006 b) 空白值H，用缓冲液(A.3. 1)代替试料溶液
13、，依上述步骤进行操作.反应20.0min后，依次向每支试管中加入显色剂4.60mL(A. 3. 3)，用激涡震荡器充分混匀。置于室温，重新开始计时。反应40.0mn后，使用分光光度计，在522nm波长下测定各管溶液的吸光度aA.6 结果的计算和表示A. 6.1 标准曲线以522nm波长下的吸光度为Y轴，乙偶姻的浓度(mg/L)为X轴，绘制标准曲线，ii算出标准曲线的斜率以或用凹归方程计算。A.6.2 样品酶活力的计算样品的酶活力按式(A.1)W算zU=Ht-H2)XO.0011351XF = m Xh 式中U一一样品的酶活力，单位为酶活力单位每克(U/g); H，一一样品的吸光度;H，一一空白
14、的吸光度;0.001 135 J一-0.1g的乙偶姻所对应的摩尔数;F 样品溶液反应前的总稀释倍数;m 试料的质量，单位为克(g); h 标准曲线的斜率.A. 6. 3 结果的表示样品的测定结果用算术平均值表示. ( A.1 ) 当结果小于1U/g(或1U/mL)时给出一位有效数字;当结果大于等于1U/g(或1U/mL)且小于100 U/g(或100U/mL)时给出两位有效数字;当结果大于等于100U/g(或100U/mL)时给出三位有效数字。A.6.4 重复性在重复性条件下获得的两次单独测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%, 以大于这两个测定值的算术平均值的10%的情况不
15、超过5%为前提。6 GB 20713-2006 附录B(规范性附录-z.酷乳酸脱援酶酶活力的llJ定全自动生化分析仪法B.1 范围本方法规定了乙酌乳酸脱竣酶活力的测定方法。本方法适用于用全自ijlJ生化分析仪测定r乙m乳酸脱泼酶制剂中乙毗乳酸脱殷酶的酶活力。本方法不适用于啤酒和其他含醇产品中乙酷乳酸脱竣酶酶活力的测定。本方法的检测限为0.6U/g或0.6U/mL. 试样中3-涯基-2丁阴(乙偶姻)和(或)双乙献的存在会使试验结果偏大。乙偶姻在贮存时易形成二聚体，从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防，本方法仍可使用。B. 2 原理-乙酷乳酸脱叛酶与底物-乙眈乳酸反应脱竣生成乙偶姻
16、.乙偶姻在碱性条件下与茶!li)和肌酸的混合物反应生成红色产物。通过在510nm波长下测定标准溶液的吸光度绘制出标准曲线，对照标准曲线进一步计算出酶样品的活力。B.3 试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馆水或去离子水或相当纯度的水。B. 3. 1 MES(9. 76 g/L)-氯化纳(35.064g/L)-聚氧化乙烯十二烧基隧(1.52 mL/Ll缓冲液见A.3. 1. B.3.2 乙酷乳酸底物(2.mL/L)见A.3. 20 B. 3. 3 茶酣(10.0L)/肌酸(1. 0 g/L)显色JiJ见A.3. 30 B.4 仪器B. 4. 1 全自动生化分析仪:要求带有进样系统、搅拌
17、系统、温度控制系统(300C士。.2C)和检测系统a检测系统要求可在510nm波长处，用动力学法检测l吸光度变化，时间间隔最少18SO 如，Konelab30或同等分析效果的仪器。B. 4. 2分析天平精度为0.0001 go B. 4. 3 酸度计:精度为0.01pH单位aB.5 分析步骤B.5.1 标准曲线的和l备称取一定量的乙酷乳酸脱後酶标准品，精确3O. 000 5 g。用缓冲液(B.3.1)溶解并定容至100 mL.得到标准储备液。标准品称取的量要使标准储备液中乙毗乳酸脱梭酶的酶活力约为0.75 U/mL. 然后，按照表B.1配制标准曲线。7 GB 20713-2006 表B.l:-
18、2:酷乳酸脱梭酶标准曲线标准点标准储备液/缓冲液(B.3. 1)/ 稀释倍数稀程后活性/L L (mU/mL) 600.0 O. O 2 20.0 580.0 30.0 25.0 3 30.0 570.0 20.0 37.5 4 40.0 560.0 15.0 50.0 5 50.0 550.0 12.0 62.5 6 60.0 10.0 75.0 7)( ，20Lo 8.5.4.3 显色反应周期温度，30C;时间，240S; 显包试剂侣.3.3)，80L;7:，J5L。B.5.4.4 测定周期测定模式:动力学法;彼伏。510nm; 曲线类型非线性，B.5.2 a) ) T终稀释液的酶活力在2
19、7.5mU/1 8. 5. 4 酶活力8 GB 20713一-2006时间，1455; 读数，9次;间隔，1850 B.6 结果的计算和表示B. 6. 1 标准曲线的计算用参数Logit-Log法计算出标准曲线。其中Y轴单位为OD/min，X轴单位为标准点的酶活力mU!mL。B. 6. 2 样品酶活力的计算从标准曲线上读出样品最终稀释液的酶活力，单位为mU/mLo然后，按照式(B.)计算样品的酶活力:D-nu x- F-I X一A-m Z U . ( B. 1 ) 式中.U 样品的酶活力，单位为酶活力单位每克(U/g)或酶活力单位每毫升(U/mL); A 由标准曲线得出的样品最终稀释液的活性力
20、，单位为毫酶活力单位每毫升(mU/mL); F一一溶解样品用的容量瓶的体积，单位为毫升(mL); D一一稀释倍数;m一一试料的质量的数值，单位为克(g); 1 000一二-mU到U的单位转换因子。IB.6.3 结果的表示当标准对照品稀释液的实验值在o.48 mU/mLO. 52 mU/mL时，样品的实验结果有效，可计算平均值。否则，应重新进行试验。B. 6. 4 结果的表示样品的测定结果用算术平均值表示.当结果小于1U!g(或1U/mL)时给出一位有效数字，当结果大子等于1U/g(或1U/mL)且小于100 U/g(或100U/mL)时给出两位有效数字;当结果大于等于100U/g(或100U/
21、mL)时给出三位有效数字a当结果小子。.6U/g(或0.6U/mL)时，表示为0.6U!g(或0.6U/mL)。B.6.5 重复性在重复性条件下获得的两次单独测试结果的绝对差债不大于这两个测定值的算术平均值的4%，以大于这两个测定值的算术平均值的4%的情况不超过5%为前提。GB 、俨中华人民共和国国家标准食品添加剂-z.酌乳酸脱竣酶制lfIJGB 20713-2006 号提中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北衔16号邮政编码，100045网址电话6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X12301/16 印张1字数21千字2007年4月第一版2007年4月第次印刷晤J 书号155066.1-29229 定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)68533533 .恤，CED 2 D F T、o N 。阁
