1、中华人民共和国国家标准水果、蔬菜及制品苯甲酸含量的测定Fruits, vegetables and derived pr地ucts一Determination of benZQic acid content GB 12289-90 4:标准参照采用国际标准1505518-1978 (水果、蔬菜及其制品苯甲酸含量的i1i!U).-分光光度法和1506560-1983 (水果、蔬菜及制品苯申酸含量的测定(含量超过200mg/L戎kg)-一分f吸收分光光度法。1 主题内容及适用范围本标准规定f水果、蔬菜及制品巾苯甲酸含量的测定方法。分光光度法适用f-苯甲酸含量低于200m g/ L或kg产品的测定。
2、分f一吸收分光光度法适用于测定苯甲酸含量超过200mg/L或kg的产品，重点包括水果川、蕃茄i离制品，以及用醋或乳酸保存的产品。分光光度法不适用于有对氯苯甲酸及有大量肉桂酸存在的产1日I。2 原理第一篇分光光度法试样混匀后，稀释、酸化、用乙他恒取苯甲酸，在碱性条件下重捷，通过络酸氧化键纯，最后用分光光度计测定溶解在乙隧中的苯甲酸。3 试剂和溶液本标准所用试剂均为分析纯。使用蒸惚水戎相应纯度的水。3.1 -酒石酸(Q/HG10-2187)，结晶状，3.2 氢氧化纳(GB 1266)溶液，1 mol/I二，3.3 重格酸押(GB642)溶液，33 -34g/ L (由/v ), 3.4 硫酸溶液，
3、2+1.用2体积的浓硫酸(GB625)20 1. 84 g / m L ，加董IJ1体积的水(j 1 , 3.5 乙隘(HG3-1002)，重新蒸饵，3.6 苯甲酸标准溶液:0.100g/L乙隧溶液，3.7 碳酸氢纳(GB640)。4 仪器、设备常用实验室仪器、设备、包括34. 1 容量瓶，50m L , 4.2 烧杯，50、100m L 4.3 移液管，20mL , 4.4 刻度吸管$4.5 m形瓶，250 m L具有磨口玻璃塞;国家技术监督局1990-03-29批准1990-12-01实施157 G812289-90 4.6 分液漏斗，500mL , 4.7 恒温水浴，温度能控制在70-8
4、0C, 4.8捣碎机，4.9紫外分光光度计s具光径长10mm的石英比色杯，4.10 分析天、F。5 分析步骤5.1 试样的制备5. 1. 1 液体样品(汁液)，可流动浆液C糖浆)和粘稠的样品(果酱)。将样品混合均匀。5. 1. 2 坷体样品。k果、蔬菜)，将样品切成小块，检出种子和果壳，混匀，取约40g放入她碎机ft捣碎。冷冻样品首先在密闭的容器内融化，将融化液与样品合并后捣碎。5.2 试样的分取5.2.1 液体样t571用移液管(4.3)吸取20mL无悬浮物的试样(5.1)用约50mL水稀释并转移至500mL的分液漏斗(4.的(分液漏斗A)巾。或用感量为O.01g的天呼Z狞战试样20.u。胃
5、。5.2.2 流动的浆液取20mL试样(5.1)放在研钵里用20mL水稀释，倾倒过滤。然后连续两次用20mL水溶解残渣，倾倒过古章，收集滤液于500mL分被漏一斗(4.6)(A)中。也可用百分之一天半称取20.00g试样。5.2.3 粘榈或附体样占31用百分之一天、1.称取10.00g样品(5.1)，放入250mL锥形瓶(4.5)中，iJU30-40mL的水。加入约50mg碳酸氢纳(3.7)，然后放在水浴(4.7)1二，温度控制在70-80C，放置15-30mn后，过滤瓶jl的内容物，并用15-20 m L /J.冲洗两次，全部滤液并入500mL分液漏斗(4.6)(A)巾，使之冷却。5.3 苯
6、甲酸的提取5.3. I 取1g洒石酸(3.1)放人装有稀释试样(5.2)的分液漏斗(A)1 , iJll人60mL的乙邸(3.5)并小心f雷动。静置使之分!二。保留隧区，将/J.!.J转入第二个500mL分液漏斗(4.6)(8)，扣，用60mL乙隧萃取水相，合并且连相子分液漏斗(A)巾。5.3.2 从乙陆相提取苯甲酸，连续剧l入氢氧化纳溶液(3.2)lOmL、5mL , !J.lOmL两次，每fJfI-次反时i1li动，使之分层，收集水相f蒸发皿I巾，将llll放在水浴(4:7)上，温度控制在70-80C，浓缩碱溶液体积至一半为止。5.4 苯甲酸的提纯冷却后，将蒸发皿的内容物放入盛有20mL硫
7、酸溶液(3.4)和20mL重格酸御溶液(3.川的250mL锥形瓶(4.5)中。盖塞，怪匀，放置1h以上。5.5 苯甲酸的萃取用20-25mL的乙隧萃取上述(5.4)提纯的苯申酸两次，收集乙他液，用5mL的水洗乙隘溶液两次，然后/J，、的倾出乙地并通过r-滤纸过滤至50mL的容量瓶(4.1)巾，用乙隧冲洗滤纸并定容至麦IJ度。5.6视YJ立用分光光度计(4.9)在267.5.272和276.5nm波长处以纯乙再选为对照，测量乙R盖层(5.5)的吸光度。苯甲酸的吸光度A按式(1 )计算34.，牛AA A，一一-iH. . . (1) 2 138 式中2Ai一一在267.5nm的吸光度，A，一二在2
8、72nm的吸光度，A，一一-在276.5nm的吸光度o罔一试样(5.1)需进行两次测定。5.7 标准曲线的绘制GB 12289-90 向6个50mL容量瓶4.1)中分别加入苯甲酸标准溶液(3.6).各5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、20.0mL.用乙靡(3.5)稀释至刻度。该标准系列溶液的浓度为10、15、20、25、30、40mg/ L。按照5.6进行测定。以苯甲酸含量mgjL为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。6 分析结果表示6.1 计算方法和公式6. 1. 1 液体样品苯甲酸的含量以mgjL表示，按式(2 )计算250 苯甲酸(mgjL)=m , xvv=2.5m ,.
9、 . (2) 20 式中;m2一一由标准曲线(5.7)上查得苯甲酸的含量.mg/ L 。6.1.2粘稠或团体样品苯甲酸的含量以mg/kg表示，按式(3 )计算z50 苯甲酸(mgjkg)=m，x一一_. . . . . . . . . . . . .( 3 ) ml 式中gm i一-称取试样的重量(5.2), g, m ，-一-标准曲线(5.7)J二查得苯甲酸含量.mg。6.2 允许差同一分析人员对同一试样两个乎行测定值之差不得超过10mgjL或10mgjkg。第二篇分子吸收分光光度法7 原理用乙届选从酸化的试样中提取苯甲酸，随后消化、还原，与盐酸苦圣胶进行莫尔氏反应。于分光光度计上测定已得到
10、的红色化合物吸光度。S 试剂和溶液所有试剂应是分析纯./.k用蒸锢/.k戎相当纯度的水。8.1 苯甲酸标准溶液a浓度为1gj L。称取100mg苯甲酸精确歪0.0001目，溶解于25mL的O.lmoljL氢氧化锅溶液中并用水稀静至100mL。此标准溶液含苯甲酸1mgj mL。8.2 硝化液23g硝酸绑(GB647)溶解于250mL浓硫酸(四=1.84g/mL)中。8.3 盐酸瓷骸(HG3 -997)溶液.20gjL , 8. 浓氨溶液(GB 631)(2. =O.910gj mL)。.5 盼队溶液159 GB 12289-90 1 g酣IU(HGB 3039)溶解于100m L 60%，乙醇(
11、vjv)中08.6 氢氧化纳(GB 1266-77)溶液.lmoljLo8.1 氢氧化铀溶液.0.lmoljLo8.8 硫酸溶液.25% (m j m)。8.9 卡瑞(Carrez)1溶液z150 g三合水亚铁氟化梆(GB1273)(K.Fe(CN)3H，)溶解于水中并稀释至1Ooom L。8.10 卡瑞(Carrez)n溶液z300g七合水硫龄钵(GB666)(ZnS.7H，)溶解于水中并稀释至1000mL。8. n 乙隧(HG3一1002)，近期重蒸馆。 仪器、设备常用实验室仪器、设备，包括39. 1 分液漏斗.200 m L.装有磨口塞。9.2 移液管.1、2、5、10、25和50mLo
12、9.3 移液管.2 mL、分刻度至0.1mL。9.4 容量瓶.10和100mL备有磨口玻璃塞。9.5 沸水浴。9.6 试管，直径1.5或2.0c m , 9.1 烘箱，能控温在103士2C。9.8 恒徨水浴，控瘟在20主2C和60士2C。9.9 分光光度计，适合于533nm波长处进行测量，备光径长10mm的比色杯。10 分析步骤10.1 试样的制备10. 1. 1 液体样品试样充分混匀。10.1.2 半粘稠样品将试样混合完全。取部分试样通过四层纱布压汁，奔去初始几滴滤液，收集剩余的部分迸行测定10.1 .3 粘稠样品试样充分混匀。10.2 试样的l1取10.2.1 液休样品用移液管(9.2).
13、取10mL试样移至200mL分液漏斗(9.1)中。10.2.2粘稠样品称取试样10在，准确至0.011.bo少量水，刀口2滴盼散溶液(8.5)，再加氢氧化纳溶液(8.6)使之呈碱性。放在沸水i浴(9.5)1.11日热30min。冷却后，移至100mL容量瓶中，加入2mL卡瑞(Carrez)I溶液(8.9)和2mL卡瑞(Carrez) Il溶液(8.10).用水稀稀至刻度。放置30mi n.然后离心或过滤。该澄清的溶液用于提取(10.3)。10.3 苯甲酸的提取和纯化10.3.1 液体样品b02 mL硫酸溶液(8.8)至Y卓有试样的分液漏斗中。加25mL乙隧(8.11振荡分出隧层，用25mL乙版
14、再重复振荡提取A次，合并乙陈相。加11商邮tt溶液(8.5)加2mL氢氧化纳溶液(8.6)并振荡5m i n。分离碱相。然后用2mL氧氧化纳溶液(8.7)振荡槌取2次。收集碱相摄取液于10mL容量瓶(9.4)巾并用水稀藉至主11度。160 GB 12289-90 10.3.2 粘稠样品50mL澄清后的溶液10.2.2)于200mL分液漏斗中，加50mL硫酸溶液(8.肘，加50mL乙腿，振荡，分出隧层。用50mL乙隧重复提取两次以上。合并乙越相于分液漏斗中。加5mL水，振荡，并奔去水相。加2mL氢氧化纳溶液(8.6)于自盖层，振荡(形成苯甲酸纳)分出碱相，然后用2mL氢氧化纳溶液(8.7)再振摇
15、提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶(9.4)中，并用水稀释至刻度。10.4 测定10.4.1 显色根据苯甲酸含量，取0.5-1.0mL碱提取液移入试管(9.6)中，在沸水浴(9.5)上蒸发至F，移至烘箱(9.7)中，在103+ 2 C下干燥15mn 。随后冷却，加1mL硝化液(8.2)放在沸水浴上却胁20mn (开始时振摇试管几分钟。移人水浴(9.8).保持在20士2C下，放置15mn。小心的加2mL水，再放置15min 。如1l0mL氨溶液(8.4).分次加，最初的5mL.每次加0.5mL.剩余的每次加lmL。放在水浴上15mn。注意水浴的温度控制在20+2 c。加2mL盐酸苦圭核溶液
16、8.3)并放在60+ 2 c水浴(9.8)r-.保持5 m 1 n。10.4.2 分光光度计测量冷却试管，移入比色杯。在30min之内用分光光度计，在533nm波长处，以试剂空白为对照，测量溶液的吸光度。同一试样作平行测定。10.5 标准曲线的绘制。10.5.1 标准系列溶液的制备用移液管(9.3)连续向5支试管中转移苯甲酸标准溶液(8.1)0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL.相对应的苯甲酸量为0.6.0.8.1.0、1.2、1.4mg, 向另1支试管中移人氢氧化锅溶液(8.7)0.5 mL作试剂空白。10.5.2 显色将试管移入沸水浴中蒸发至干。然后将试管移入烘箱中，并在103士2C
17、下干燥15m;n。以下步骤按10.4.1第二段起所描述的进行。10.5.3 分光光度测量接10.4.2规定的操作进行。10.5.4 标准曲线的绘制以苯甲酸标准溶液的毫克数为横坐标，以所对应的吸光度为纵坐标，绘制曲线。11 分析结果表示11.1 计算方法和公式11.1.1 液体样品苯甲酸的含量以mg!L表示，按式(4 )计算2苯甲酸(mg!L)=旦三互Lxlo. . (4 ) V1 X V 3 式中:m一一从标准曲线查得苯甲酸的量.m gl 只一一试样分取的体现.mL I V，一一碱提取液的体积.mL I V，一一进行显色时碱提取液的体积，mL 0 11.1.2粘稠样品161 GB 12289-
18、90 苯甲酸的含量以mg/kg表示，按式(5 )诈算g? X V , x V喧苯甲酸(mg/kg)=.Z A 3 1000HH-. ( 5 ) m , x V2 x V. 式中:m 1一一试样分取的量，。叫一一从标准曲线查得苯甲酸的量，m g , V，一一制备的澄清液的体积，mL , 几一一用于提取的澄清的液体积，mL , V3一-li展提取液的体积，mL I V.一一进行显色的碱溶液体积，mL。11.2 允许差同一分析人员对同一试样两个平行测定值之差不应超过10mg/L或10mg/kg。附加说明z本标准由中华人民共和国农业部提出，全国农业分析标准化技术委员会归口。本标准由中国农业科学院分析测试中心负责起草。本标准主要起草人李伟格、陈必芳、李兰。162
