1、中华人民共和国国家标准船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物积累性试验方法发布实施国家技术监督局发布前言船舶散装液体危害性评价规范系根据附则的要求为船舶散装运输的液体化学品的污染分类而进行的污染危害性评价和污染分类的方法其危害评价和分类的原则和内容系根据附则中有害液体物质分类准则附则之附录以及海洋污染科学专家组关于船运有害物质危害性评价的原则确定评价内容包括水生生物积累性试验即本标准水生生物沾染试验水生生物急性毒性试验哺乳动物毒性试验休息环境舒适性影响分类程序和方法鉴于导则中危害性经口急性毒性及皮肤接触和吸入毒性均为哺乳动物试验内容故合为一个分标准另外环境舒适性的评价系根据物质对人的毒性
2、刺激性以及由其理化特性决定的对环境影响的持久性等综合评价无具体试验方法所以不单列分标准而并入评价程序和分类中本标准由中华人民共和国交通部提出本标准起草单位交通部水运科学研究所负责起草本标准起草人张东宝张毅张秀芝中华人民共和国国家标准船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物积累性试验方法国家技术监督局批准实施范围本标准规定了在确定的试验条件下测定化学品在斑马鱼中积累特性的方法本标准适用于船舶散装运输液体化学品的积累特性的测定引用标准下列标准所包含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时所示版本均为有效所有标准都会被修订使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性水质淡水
3、鱼斑马鱼急性毒性测定方法附则控制散装有毒液体物质污染规则定义本标准采用下列定义生物浓缩常数稳态下试验鱼体中的试验物质浓度与水环境试验物质浓度之比吸收试验鱼从水中摄取试验物质释放积累了一定量化学品的试验鱼被投放至清洁环境后其吸收的试验物质因代谢而逐渐排出体外的过程稳态在一定的试验浓度下鱼体从水中吸收及向水中释放试验物质的量相等的状态半衰期试验物质被生物体排出一半量所需时间初始残留量释放试验开始时试验物质在鱼体内的含量液体化学品系指那些在温度为时蒸汽压力不超过的化学品原理在确定的试验条件下通过周的吸收试验及其后的释放试验测定化学品在鱼体内的生物浓缩常数和生物半衰期由此评价化学品的生物积累性试验生物
4、和试验溶液的配制试验生物试验鱼种是斑马担尼鱼真骨鱼总目鲤科试验鱼体长体重选自同一驯养池中来源相同的鱼试验前该鱼群应在与试验条件相同的环境条件下在溶解氧充足的水中至少驯养两周试验前停止喂食每天清除粪便及食物残渣驯养期间死亡率不超过否则该批鱼不得用作试验鱼试验鱼应无明显的疾病和肉眼可见的畸型试验前两周内不应对其做疾病处理试验稀释水将自来水自然曝气三天或用充气泵曝气使溶解氧达到饱和值氯基本除尽值制备试验物质储备液配制试验物质储备液所用试剂为分析纯将已知量的试验物质溶于一定体积的稀释水去离子水或蒸馏水中储备液应当天配制对于化学性质较稳定的物质可配制供两天以上使用的溶液配好后低温保存对于难溶解的物质可使
5、用超声波装置也可加入对鱼低毒无积累特性的助溶剂并应同时进行两组不含试验物质的对照试验一组含有的助溶剂为试验溶液中的最高浓度另一组是不含助溶剂的稀释水仪器设备试验容器用玻璃或其他惰性物质制成应不明显吸附试验物质常用设备尼龙或其他软惰性材料制成的抄网应专用试验容器应有足够大的容积水量一般按每升水鱼计算试验介质与空气间有足够大的界面每试验液要有大约的界面积初次使用的试验容器用前应仔细清洗试验后倒空容器用清洗剂清洗再用大量清水冲洗干燥后备用试验容器临用前用稀释水冲洗脂肪提取器提取及测试生物体内残留试验物质所需的其他仪器萃取及测试水中试验物质所需的其他仪器试验条件试验溶液的配制与贮存鱼的管理及全部操作和
6、积累试验都应在无污染物的大气环境中进行试验液中溶解氧不少于试验期间水温选择试验温度波动不超过每天在换液前投食一次投饵量为鱼试验步骤根据试验物质对斑马鱼的确定两个试验浓度高浓度不超过低浓度高于化学品在水中检出限的倍取三个容器均加入稀释水其中个为对照试验另两个加入不同量储备液以制备条设定的个浓度的试验液如果用助溶剂溶解试验物质则需按条设置含助溶剂的对照试验将试验液恒温后按下列方法向各浓度中投放条鱼用尼龙或其他软惰性材料编织的小孔抄网从驯养鱼群中随机捞鱼放入试验容器中在鱼转移过程中因操作不慎掉下之鱼或其他操作不善之鱼弃去不用所有的鱼须在内转移完毕每更新一次试验液视试验物质的性质等具体情况而定转移鱼时
7、从低浓度向高浓度过渡避免因使用抄网造成各容器间试验物质的明显转移建立试验生物体内残留试验物质的提取浓缩和分析方法建立水中试验物质浓度的测试方法取样对于辛醇水的分配系数的对数不大于的物质吸收试验进行周取样日程为试验开始后的第天对于的物质吸收试验进行周取样日程为试验开始后的第天每次采集条鱼组成一个样本取鱼样的同时采取适量水样高浓度组吸收试验结束后立即将鱼转入清水中用流水系统进行释放试验释放时间为吸收试验时间的倍采样时间为试验总时间的倍每次采集条鱼组成一个样本样品处理鱼样先用清水冲洗去除吸附于体表的试验物质及其他杂质用滤纸吸干体表的水然后用解剖针刺入鱼脑或剪断鱼鳃盖以上的脊髓将鱼处死称量并记录样本总
8、湿重将等重量的无水硫酸钙或无水硫酸镁与鱼样一同研磨使其脱水混匀后用适当溶剂在脂肪提取器中抽提若干时间直至鱼组织中试验物质全部转移至溶剂中将所得溶液浓缩至适当体积水样亦用有机溶剂萃取并浓缩至适当体积样品采集后应立即进行分析或将生物样品称重后保存在冰箱中水样若不能立即分析须用有机溶剂萃取后保存在合适的测试条件下分析水样及鱼样中试验物浓度对照组试验鱼的取样及样品处理按及条进行每天至少在采样同时测一次及温度结果的表述计算将吸收试验中鱼体中化学品浓度及水中化学品浓度的变化对时间作图检查试验是否达到稳态由稳态下对的比值求得生物浓缩常数计算生物半衰期将释放试验中的鱼体内残留量的倒数对时间作图所得到的应是直线并符合下列方程由图中得到及则式中释放速率常数常数时间试验物在鱼体内残留量试验报告在试验报告中要求列出下列资料及数据试验条件控温及曝气情况与试验有关的化学生物和物理数据包括驯养鱼的详细情况及每升水中载鱼克数配制稀释水储备液及试验液的方法试验用水特性硬度等列表表示不同浓度试验液的及数据说明采用的化学分析方法试验鱼及对照鱼的死亡率行为反应异常的情况记录试验时间取样时间计算
