1、GB/T 168741997 前 言 我国东北和西北地区是银鲫的原产地之一。该鱼依其栖息环境不同，而表现为不同的生态类型。尤以黑龙江省方正县双凤水库的银鲫为突出，具有生长快、抗病力强、遗传基础稳定等特点，故称该鱼为“方正银鲫”，现已在我国全面推广养殖。为保存方正银鲫的优良经济性状，防止混杂和退化，特制定该方正银鲫种质标准。 本标准的附录A至附录D均为标准的附录。 本标准从1998年1月1日起实施。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。 本标准主要起草人：刘明华、沈俊宝、范兆廷。 1
2、范围 本标准规定了方正银鲫（ Carassius auratus gibelio Bloch）原种主要生物学性状、生化指标、遗传学特性，以及检测方法。适用于方正银鲫良种鉴定。 2 名称与分类 2.1 学名 银鲫（ Carassius auratus gibelio Bloch）。 2.2 分类位置 属鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），鲤亚科（Cyprininae），鲫属（ Carassius），鲫种（ Carassius auratus）。 3 主要生物学性状 3.1 外部特征 3.1.1 形态性状 体型短，体侧扁而高，头小，吻钝，口端位，下唇厚，唇后沟仅限于
3、口角。无须。眼小，位于头侧上方。背鳍具有硬刺，外缘平直，后缘锯齿粗，排列稀。胸鳍不达腹鳍。尾鳍分叉浅，上下叶末端尖。鱼体背部、背鳍和臀鳍为黑灰色，体侧深银白色，体侧每个鳞片的边缘颜色稍深，见图1。 页码，1/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm 图 1 方正银鲫外形 3.1.2 可数性状 3.1.2.1 背鳍硬棘（），分枝鳍条数1619，多数为17。 3.1.2.2 左侧第一鳃弓鳃耙数4454，多数为49。 3.1.2.3 鳞式：29 6/6 32，侧线鳞 2932，多数为 3031。 3.1.3 可
4、量性状 不同体长组个体，可量性状变动值见表1。 表 1 组别 项目 1 2 3 4 全长，mm 42.081.0 93.1118.0 190.0215.0 206.4263.2 全长，mm 33.066.0 72.089.5 161.0183.0 164.0199.9 体长/体高 2.48 2.63 2.67 2.35 体长/头长 3.05 3.49 3.73 3.75 页码，2/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm3.2 内部特征 3.2.1 鳔 鳔分两室，后室长为前室 1.5 倍左右。 3.2.2
5、 肋骨 肋骨有13对。 3.2.3 下咽齿 下咽齿一行。齿式为4/4。 3.2.4 脊椎骨 脊椎骨总数为颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数之和，脊椎骨总数、颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数分别为3031、4、1213、14块。 3.2.5 腹膜 腹膜为灰黑色或黑色。 3.2.6 肝脏 肝脏肥大、柔软、褐红色，几乎覆盖整个肠脏，其重量占体重的6.57.4。 3.2.7 红血球 红血球核的长径平均为 7.07 m，短径平均为 3.84 m，核的体积平均为 45.8 m3。3.3 生长与繁殖 3.3.1 生长 体长/尾柄长 6.72 8.39 8.85 7.94 体长/尾柄高 5.92 6.74 6.17 5.9
6、6 头长/吻长 3.29 3.68 3.20 3.08 头长/眼径 3.29 3.93 4.72 4.92 头长/眼间距 2.35 2.51 2.17 2.32 页码，3/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm 不同年龄组的鱼体长和体重的理论值见表2。 表 2 3.3.2 繁殖 3.3.2.1 成熟年龄：雌、雄鱼均为12龄。 3.3.2.2 雌、雄鱼比为91，行天然雌核发育。 3.3.2.3 性腺一年成熟一次，分批产卵。 3.3.2.4 繁殖水温：1325。 3.3.2.5 怀卵量：不同年龄个体怀卵量见
7、表3。 表 3 4 生化指标 肝酯酶同工酶（EST）有四种谱型，受a、b、c3个等位基因控制，其中BC型频率达0.902；另在EST-2位点上，a、b、c3个等位基因同时存在于一个个体，即ABC异质型，表现出3倍性，见表4、图2。 年龄1），龄1 2 3 4 5 体长，mm 4173 108141 185231 233327 255336 体重，g 525 43147 190245 276850 4601056 1） 年龄，主要依据鳞片上的年轮数。 年龄，龄 2 3 4 体重，g 16.058.0 50167 161410 绝对怀卵量，粒 336214531 1275239858 386008
8、1127 相对怀卵量，粒/g 101151 121165 137185 页码，4/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm表 4 图 2 方正银鲫肝酯酶（EST）电泳图谱 5 遗传学特性 5.1 体细胞染色体2倍数 2n=156162。 5.2 核型 雌、雄鱼核型完全一致。有中部着丝粒染色体（m组）21对，亚中部着丝粒染色体（sm组）37对，亚端部及端部着丝粒染色体（st组及t组）20对，染色体臂数（NF）272，见图3。样 本 数 ， 尾 项 目表 现 型 X2值概率基因频率 AA BB CC DD A
9、B AC ADBCBD CD三倍性异质谱型a b c d61 观 察 值0 1 1 0 1 0 05500ABC谱型3 51.20.0010.033 0.484 0.475061期 待 值 0.7 14.3 13.8 0 1.9 1.9 0 28.0 0 0页码，5/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm 图 3 方正银鲫的染色体组型 5.3 脱氧核糖核酸（DNA）含量 体长121320mm，体重651125g 健康鱼红血球每个细胞的DNA含量为7.69pg（与鸡血对照）。 6 检测方法 6.1 生化遗
10、传分析 6.1.1 肝脏电泳样品液制备 电泳前，将肝脏从液氮罐中取出，在室温下解冻，然后放研钵中加入5倍体积的0.2 mol磷酸缓冲液及少量细砂，在冰浴中匀浆，制得的匀浆液用15000r/min离心机离心20min，用上面的澄清液电泳。 6.1.2 电泳条件及染色方法 采用7.5浓度的聚丙烯酰胺凝胶。电极缓冲液和凝胶制备见附录A（标准的附录）。电泳在冰箱中进行，电流为1.25mA，电泳约 2h。电泳后取下胶带先置于已配好的萘酯-丙酮液，在37温育20min，再加入坚牢蓝液经数分钟染色，可出现红棕色的区带。萘酯-丙酮液与坚牢蓝液的配制见附录B（标准的附录）。 6.1.3 结果判定 根据肝酯酶酶谱
11、区带谱带数和迁移距离分出表现型类型，按表现型类型分析得到 X2值、基因频率和表型期待值，详见表4、图2。 页码，6/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm6.2 染色体检测 6.2.1 标本制备 采用肾组织细胞加植物血凝聚素（PHA），在25条件下培养24h，经吹风或者自然干燥制片，吉姆萨（Giemsa）染色。Giemsa 染色液的配制见附录C（标准的附录）。 6.2.2 计数 在光镜下，选取染色体铺散良好，完整的中期分裂相计算染色体数目，确定2n 数。 6.2.3 形态分类 选择10个以上的分裂相，进
12、行显微拍照，按放大照片对染色体组型分析。染色体的形态类别，按以下要求划分：即臂比1.01.7为中部着丝粒染色体（m 组）；1.713.0 为亚中部着丝粒染色体（sm 组）；3.17.0 为亚端部着丝粒染色体（st组）；7.1的为端部着丝粒染色体（t组）。m 组和sm 组染色体臂数为2；st 组和t 组染色体臂数为1 。 6.3 脱氧核糖核酸（DNA）含量测定 6.3.1 血涂片制片 从尾动脉采血0.5mL，生理盐水（0.7NaCl）稀释制成血涂片；同时采小公鸡血，用同法制片作对照。 6.3.2 固定 血涂片空气干燥后，用卡诺氏液（甲醇：冰乙酸为31）固定1h，然后将血涂片移出存放于4冰箱中或者
13、直接染色。 6.3.3 染色 血涂片经3.5 mol HCl水解30 min（28），蒸馏水冲洗，放入希夫（Schiff） 试剂其配制方法见附录D（标准的附录），于28暗处染色 1h，立即用二氧化硫水洗35次，每次210 min，再经梯度酒精70、80、90、95、100脱水，二甲苯透明后用胶封片。 6.3.4 DNA含量测定 用显微分光光度计测量，波长560 nm，物镜40，目镜10，扫描步距0.51 m。 附 录 A （标准的附录） 电极缓冲液和凝胶的制备 A1 电极缓冲液的制备 三羟甲基氨基甲烷（Tris）6g，甘氨酸 28.8g，加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至1000 mL，用盐酸（
14、HCl）调整pH为8.3，使用时稀释 10 倍。 页码，7/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htmA2 凝胶的制备 A液：Tris 36.3g 加四甲基乙二胺（TEMED）0.23mL 溶解，加1 mol HCl约48 mL，再加入蒸馏水至100mL，用盐酸调整pH为8.9。 B液：Tris 3g，加TEMED 0.23mL，再加1mol HCl约24mL，再加蒸馏水至100 mL，用 HCl 调整pH为6.7。 C液：丙烯酰胺（ACR）20g，甲叉双丙烯酰胺（BIS）1g，加蒸馏水至100 mL 溶解
15、。 D液：核黄素（VB2）0.004g，溶于100 mL 双蒸馏水。 E液：过硫酸铵（AP）0.28g，加蒸馏水至50 mL 溶解。 F液：蔗糖40 g，加蒸馏水至100 mL溶解。 分离胶比例 A液：C液：蒸馏水：E液=1241。 浓缩胶比例 B液：C液：F液：D液=1111。 附 录 B （标准的附录） 染色液配制 B1 萘酯-丙酮液 乙酸-萘酯0.2g，加30 mL 丙酮溶解。 B2 坚牢蓝液 0.2g坚牢蓝染料加200 mL pH6.4磷酸缓冲液，并使之完全溶解。 附 录 C （标准的附录） 吉姆萨（Giemsa）染色液配制 C1 Giemsa 染色母液配制 称量0.5g Giemsa
16、 粉，量取甘油33 mL，在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加入，在56条件下保温2h后，加入33 mL 甲醇，保存于棕色瓶内。 C2 pH7.2磷酸缓冲液配制 0.2 mol磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液72.0 mL加上0.2 mol 磷酸二氢钠（NaH2PO4）溶液28.0 mL 即成。 C3 Giemsa 工作染色液配制 页码，8/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm 取100 mL pH7.2磷酸缓冲液，加入3 mL Giemsa染色母液即成。 附 录 D
17、 （标准的附录） 希夫（Schiff） 试剂的配制 将0.5g碱性品红溶于100 mL 热蒸馏水中，使之充分溶解，待溶液冷却至50时过滤，再冷却到25时加入1 mol盐酸（HCl）10 mL和1 g亚硫酸氢钠（NaHSO3）或1.5 g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5），放置暗处，静置24 h后，加0.250.5 g活性炭摇荡1 min，过滤，溶液呈无色，装入棕色瓶中塞紧瓶塞，保存在冰箱内（04）， 用前预先取出，使之恢复至室温后再用。如溶液呈粉红色就不能用，须重配。 页码，9/9GB/T 1687419972006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbhH168740A.htm
