1、ICS 65.120 B 46 国中华人民共和国国家标准GB/T 19371. 2-2003 饲料中液态蛋氨酸经基类似物的测定高效液相色谱法Determination of Iiquid methionine hydroxy analogue in feeds一High performance Iiquid chromatography 2003-11-10发布2004-05-01实施常中华人民共和国发布国家质量监督检验检瘦总局GB/T 19371.2-2003 前本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草，
2、诺伟思国际营养有限公司参加起草。本标准主要起草人，f习惠文、赵小阳、王彤、杨文军、张秉范。1 范围饲料中液态蛋氨酸挂基类似物的测定高效液相色谱法GB/T 19371.2一2003本标准规定了高效液相色谱法(HPLC)测定配合饲料及浓缩饲料中液态蛋氨酸起基类似物的方法。本标准最低检出量为1吨。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规
3、格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样方法3 原理用10%的乙腊水溶液提取样品中的液态蛋氨酸楚基类似物，用氢氧化梆将蛋氨酸经基类似物水解为有活性的单体，磷酸调节水解液的pH值。反相高效液相色谱分离，紫外检测器210nm处测定。4 试剂和溶液以下所用的试剂，除特别注明外均为优级纯试剂，水符合GB/T6682一级用水的规定。4.1 乙腊:色谱纯。4.2 提取j)lj，o%乙腊水溶液。4.3 氢氧化饵溶液，500g/L 4.4 磷酸溶液，I+l(V十V)。4.5 HPLC流动相，0.05%三氟乙酸水溶液。4.6 液态蛋氨酸瓷基类似物标准样品2除非购买标有准确含量的标样，否则需准确测定含量。5
4、 仪器设备5.1 振荡器水平方向振荡，频率250r/min300 r/mino 5.2 溶剂过滤系统:全玻璃滤器，孔径。.2m。5.3 HPLC系统.由下述部件组成z泵.无脉冲。UV检测器，适合在210nm处由定。保护柱z棋有C18键合硅胶的预柱或性能相当的其他保护柱。分析柱z镇有粒度为5m键合硅胶的C18柱或性能相当的其他分析柱。6 采样6.1 采样步骤:按GB/T14699.1采集实验室样品。GB/T 19371.2-2003 6.2 试样的制备:将实验室样品粉碎，全部通过0.45mm筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。7 分析步骤注意:液态蛋氨酸援基类似物pH较低，操作时应避免接触皮肤，如不
5、慎接触皮肤，立即用水清洗。7.1 参比样晶的制备为了检验分析的准确性，每次分析(尤其是初次测定)均应进行参比样品的测定。参照以下步骤制备不同浓度的参比样品。注=添加用液态蛋氨酸楚基类似物要准确测定吉量，混合样品可以用家庭用食品搅拌机，确保样品混合均匀。称量样品时，准确至小数点后两位。空白样品是指确保没有加入液态蛋氨酸经基类似物的饲料样品。7.1.15.0%参比样品的制备:准确称取282.95g空白样品，准确加人17.05g液态蛋氨酸短基类似物(88.00%)标准样品，混合均匀。7.1.2 0.4%参比样品的制备2准确称取138.00g空白样品，准确加入12.00g5.0%参比样品，混合均匀。7
6、.1.30.2%参比样品的制备:准确称取144.00g空白样品，准确加入6.00g 5.0%参比样品，混合均匀。根据需要配制不同浓度的参比样品。参比样品配制后室温T平衡三天后使用，6个月内有效。7.2 提取称取试样2g5 g(精确至0.0001 剖，置于150mL具塞三角瓶中，准确加人一定量的提取液(一般50mL100 mL)，混合后置于振荡器上剧烈振荡30min，静置10min，离心或过滤，滤液备用。7.3 水解准确移取滤液(7.2)5mL于10mL具塞试管中，准确加入0.1mL氢氧化何溶液(4.3)，手摇至少10 5，准确加入0.2mL磷酸溶液(4.4)，于摇至少10s，水解液离心或过滤，
7、滤液过0.2m滤膜后备用。7.4 标准溶液的制备准确称取1.1360g液态蛋氨酸瓷基类似物(88.00%)标准样品，用提取剂(4.2)定容至1000 mL. 该溶液的浓度为1.00 mg/mL, 准确吸取2.5mL、5.0mL、10.0mL、20.0mL以上溶液至50mL容量瓶，用提取剂(4.2)定容至刻度后摇匀，此标准系列的浓度为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、1.00 mg/mL, 用以上标准系列与试样提取液同时做水解，测定。7.5 HPLC 测定7.5.1 色i昔条件a) 流速，1.0mL/min, b) 检测波长，210nm, c) 进样
8、量，20r止。7.5.2 测定向HPLC分析仪连续注入液态蛋氨酸经基类似物标准溶液，直至得到基线平稳，峰形对称且峰面积能够重现的色谱峰。依次注入标准、参比样品及试样水解液，积分得到峰面积，用标准系列进行单点或多点校准。自结果计算试样中液态蛋氨酸短基类似物的含量X以质量分数表示，按式。)计算cXV XX100 m X 1000 . ( 1 ) GB/T 19371. 2-2003 式中gc 由标准曲线查得的试样测定液中液态蛋氨酸短基类似物的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); V一一一加到试样中的提取液体积，单位为毫升(mL);m一一-试祥质量，单位为克(g)。结果表示至小数点后两位。9 允许差当含量小于0.5%时，两个平行试料测定值相差不大于0.05%;当含量大于或等于0.5%时，两个平行试料测定值的相对偏差不大于5%。
