1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准G/T 20748-2006 牛肝和牛肉中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法Method for the determination of avermectins residues in bovine liver and muscles一LC-MS-MS method 2006-12回31发布中华人民共和国国家质量监督检验检班总局中国国家标准化管理委员会2007皿03-01实施发布前言本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。GBjT
2、 20748-2006 本标准起草单位z中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验捡疫局。本标准主要起草人:庞国芳、林峰、林海丹、吴映璇、谢守新。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围牛肝和牛肉中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 20748-2006 本标准规定了牛肝和牛肉中和爱普瑞菌素(eprinomectin) tin)、多拉菌素(doramectin) 本标准适用于牛肝和牛本标准的方法检出2 规范性引用文件下列文件中的的修改单(不包括是否可使用这些文GB/T 6379. (GB/T 6379. 1 GB/T 6379. 性与再现性的GB/T
3、 6682 3 原理牛肝和牛肉中检测。4 试剂和材料除另有规定外，所有4. 1 乙腊:色谱纯。4.2 冰乙酸。4.3 中性氧化铝:Brockmann活的问到曲带串联质i削畸法。主制、阿维菌素、多拉菌素和、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌纯，水为GB/T6682规定的一4.4 元水硫酸铀:经650.C灼烧4h，置注目据本本适用)第件，其随后所有协议的各方研究z总则与定义测量方法重复,neq IS0 696:，987) 4.5 中性氧化铝净化柱:取一空的固相萃取柱管，下部填人少量脱脂棉，装人2g中性氧化铝(4. 3) ，上部再填充4g元水硫酸纳，使用前装填。4.6 三乙肢。4. 7 伊维菌素、阿继菌素
4、、多拉菌素、爱普瑞菌素标准物质z纯度注99%。4.8 标准储备榕液.100g/mL。准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素标准物质，用乙脯分别配制成100g/mL的标准储备梅液，一180C贮存，爱普瑞菌素标准储备榕液可使用3个月，伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素储备溶准可使用1年。4.9 t昆合标准储备榕液:o. 5g/mL.准确吸取0.5mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素标准储备榕被至100mL容量瓶中，以乙腊稀释并定容。一180C贮存，可使用3个月。1 GB/T 20748一20064. 10 基质混合标准工作溶液:根据需要，吸取不同体积的混合标准储备榕液(4.9)
5、，用空白样品提取液配成不同浓度的基质棍合标准工作榕液。当天配制。4. 11 谑膜:0.45mo5 仪器和设备5. 1 液相色谱-串联四极杆质谱仪z配有大气压化学电离源(APCD。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01go 5.3 组织捣碎机。5.4 匀质机。5.5 离心机:转速大于4000 r/mino 5. 6 超声波。5. 7 液体混匀器。5.8 KD撒缩瓶:25mL。5.9 固相萃取装置。5.10 旋转蒸发器。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备取样品约500g用组织捣碎机捣碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。6.2 试样的保存将试撑于一180C冰箱中保存。7 测定步骤7
6、. 1 提取准确称取2g试样，精确至0.01go置于50mL离心管中，加入8mL乙腊，以8000 r/min均质20 s , 4 000 r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中，另取一50mL离心管加入8mL乙脯，洗涤匀质刀头10s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，在液体泪匀器上涡旋30S , 4000 r/min离心5min，上清被合并至50mL比色管，离心管中的沉淀再加入5mL乙脯，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，于被体?昆匀器上涡旋30s ,4 000 r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，待净化。7.2 净化将中性氧化铝净化柱(4.5)安置在固相
7、萃取装置上，将上清被(7.1)小心倒入中性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min2 mL/min，待样液完全流出后，再向净化柱中加入2mL乙腊淋洗净化柱，收集全部流出液，流出液转移至KD浓缩瓶中，于400C旋转蒸发至于，用l.0 mL乙腊梅解残渣，超声10 min，过0.45m滤膜(4.11)后，供液相色谱串联质谱测定。称取2g阴性样品，按7.1和7.2步骤制备空白样品提取液，用于配制系列基质提合标准工作梅液。7.3 测定7.3. 1 施相色i曾条件a) 色i普柱:Intersil C8-3色谱柱，5f1- m ,150 mmX4. 6 mm(内径)或相当者;b) 柱温:400C ; c)
8、流动相:甲醇十7(=9+1.每1L该梅液加入1mL三乙胶;d) 流速:l. 0 mL/min; 2 GBjT 20748-2006 的进样量.50Lo7.3.2 质i曾条件a) 离子源z大气压化学电离漉;b) 扫描方式:负离子扫描;c) 检测方式:多反应监测(MRM); d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;e) 喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度;f) 定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量见表1。表1四种阿维菌素类药物的质i曾参数被测物名称定性离子对Cm/z) 873.7/567.2 伊
9、维菌素873.7/837.5 87 1. 7/565. 2 阿维菌素87 1. 7/853. 5 897.6/591. 2 多拉菌素897.6/879.4 912.5/876.6 爱普瑞菌素912.5/565.3 7.3.3 液相色谱串联质i曾测定7. 3. 3. 1 定性测定定量离子对采集时间Cm/z) /rns 873.7/567.2 200 87 1. 7/565. 2 200 897.6/591. 2 200 912.5/876.6 200 去簇电压碰撞气能量/V IV 一28-44 -28 -36 一47一31一38-44 -28 . -23 -47 -38 每种被测组分选择1个母离
10、子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶被中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准悔液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的程围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差% 相对离子卒度50 2050 1020 10 允许的最大偏差士20士25土30土50L 7.3.3.2 定量测定在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样(4.10)，以峰面积为纵坐标，说合标准溶液放度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品榕被中待测物的响应值均应在仪器测定的
11、线性范围内。外标法定量。四种阿维菌素的标准物质的多反应监视(MRM)色谱图参见图A.10四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.1o7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 回收率试验阴性样品中添加标准溶液，按7.1-7.2操作，四定后计算样品添加的回收率。3 GB/T 20748-2006 8 结果计算结果按式(1)计算:nu-nu nu-nu nu-nu 咱E4-吨EA v-m PL 一X . ( 1 ) 式中zx一一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg);c-一-从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V一
12、一样品榕被最终定容体积，单位、，中叫爵叫吧?伽问几m一一一样品榕液所代表最终重复性和再现性的值9 精密度本标准的精密度数据以95%的可信度来计算9. 1 重复性在重复性条件下复性方程见表3和化合物名称fJI 11黯婚就用/( Ilf!./隘蜘j脚被阳现倒限R伊维菌素国阳启事国216 阿维菌素216 多拉商素216 IgR=O.81 291 爱普瑞菌素辑|飞且216 注:m为两次翻化合物名称伊维菌素阿维菌素多拉菌素爱普瑞菌素注:m为两次测定结果的如果盖值超过重复性限，应舍弃试9. 2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含量范围及再现性方程见表3和表4
13、，4 G/T 20748-2006 附录(资料性附录)四种阿雏菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图A 四种阿维菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图，见图人106.5 3.9 5 t/min 伊维菌素a b 800 阿维商素a 1 412 1 000 500 的岛日同的52GBjT 20748-2006 附录B(资料性附录)回收率四种阿维菌素的添加放度及其平均回收率的试验数据，见表B.L表B.l四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据(n=10)佯品基质化合物名称添加水平/C阻/kg)回收率/c%)4.0 76.4 伊维菌素8. 0 72.7 16.0 92. 6 4.0 80.
14、2 阿维菌素8.0 96. 5 16.0 96. 8 肌肉4.0 78. 9 多拉菌素8.0 93. 5 16.0 77. 6 4.0 82.2 爱普瑞离素8.0 71. 3 16.0 92.0 4. 0 84.2 伊维菌素8.0 85. 5 16.0 87.9 4. 0 79. 7 阿维菌素8.0 87.7 16.0 92. 9 牛肝4. 0 79.8 多拉菌素8.0 80. 1 16.0 84.8 4.0 107.0 爱普瑞菌素8.0 112.0 16.0 110.0 6 goNi叮hONH筒。华人民共和国家标准牛肝和牛肉中阿维菌素类药物践留盘的测定渡相色i曾国串联质谱法GB/T 20748-. 2006 国中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销奇峰印张O.75 字数13千字2007年3月第一次印刷开本880X12301/16 2007年3月第一版定价14.00元9非书号，155066 1-28965 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 20748-2006
