1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 207502006 牛肌肉中氟肢烟酸残留量的测定液相色i普皿紫外检测法, 2006国12-31发布Determination of flunixin meglumine residue in bovine muscle tissue一LC-UV method 中华人民共和国国家质量监督检验检技总局中国国家标准化管理委员会2007-03-01实施发布目E自本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局归口。GB/T 20750-2006 本标准起草单位
2、:中华人民共和国秦皇岛出入墙检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、李军、宋文斌、董振霖、李一尘、薛大方、于一茫。本标准系首次发布的国家标准。1 GB/T 20750-2006 牛肌肉中氟股烟酸残留量的测定液相色谱圄紫外检测法1 范围本标准规定了牛肌肉中氟股烟酸残留量的夜生目色谱-紫外检测法。本标准适用于牛肌肉中氟股烟藤残嚼辜百测定.0本标准的方法检出限为:02 规范性引用文件下列文件中的条J的修改单(不包括AGB/T 6379 . CGB/T 6379. 1 GB/T 637.2 性与再现性的3 原理样品中氟护净化和富集，和lffl、外检测器进行4 试剂和材
3、料4. 1 甲酸。4.2 冰乙酸。4.3 萨葡萄糖昔酸酶C-您也ul:0.0500 g -葡萄糖昔酸酶龙滤膜过滤。使用前现配制。4.4 葡萄糖。4.5 放盐酸。36自6:1987) 酶(600000U/g) ，准确称取S)缓冲梅液溶解，用O.45m尼4.6 流动相A:乙酸镜O.05 mol/L, pH5. 0:准确称取3.90g乙酸镣于1000mL的烧杯中，加900rnL 7.(溶解并用甲酸调整至pH5.0，转移至1000 mL容量瓶中，使用前过0.45m惊膜。4. 7 流动相B:甲醇，色谱纯。4.8 流动相C:乙睛，色谱纯。4.9 11昆合流动相:将40mL流动相B，30mL流动相C以及30
4、mL流动相A相提合。4. 10 磷酸盐(PBS)缓冲榕液:称取0.8g氧化饷，0.02 g氧化悍，0.02 g磷酸二氧饵，0.115g磷酸氢二铀和0.02g葡萄糖于250mL烧杯中加约90mL的水榕解，用0.1mol/L磷酸调整pH6.0，转移至GB/T 20750-2006 100 mL容量瓶中并稀择至刻度。4.11 85%磷酸。4.12 乙酸拥溶液:0.04mol/L。称取1.95 g乙酸饵于500mL容量瓶中，加约450mL水恪解并稀释至刻度。4.13 氯化何。4. 14 磷酸二氢伺。4.15 磷酸二氢伺缓冲溶液:0.25mol/L , pH7. 0。称取17.01g磷酸二氢饵溶于400
5、mL水中，定容到500 mL，然后用0.25mol/L磷酸氢二纳调节pH至7.0(约500mL)，定容到1L。4.16 氧化铀04.17 无水磷酸氢二铀。4. 18 磷酸氢二铀梅、液:0.25mol/L。称17.75g磷酸氢二铀榕于400mL水中，定容到500mL。4. 19 乙酸正己皖溶液:乙酸+正己烧(10+90)。4.20 正己烧:色i普纯。4.21 标准物质:氟胶烟酸，纯度99%。4.22 标准储备破.50问/mL.称取适量的氟腊烟酸标准物质，用甲醇配成50g/mL的标准储备液。2 C -4.C保存，有效期为3个月。注:称取标准物的质量是按纯度修正过的质量。4.23 标准工作榕液:2g
6、/mL。吸取适量的氟胶烟酸的标准储备液(4.22)，用甲醇配制成2g/mL的泪合标准工作榕液，2.C4.C保存，有效期为1个月。4.24 标准基质榕破:根据氟股烟酸的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取破配制成不同被度(g/mL)标准基质梅液。5 仪器5. 1 液相色谱仪:配有紫外检测器。5.2 电子天平:感量为0.01g和O.000 1 g. 5.3 离心机:最大转速为10000 r/min。5.4 离心管:50mL聚丙烯离心管。5.5 均质机。5.6 振荡器。5.7 微量移液器:10JlL100L和1000L-5 000L. 5.8 氮气地缩仪。5.9 酸度计:测量精度为士0.02.5.
7、10 样品过滤器:PTFE，0.45m.5. 11 国相萃取柱:Bond Elut Certify n , 3 mL, 200 mg或相当者。5. 12 真空固相萃取装置。5. 13 旋转蒸发仪。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备去掉牛肌肉中的骨头和皮，将其搅拌均匀。分出0.5kg作为试样，将制备好的试样密封，并贴上标肇。6.2 试样的保存将试样置于一18.C条件下贮存。2 GBjT 20750-2006 7 分析步骤7. 1 提取称取2.0g试样，于50mL聚丙烯离心管中，加入乙酸梆禧液(4，12)5mL，高速旋涡报告10So r昆合后向样品中加入30L乙酸，调节样品pH至4，5，旋涡
8、据合。再加入70L新配制的庐葡葡糖昔酸酶潜攘(4.3)1昆合，于振荡器37C条件下低速振荡16ho分别向样品中加入5mL乙脯，旋涡?昆含5s , 离心10min(3 200 r/min)。转移上清液至50mL离心管中。在原液中加入5mL乙睛和1mL乙酸饵i容被(4.12)旋涡棍合，离心，将上清液转移至50mL离心管中，合并上清液，待净化。7.2 净化在温舍的上请被中加入5mL iE己皖和50L浓盐酸，旋摘帽合15s，离心5min(3 200 r/min) 0 弃去正己皖层，重复上述步骤一次。55C条件下氮吹使其体积小于5mL，加入磷酸二氢梆缓冲溶被(4.15)7 mL，旋涡混合，超声20s，5
9、C条件下离心15mn(3 200 r/min)。采用固相萃取柱(5.11).用3 mL甲醇和3mL水活化柱，将样品过柱，弃去过性液，然后用3mL水利6mL甲醇洗栓，弃去过柱准。加大真空度抽滤10min，用2mL正己:民淋洗柱子两次井弃去淋洗掖。用2mL乙酸正己院溶液(4.19)洗提柱子两次，用15mL离心管收集洗脱液。在550C条件下将洗脱液氮吹至干。随后，在每个样品中加入棍合流动相(4.9)1mL，旋涡泪合5s，超声5So样饿用0.45m的撞膜过撞到进样瓶中，待测。7.3 删定7.3. 1 被相色谱测:条件的色谱柱:Inertsil，ODS-3，250mmX4. 6 mm，5m，或相当者;川
10、流速:0.4mL!min; c) 检测波长:285丑m;d) 柱温:35 oC ; 的进样量:20L;f) 运行时间:20min; g) 延迟时间:10 mino 7.3.2 液相色谱测定用氟腊烟酸的标准基质榕液(4.24)分别进样，以峰面积和工作标准潜液放度绘制标准工作曲线，样品榕被中氟腊烟酸的响应值应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，氟胶烟酸保留时间约为13.0 min，标准物质色谱图参见图A.1。氟胶烟酸的添加政度及其平均回收率的试验数据参见表B.L7.4 平行试验按照上述步骤，对同一试样进行平行试验。7.5 回收率试验空白样品中器加标准悔攘按7. 1和7.2操作，测定后计算样品
11、蹄加的回收率。8 结果计算按式(1)计算试样中氟肤烟酸的残留量:AU一八Unu-hu nu-nu -tAH咆tEAX V-m fiv - X ( 1 ) 式中tX一一试样中被翻组分残留量，单位为毫克每千克Cmg/kg); c一一从标准曲线上得到被测组分溶液的坡度，单位为撒克每毫升(g/mL); V一一样品梅被定容体积，单位为毫升(mL); 3 GBjT 20750-2006 m一一样品需破所代表试样的质量，单位为克(g)。注2计算结果需将空白值扣除。9 精密度本标准的精密度数据是按照GB;T6379.1和GBjT6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重
12、复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，牛肌肉中氟腊烟酸含量围及再现性方程为:0.01 4 GB/T 20750-2006 附录A(资料性附录)标准物质色i普圈氟股烟酸色谱图，见图A.LmAU 12.957 兽药名称氟胶烟酸川一川一阳91. 0 5 goN|omhONH阁。华人民共和国家标准牛肌肉中氟股烟酸残留噩的测定液相色i普紫外检测法GB/T 20750-2006 国中祷中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销头印张O.75 字数10千字2007年3月第一次印刷开本880X12301/16 2007年3月第一版定价14.00元铃书号:155066 1-28966 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533
