1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20753-2006 牛和猪脂肪中醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕自同和醋酸甲地孕自同残留量的测定液相色i普m紫外检测法Method for the determination of melengestrol acetate , chlormadinone acetate and megestrol acetate residues in bovine and porcine fat一LC-UV Detection Method 2006-12-31发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2007-03-01实施
2、发布目。本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。GB/T 20753-2006 本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、唐毅锋、方晓明、王传现、姜维。本标准系首次发布的国家标准。I GB/T 20753-2006 1 范围牛和猪脂肪中醋酸美仑孕阔、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣残留量的测定液相色谱-紫外检测法本标准规定了牛和猪脂肪中方法。孕酣残留量的液相色谱测定本标准适用于牛和猪本标准的方法检出鸣、酣、醋酸氯地孕酣和醋tfI地
3、孕酣、醋酸甲地孕酣和醋酸氯地孕酬胡为O边10mg/ kgo 2 规范性引用文件下列文件中的的修改单(不包括是否可使用这些或版本。件，其随后所有议的各方研究却具方法与:总则与定义(GB/T 6379.1 GB/T 6379. 性与再现性的GB/T 6682 3 原理脂肪样品经微测，外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用4. 1 乙睛:色谱纯。4.2 甲醇z色谱纯。4.3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 正己烧z色谱纯。4.5 氯化模(MgC12 6H2Q)。4.6 氢氧化铀。4. 7 盐酸。87) 级纯，7J为GB/T6682规定的一4.8 乙酸乙醋+正己烧(1十19):量取10mL乙酸乙酣(4
4、.3)与190mL正己烧(4.4)棍合。4.9 乙酸乙醋+正己惋(1十的:量取40mL乙酸乙醋(4.3)与160mL正己炕(4.4)棍合。4. 10 盐酸榕液:0.2%。移取2.0mL盐酸(4.7)与水泪合至1Lo 4. 11 氧化镜榕液:1. 0 mol/L。称取20.3 g氯化模(4.5)，用水溶解井定容到100mLo 4. 12 氢氧化铀榕液:0.1mo1/Lo称取1.00 g氢氧化铀(4.的，用水潜解井定容到250mL。4. 13 乙腊+水(65十35):量取650mL乙睛(4.1)与350mL 7.(擂台，摇匀，脱气，待用。1 GB/T 20753-2006 4. 14 标准物质:醋
5、酸美仑孕嗣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣，纯度二三97%。4. 15 标准储备薛液:1 000g/rnL。准确称取醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣(4.14)标准物质各0.0500g于50rnL容量瓶中，用甲醇(4.2)搭解井定容至刻度。标准储备榕液于4.C保存，可使用1年。4. 16 t昆合标准溶破1: 100g/rnL。分别腹取10.0mL醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣标准储备液(4.15)于100rnL容量瓶中，用甲障定容。诙棍合标准榕被于4.C保存，可使用1年口4. 17 棍合标准榕液ll:1.0g/rnL，取1.0 mL 11昆合标准陪夜1(4.16)于100mL容量
6、瓶中，用甲醇定容。该说合标准溶眼于4.C保存，可使用6个月。4. 18 提合标准工作溶液:分别吸取10L，20L，40L，80L，100Lt昆合标准潜搜ll(4.17)添加到980L，970L.950L，910L，890L的乙睛+水(65十35)(4.13)中，再加入10L盐酸榕搜(4.10) ，t昆匀，得到陆度为0.010g/rnL、0.020g/mL、0.040g/mL、0.080g/mL和O.10g/rnL 1昆合标准工作溶攘，该搭被当日制备。4. 19 缸丙基固相萃取柱或相当者:3rnL , 500 mg，使用前分别用5mL乙酸乙醋和6rnL正己烧淋洗，保持柱体湿润。4.20 掠膜:O
7、. 2m. 5 仪器5. 1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g. 5.3 氧气融缩仪。5.4 固相革取装置z配有真空泵。5丘.511低民温离心#机机t:一5C至室温，最大转速50Oo r旷/rnin5.6 液体?泪昆匀器。5.7 恒温水陷。5.8 橄榄炉E5.9 移液器:10L100L和100Ll000L. 6 试样的制备与保存6. 1 试样制备担大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放入底部事有玻璃棉的漏斗中，将漏斗放入150mL 的烧杯中，将烧杯置于微波炉内。使用最大功率，加热30s,-., 60 5，如果脂肪没有融化，可在间隔30s 60 s以
8、后重复加热30s-60 5，直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴人烧杯中。根据需要熬制的脂肪量，可重复加热。把熬制好的脂肪捕放人样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样保存如果熬制好的脂肪攘体不立刻测定，则将熬制好的脂肪样品置于一18C冰柜中，冷蹄保存。7 测定步骤7. 1 提取称取2g脂肪样品，精确到O.01 g，置于50mL具塞离心管中，加入5mL乙睛，于60C水播中保持3 rnin，使团体脂肪融化。用液体捏匀器(5.6)捐旋1min.于一S.C以3500 r/min离心7min，吸取上清液至15mL具塞聚丙烯离心管中，再向沉淀物中加入SrnL乙腊重复提取一次，合井上清准。向合井的乙腊提取被中加
9、入2mL正己:民，涡旋1min，于-50C以3500 r/min离心Smin，弃去正己烧层，乙睛相再用2rn I,. iE己皖重复搅捧一次，弃去正己烧层。乙脯提取液于60.C用氮气被缩仪吹干。2 GBjT 20753-2006 7.2 皂化向乙腊提取液(7.1)中依次加人4mL正己;皖、1mL氢氧化饷榕擅(4.12)和0.5mL氧化镜椿被(4.11)，于被体?昆匀器上快速提勾10s，在60.C水摇中保持15min，于一5.C以3500 r/min离心5min, 腹取上清被至15mL破璃离心管中。向沉淀物中再加入4mL正己班，混匀，于60.C水恪中加热15 min后，于一5.C以3500 r/m
10、in离心5min，合并上清班。于60.C用氯气被缩仪吹干，用1.0 mL正己烧梅解残渣，待净化。7.3 净化将上述样?在(7.2)移人霞丙基固相萃取柱中(4.19)，用2r止正己:境分两投润洗玻璃试管，洗被也移入固相萃取柱中。待样液流出后，依次用5mL正己峰和6mL乙酸乙酶十正己皖榕被(4.8)淋搅固相萃取柱，淋洗液流出后，固相萃取柱抽干2min，最后用3.5mL乙酸乙醋十正己烧瞎擅(4.9)搅脱，洗脱接收集于另一15mL玻璃离心管中，于60C用氮气浓缩仪吹干。残余物用990L乙腊+水(4.13) 涡旋榕解，静止15min后，加人10L盐酸榕掖(4.10)，氓匀，过0.2m措膜后，供被相色谱测
11、定。7.4 测定7. 4. 1 H草帽色情条件a) 色谱柱:Kromasil C1S 5m，250 mmX4. 6 mm(内径)或相当者1b) 预柱:C18 ，5m， 12.5 mmX4. 6 mm(内径); c) 流动相:乙腊十7.1.(65+35)I d) 流速:1. 0 mL/min; 的柱温:35C ; f) 检削被长:292nm; g) 进样量:40L7.4.2 液相色谱测定用?昆合标准工作榕被(4.18)分别进样，以标准工作梅掖被度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣的响应值均应在仪器测定的结
12、性范围内。在上述色谱条件下，醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣标准物质的液相色谱图参见图A.L7.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6 回收率试验阴性样品中添加标准榕班，按7.17. 3操作，测定后计算样品添加的回收率。8 结果计算结果按式(1)计算:A-nu nu士门UnU卢nu咱目击-叮EA v-m C 一X . ( 1 ) 式中:X一一-试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克Cmg/kg); C一一从标准工作曲线得到的试样溶液中被削组分的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一试样搭鞭定容体积，单位为毫升(mL); m一一最终试样榕榄所代表的试样质量，单位
13、为克(gL9 精密度本标准的精臂度数据是按照GB/T6379.1和GBjT6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值GB/T 20753-2006 以95%的可信度来计算。9.1 重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中被测物的含量范围及重复性方程见表1和表2。化合物名称醋酸美仑孕酣醋酸氯地孕酣醋酸甲地孕酣表1牛脂肪中三种孕酣的含量范围及重复性和再现性方程含量范围/(mg/kg)重复性限fO. 0100. 050 r=O. 133 8 m+ 0.253 2 注，m为两次测定结果的算术化合物名称醋酸美仑孕酣醋酸氯地孕丽醋酸甲地孕酣9.2 再现性在再现性
14、量范围及再现4 表21和表2。再现性限RR=0.209 3 m R=0.134 1 m R=0.122 8 m 再现性限R17m十1.223 5 3 m+1. 0742 中被测物的含GB/T 20753-2006 附录A(资料性附录)标准物质渡捆色谱图醋酸美仑孕酣、醋酸氯地孕酣和醋酸甲地孕酣标准物质的液相色谱图，见图A.l。o. 0.0006 o. 口o.o. -0. 3一一醋酸美固14.00 15.00 t Irnin 5 G/T 20753-2006 附录B(资料性附录回收率本方法中三种孕酣添加放度及其平均回收率的试验数据，见表B.l。表B.1 三种孕酣添加由度及其平均由收率的试验数据(n
15、=10)化合物名称添加浓度/(mg/kg)平均回收率1(%)0.010 91. 8 醋酸美仑孕酣。.02087.4 0.050 88.8 0.010 89. 1 醋酸氯地孕酣0.020 86. 7 0.050 89.0 0.010 88.1 醋酸甲地孕颐0.020 89.6 0.050 90. 2 L一一一一一6 中华人民共和国国家标准牛和猪脂肪中醋酸盖仑孕田、醋酸毒草地孕酣和醋酸甲地孕酣残圄量的测定程相色i曹紫外检测法GB/T 20753-2006 提中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X12301/16 印张0.75字数12千字2007年3月第一版2007年3月第一次印刷争争书号，155066 1唰28933定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533UCON-的mhhCNH阁。
