1、ICS 67.050 X 04 中华人民圭t_，飞、和国国家标准GB/T 20754-2006 畜禽肉中保泰松残留量的测定液相色谱紫外检测法Method for the determination of phenylbutazone in livestock and poultry muscles 一LC-UV detection method 2006-12-31发布中华人民共和国国家质量监督检验检菠总局中国国家标准化管理委员会2007-03回01实施发布中华人民共和国国家标准畜禽肉中保泰松残留量的测定班相色i蕾紫外检测遗GB;T 20754-2006 4牛中国标准出版社出版发行北京复兴门外
2、三里柯北街16号邮政编码:100045阿址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张0.5字数10千字2007年3月第一版2007年3月第一次印刷非书号:155066 1-28934 定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533目。本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。GB/T 20754一2006本标准
3、主要起草人:庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群、李学民、张进杰、范春林、刘永明、石玉秋。本标准系首次发布的国家标准。GB/T 20754-2006 1 范围畜禽肉中保泰松残留量的测定液相色i普皿紫外检测法本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中保泰松残留量的液相色谱测定方法。本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中保泰松残留量的测定。本标准的方法检出限:5. 0g/烛。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协脱的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用
4、文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T 6379.1-2004 ,180 5725-1:1994 ,IDT) GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379. 2-2004 ,150 5725-2: 1994 ,IDT) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992 , neq 180 3696: 1987) 3 原理畜禽肉中保泰松残留用甲醇+二硫苏糖醇的乙酸乙醋溶液提取，提取破浓缩后，用甲醇
5、十氨水十二氯甲烧+二硫苏糖醇的乙酸乙醋榕液梅解，弗罗里土固相萃取柱净化，用冰乙酸十甲醇+二氧甲院十乙酷泪合榕液洗脱并蒸至近干，残捷用流动相梅解定容，样品溶被供液相色i普-紫外检测器翻定，外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 冰乙酸。4. 3 乙睛:色谱纯。4.4 乙酸镜。4.5 氧氧化钱。4.6 乙醋。4. 7 二硫苏糖醇:纯度99%。4. 8 乙酸乙醋:色谱纯。4.9 二氯甲炕:色i普纯。4. 10 乙酸锥榕液:0.05 mol/L。称取1.95 g乙酸锻(4.的，用水溶解并定容于500mL容量瓶中。4.
6、 11 流动相:0.05 mol/L乙酸镀悔?夜(4.10)+甲醇(4.1)+乙腊(4.3)(50+37+13)。4. 12 榕液A:O.25 mg/mL。称取O.125 g二硫苏糖醇(4.7)，用乙酸乙醋(4.8)溶解并定容至500mL 容量瓶中。1 G/T 20754-2006 4. 13 溶液B.甲醇十榕液A(4.12)0+7)。用前制备。4. 14 溶液C:甲醇十氢氧化锻(4.5)十二氧甲惋(4.9)十梅液A(l十1十70十70)。用前制备。4. 15 溶液D:吸取2.0mL冰乙酸(4.2)和4.0.mL甲醇于100mL容量瓶中，用二氧甲皖定容至刻度后，与等体积乙醋据合。用前制备。4.
7、 16 保泰松标准物质:纯度注95%。4. 17 保泰松标准储备榕液:50.0问/mL。准确称取5.0mg保泰松标准物质(4.16)于100mL容量瓶中，用80mL甲醇梅解，加入5.0mL溶液A，用甲醇定容至刻度，泪匀。40C保存。18 中间被度保泰松标准陪破:2.0p.g/mL。吸取0.4rnL保泰松标准储备榕掖(4.17)于10mL容量瓶中，用流动相定容至刻度。40C保存odj 酬脚刚黯阔地队4. 19 保泰松标准工作梅液:分别吸5L、5.0L、12.5L乃电p.L、50.0L中间被度保泰松标准培根(4.18)，用流动相定容3170mL ，脚刷咆!阳也战.0 ng/卑、25.0ng/mL、
8、50.0ng/mL、100.0 ng/mL榷度系列保泰悔标摸工f剧曹液。在4C保存，可使用可周。4.20 弗罗里土固相革取才提周盖莲Kf:2g ,12 mLo用前用5mL 榕赣(:(4.14理。保持柱体瘟润。4.21 滤膜:0.2rno5 仪器5. 1 液相色谱仪:5.2 天平:感量O.5.3 氮气浓缩仪。5.4 离心管:5015.5 固相萃取装5.6均质器萨5. 7冷陈离心机也从全部样品中取1封后作为试样，标明拍、变化。6.2 试样的保存将试样于一180C保存。7 酬定步骤7. 1 提职称取2g试样，精确至0.01g，置于50mL伊J. -. /中。加入8mL溶液B(4.13)，于振荡器上剧
9、烈振茄10min，在50C以4000r/min离心5min后，取上清液于另一离心管中;重复前述步骤，将残渣再提取两次。合并三次提取班，用氧气被缩仪于550C水浴中吹至近干，待净化。7.2 净化ffl 5 mL榕被C(4.14)分两次溶解残渣，分别倒入弗罗里土固捆萃取柱(4.20)中，使样被以1. 0 mL/min的流速通过弗罗里土固相萃取柱，待样被全部流出后，再用1mL溶液C(4.14)洗柱，弃去全部就出蔽。最后用15mL溶被D(4.15)洗脱，洗脱液收集于30mL锥形试管中，用氨气浓缩仪于550C水播中吹至近干，残破用1.0 mL流动相梅解、定容。过O.2m滤膜(4.21)后，供准相色谱仪测
10、定。7.3 色i普测定7.3.1 在相色谱条件a) 色谱柱:Migh tysil C18 ，3m，150 mmX4. 6 mm或相当者;b) 流动相:0.05mol/L乙酸钱溶液+甲醇+乙腊(50十37十13);c) 流速:0.8mL/min; d) 柱温:400C ; 的进样量.40L;f) 波长:270 nm。7.3.2 液相色谱测定G/T 20754-2006 在仪器最佳工作条件下，以保泰松标准工作洛液(4.19)浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量。使样品梅液中保泰松的响应值在仪器削定的线性范围内。在上述色谱条件下，保泰松的参考保留时间为8.1
11、 min，保泰松标准榕掖色谱图见图A.1。7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。8 结果计算试样中保泰松残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算:v . .1000 =cX一一一一. . . . .门)rn、1000 式中:X一一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg); C一一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为撒克每毫升(g/mL); V一一试样悔?夜定容体积，单位为毫升(mL); m一一试样榕液所代表试样的质量，单位为克(g)o计算结果应扣除空白值。9 精密度本标准的精密度数据是按照GB/T6379
12、. 1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，畜禽肉中保泰松含量范围及重复性方程见表10表1含量范围及重复性和再现性方程药物名称含量拖围/Cg/kg)重复性限再现性限R保泰松5.0-150.0 Igr=O. 764 91gm一0.8285 IgR=O. 712 Olgm一O.760 1 注:ln为两次测定值的算术平均值。如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限
13、R，畜禽肉中保泰松的含量范围及再现性方程见表10SON-寸的hONH阁。附录(资料性附录)标准物质液相色谱圄A GB/T 20754-2006 保泰松标准物质液相色i普阁，见图A.L0.020 0.018 0.016 由口气车时惘聪0.014 0.012 0.010 0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 12.00 I/min 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 -0.002 保泰松标准物质在相色i昔图图A.l附录(资料性附录)回收率B 本方法中保泰松添加放度及其平均回收率的试验数据，见表B.10 表B.l保泰松添加浓度及其平均回收率的试验数据药物名称添加水平!(g!kg)平均回收率!(%) 5.0 86.9 10.0 82. 2 保泰松50.0 91. 4 100.0 90.3 侵权必究A吐qa-。，-AU 号一价书一定7G 10.00 9号版权专有GB/T 20754-2006
