1、-v -J ICS 65.020.01 B 16 量B和国国家标准11: -、中华人民GB/T 29397-2012 香蕉枯萎病菌4号小种检疫检测与鉴定Detection and identification of Fusarium oxysporum f. sp. Cubense (E. F. Smith) Snyder & Hansen Race 4 2012-12-31发布2013-06-01实施俨?可中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布G/T 29397-2012 前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会
2、(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位z全国农业技术推广服务中心、广东省植物检疫站、华南农业大学。本标准主要起草人:王玉笙、王琳、吴立峰、姜子德、李敏慧、任小平、李小妮、吴仕豪。I G/T 29397-2012 香蕉枯萎病菌4号小种检疫检测与鉴定1 范围本标准规定了香蕉枯萎病菌4号小种Fusariumoxysporum f. sp. Cubense(E. F. Smith)Snyder &. Hansen Race 4J的现场检验和实验室检测鉴定以香蕉枯萎病菌4号小种的为害症状、病原菌形态、致病性测定结果、Komada改良培养基上的菌落性状和寄主范围为依据，明确了现场查验、实验室鉴定
3、、菌种保存的方法。本标准适用于香蕉(包括香蕉、大蕉、粉蕉等香蕉枯萎病菌4号小种易感品种)生长期间的香蕉枯萎病菌4号小种的检测。2 原理根据香蕉枯萎病菌4号小种的为害症状，取病健部交界组织分离培养病原菌，根据病原菌形态、致病性测定结果、疑似病菌在Komada改良培养基上的菌落性状进行判定。3 仪器、用具及药晶3. 1 仪器、用具仪器z超净工作台、培养箱、光学显微镜、高压灭菌、照相机等。用具:铲、枝剪、砍刀、纸袋、油性笔、记录本、标签纸、小刀片、培养皿、载玻片、盖玻片、慑子、挑针、酒精灯等。3.2 药晶0.1%升隶、70%乙醇、元水乙晖、灭菌水、去离子水、40%甘油、磷酸氢二饵、氯化饵、7水硫酸臻
4、、乙二肢四乙酸铁铀、L-天门冬酷胶、半乳糖、琼脂粉、75%五氯硝苯可湿性粉剂、牛胆粉、副砂、硫酸链霉素、10%磷酸等。4 现场查验4. 1 现场调查4. 1. 1 调查范围香蕉种植地及香蕉试管苗二级苗生产和销售场地。4. 1.2 调查方法对香蕉枯萎病菌4号小种的寄主植物进行踏查，观察其生长状况;向香蕉种植者和管理人员询问，确定疑似香蕉枯萎病菌4号小种为害的田块，对疑似田块进行现场检验。4.1.3 症状识别对地上部表现症状的植株，剖开其根部和假茎部维管束组织，观察是否发生颜色变化。1 G/T 29397-2012 对地上部无明显症状的植株，随机抽取部分植株，观察其根部及假茎部位维管束组织是否发生
5、颜色变化。症状表现参见附录A。4.2 样本的采集采样前需对取样现场及病害症状拍照。疑似病株的取样应选取症状典型、中等发病程度的植株，取样部位包括蕉头病健部交界组织(8 cmX8 cm)、根、假茎(长20cm)、叶柄;对二级苗应取整个植株，所有样品采用坚韧纸质材料包裹，切勿采用塑料薄膜包裹。样品应附上采集时间、地点、品种的记录和fIl间照片。采样后填写附录B。5 实验室检测鉴定/少/于/5. 1 痛原菌的分离培养/5. 3. 1 Komada改良培养基的配制融化900mL基本培养基磷酸氢二饵，1g;氯化饵，0.5g;硫酸楼，0.5g;乙二胶四乙酸铁锅，0.01 g;L-天门冬酷膀，2g;半乳糖，
6、10g;琼脂粉，16g;去离子水定容至900mL，高压灭菌，在无菌操作下与100mL的盐溶液(5%五氯硝苯可湿性粉剂，0.9g;牛胆粉，0.45g;棚砂，0.5g;硫酸链霉素，0.3 g;用10%磷酸调pH值到3.8士0.2)棍合，倒平板。5.3.2 Komada改良培养基上菌落特征将经5.1测定的疑似病菌的单抱分离菌株接于Komada改良培养基平板上，250C、40W普通日光灯相距约30cm照射下培养10d后观察菌落性状，4号小种的菌落边缘为裂齿状，而1号小种及其他的GB/T 29397-2012 镰刀菌的菌落边缘则平滑，如图1。图1Komada改良培养基上的菌落形态(左图为4号1号小种。)
7、/ 6 结果判定/ 3 GB/T 29397-2012 附录A(资料性附录)香蕉枯萎病菌基本信息A.1 分类香蕉枯萎病菌Fusariumoxysporun f. sp. Cubense (E. F. Smith) Snyder &. Hansen隶属半知菌门Deuteromycotina、丝抱纲Hyphomycetes、瘤座菌目Tubercl山riales，镰刀菌属Fusarium，尖抱镰刀菌古巴专化型Fusariumoxysporium f. sp. Cubense。至今共发现有4个生理小种，其中4号小种是1967年首先在我国台湾省报道的一个小种，能侵染大蜜啥、矮香蕉DwarfCavendi
8、sh(AAA)、台湾拉屯且Taiwan Latundan( AAB)、PisangLilin ( AA)、棱香蕉和野蕉(B时，尤其能侵染较抗病的香牙蕉Cavendish(AAA) ，毁灭性最大。A.2 为害症状A.2.1 外部症状该病菌侵染香蕉根系和球茎，堵塞输导组织，使罹病植株表现黄叶症状。植株感病早期无明显外部症状，染病一段时间后，病害先从下部较老的叶片开始发生，发病初期叶片边缘变黄并逐渐扩展至主脉，病叶叶柄在靠近叶黯处容易折曲、下垂，后期病叶凋萎后倒挂在假茎旁，直至全株枯死;有时假茎基部开裂。若是假植的组培苗染病，其叶片褪绿、无光泽，呈黄绿色或局部甚至整叶黄化;严重时整个假茎全部变为褐色
9、，部分根变褐腐烂。A.2.2 内部症状横切罹病香蕉植株的球茎部，可见维管束组织变成红褐色或暗褐色。纵剖病株球茎，可看到红褐色至暗褐色病变的维管束成线条状，近茎基部颜色深，病变一直延伸到球茎部，根系变黑褐色而干枯。若为假植组培苗，纵剖罹病小苗的假茎则可见褐色至红褐色的坏死斑点。A.3 病原菌形态(引自NelsonP. E , et al , 1983) 香蕉枯萎病菌可产生3种形态的元性分生抱子大抱子，小抱子，厚垣抱子。大抱子镰刀形或纺锤形，具3-5个隔膜，顶端细胞呈尖刀状或钩状，脚细胞明显，壁薄，(22m-36m)X (4m-5m);小抱子生于瓶梗状的产抱细胞上，圆形或椭困形至肾形，具0-1个隔
10、膜，壁薄，(5m-7m) X (2.5m-3m)，在人工培养基上很容易见到。厚垣抱子圆形，壁厚，间生或顶生于菌丝上，多单生，9mX7m，可在土壤中存活达3年-5年(见图A.l)。至今未发现有性态。4 GB/T 29397-2012 图A.1香蕉枯萎病菌的显微形态图(引自PloetzR C. 2005a) 5 GB/T 29397-2012 附录B(规范性附录)香蕉枯萎病菌4号小种调查取样记录表表B.1 香蕉枯萎病菌4号小种调查取样记录表编号:生产/经营者地址及邮编联系/负责人联系电话调查日期抽样地点样品植物名称(中文名和学名)品种植物生育期调查代表株数或面积植物来源编号名称症状描述:发生与防控
11、情况及原因z抽样方法、部位和抽祥比例备注:抽样单位(盖章): 生产/经营者抽样人(签名): 现场负责人年月日年月日注2本表一式两份，抽样单位和受检单位各一份。6 GB/T 29397-2012 附录C(规范性附录)植物有害生物样本鉴定报告表C.1植物有害生物样本鉴定报告编号z植物名称品种名称 植物生育期样品数量取样部位 样品来源送检日期送检人送检单位联系电话检测鉴定方法:检测鉴定结果2备注:鉴定人(签名): 审核人(签名): 鉴定单位盖章z. 年月日注:本单一式三份，检测单位、受检单位和检疫机构各一份。吗eN-ON|h的NH阁。华人民共和国家标准香蕉枯萎病菌4号小种检瘟检测与鉴定GB/T 29
12、397-2012 国由t* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销晤印张O.75 字数15千字2013年4月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2013年4月第一版晤16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107书号:155066. 1-46460定价GB/T 29397-2012 打印日期:2013年4月24日F002
