1、ICS 65.020.01 B 16 一J(:-=- r:.-r,:._ .飞. fIIiL:=司r:.-脚=宵-宵:-f:. L; 飞.飞飞.r:. 院.川川飞:、6飞:_，. :.-町、，.眉E口，:.R、牛L:.二1.，二.，工，-、A_，几.飞E咱u.，山. : . . .:.飞:.咽凶中华人民共和国国家标准GB/T 29588-2013 松针褐斑病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Mycosphaerella dearnessii Barr. 2013-07-19发布2013-12-06实施_副司flh咱只飞句j刀斗1、/h-阿蛤-、哩缸四
2、也毒农睛再?可惜吵E置问/中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 29588-2013 前本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位z中华人民共和国安徽出人境检验检疫局、中华人民共和国昆山出人境检验检疫局。本标准主要起草人z姚剑、廖太林、温劲松、郑海松、李刚、余晓峰、张萍、李百胜、李云飞、孙娟娟、方元炜、戴雷、于立繁。I GB/T 29588-2013 松针褐斑病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了松针揭斑病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于松属(Pinus)苗木、枝叶中
3、松针褐斑病菌的检疫和鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样3 松针褐斑病菌基本信息中文名z松针褐斑病菌。学名:A句coshaerelladearnessii B町r.异名:Scirrhia acicola (Dearness) Siggers, Systremma acicola (Dearness) W olf &. Barbour. 属真菌界Fungi，子囊菌亚门Ascomycota，腔菌纲Loculo
4、ascomycetes，座囊菌目Dothideales，座囊菌科Dothideaceae，球腔菌属Mycoshaerella。其元性型为半知菌亚门Deuteromycotina，腔抱纲Coelomycetes，黑盘抱目Melanconiales，黑盘抱科Melanconiaceae，座盘抱属Lecanosticta中的Lecanostictaacicola (Thmen) Sydow et Petrak异名:Lecanosticta Pini Sydow, Septoria acicola (Thmen) Sac cardoJ。松针褐斑病菌以子实体和病斑组织中的菌丝体在树上病叶或落地病叶上越冬
5、，其有性型偶见于凋落的针叶上。松针揭斑病菌的其他信息参见附录A.4 方法原理经现场查验、取样后，实验室用显微镜等仪器设备进行检测，根据其危害症状、形态学特征进行结果判定。5 仪器及用具5. 1 仪器显微镜，超净工作台，恒温箱，高压灭菌锅。5.2 用具解剖刀，剪刀，锤子，放大镜。1 GB/T 29588-2013 6 试剂和培养基6. 1 试剂2%次氯酸铀，70%酒精。6.2 培养基PDA培养基。7 现场检验7. 1 抽样方法按SN/T2122进行抽样。7.2 现场查验搜集并检查针叶是否有褪色小斑点或呈三段不同颜色的段斑，即上段褐色枯死，中段揭色、绿色相间，下段为绿色。进一步观察针叶两面表皮下叶
6、肉组织中，有元块状或纽扣状、长度为1mm左右的圆形或近似圆形的黑色小点。凋落的松针上是否有黑色、不规则分布的症状。将疑似感病样品带回实验室作进一步检验。8 实验室检验8. 1 切片检验选取带黑色小点针叶，用剪刀剪取带有黑色、圆形或近似圆形斑点的针叶组织(约5mm)切片，从中选择薄而带有完整黑色小点部分的切片，用移植环移于载玻片中央的水滴中，在显微镜下观察分生抱子盘、分生抱子梗以及分生袍子特征或病原菌有性型相关症状。如针叶病斑无子实体或子实体未成熟，可将有病针叶在25c -30 c条件下保湿培养，待长出子实体并成熟后再做切片镜检时间约需20d. 8.2 分离培养在典型病斑中切取小块病组织，在70
7、%酒精中浸30s，或用2%次氯酸铀消毒60s，用无菌水冲洗3次后置于PDA平板上，25c恒温培养。观察菌落生长性状，12d后镜检。8.3 形态观察从菌落中挑取少许培养物，以水作津载剂，制成玻片，在显微镜下观察。如为松针揭斑病菌的无性型，则可观察到分生抱子盘、分生抱子梗和分生抱子。详细记录并测量分生抱子梗和分生抱子大小。9 鉴定特征9. 1 病菌形杏特征元性型Lecanostictaacicola (Thmen) Sydow et PetrakJ分生抱子盘在针叶表皮下的叶肉组织中，块状或纽扣状，黑色，高75m-225m，宽100m-275m，长度变化大，可达1mm以上，上方平GB/T 29588
8、-2013 展或呈浅盘状。分生抱子梗元色至灰揭色，不分校，(15m25m)X3mD分生子包子梭形至长形，直或不规则弯曲，两端较狭窄，先端钝尖，下端平截，无色至暗褐色，1个6个隔膜，多数3隔，(24.5m 51. 0m) X (3.4m6.3m)，平均37.9mX4.2mD马尾松针叶上产生的分生抱子略短而肥，不同寄主针叶上产生的分生抱子与分离培养的稍有差异。有性型(Mycosphaerelladearnessii Barr)子囊座散生，线形，生于表皮下后突出，使寄主表皮开裂拱起高于针叶表面30m50m;黑色，多腔，(400m850m)X (120m250m) ，偶见单腔，腔壁由假薄壁组织构成。子
9、囊腔通常12个以上排成一列或三列，球形或烧瓶形，(60m70m)X (50m65m) ，有孔口，有缘丝，无侧丝。子囊双层壁，含8个抱子，元色，囊状或圆筒状，(30m55m) X (6.5m10. 5m)，顶端圆。子囊袍子呈一行或不规则两行，无色，一分隔，长圆形或模形，一端圆，一端梭形，(7. 5m 12.5m) X (2m3m)，典型的具四油滴。精子器阶段属Asteromella型，子座单腔或多腔，精子近元色至灰绿色，(2严m4tn)X (0. 8m1.3m) ，杆状(参见附录B)。9.2 培养性状在PDA培养基上，菌丝生长良好。组织分离4d可见白色菌落，10d后菌落底部淡褐色，开始形成黑色隆
10、起子座，12d以后子座出现具油漆光泽的分生抱子堆，16d以后菌落直径达6rnm10 mmD 9.3 与松针虹斑病菌Dothistromapini Hulb町的区别松针虹斑病菌分生抱子无色，壁薄光滑，在PDA培养基上培养产生红色素和红色晶体，在松针上引起带红色的病斑。Lecanostictaacicola分生抱子为荼褐色或烟褐色，壁厚，上布黑色疵状突起，在PDA培养基上不产生红色素和红色晶体，松针上病斑为褐色而不是红色。10 结果判定如症状与描述症状胸合，且切片或分离培养观察的病菌形态特征与描述的病原有性型或无性型的特征相符，即可鉴定为松针褐斑病菌。门样晶、菌种保藏分离菌转接在PDA培养基斜面上
11、，待斜面表面提满菌丝后，置于4C保存，定期转接。有条件可进行冷冻干燥保存。检出病菌的样品妥善保存6个月。保存期满灭活处理。3 GB/T 29588-2013 附录A资料性附录)松针揭斑病菌的分布松针褐斑病菌分布于以下地区za) 欧洲z法国、德国、瑞士、前南斯拉夫、格鲁吉亚。b) 北美洲z加拿大、墨西哥、美国。中美洲以及加勒比海地区z伯利兹、哥斯达黎加、古巴、危地马拉、洪都拉斯、牙买加。d) 南美洲z哥伦比亚。e) 亚洲z中国(河北、辽宁、吉林、江苏、浙江、安徽、福建、江西、山东、河南、湖南、广东、广西。f) 非洲z南非。4 GB/T 29588-2013 附录B资料性附录)症状及病原菌形态特征
12、松针褐斑病病状见图B.l、图B.2，病原菌形态特征见图B.3、图B.4. 图B.1 栓针揭斑病感病症状圄B.2松针褐斑病捕时病斑5 GB/T 29588-2013 6 主旦，d e 圄B.3松针褐斑病菌分生强子圄B.4松针揭斑病菌分生于包子盘mFON|mmNH阁。华人民共和国家标准栓针揭斑病菌检疫鉴定方法GB/T 29588-2013 国中* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部1(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张0.75字数14千字2013年9月第一次印刷开本880X12301/16 2013年9月第一版* 书号:155066. 1-47533定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)68510107打印H期;2013年10月11日F002
