1、j D B34 安徽省地方标准DB34/ T1 73 - 1999 公共场所微生物采样方法与检验技术规范1999一01一01发布1999-01-01实施安徽省技术监督局发布J DB3/T173-1999 目次前言 . (11) l 范围.-.-. ( 1) 2 引用标准-. .-. ( 1) 3 监测是的选择与监测频率-. . ( 1) 4 采悻方法与检验技术嗖范. ( 1) 5 现场采佯操作的质量控制. (们6 佯品送俭的质量控制. (8) 附录气(惊准的附录)检垃公共场所细菌色，数的设备与材料- . ( 9) 附录B(际准的附录)检验公共场所大肠菌群的设备与材料 . (10) 附录C(标准
2、的附录)俭验公共场所致病菌的设备与材抖. (13) DB34/T173-1999 前言为了进一步贯彻执行公共场所卫生管理条例).加强对安徽省各类公共场所的卫生监督、监测与管理，防止疾病的传播。特制定本地方标准。本标准是与GB9663-9673-1996、GB16153一1996卫生标准中微生物指标相配套的采样方法与俭验技术规范。标准中附录A、附录B、附录C为标准附录。本标准由安徽省卫生厅提出。本标准主要起草单位:安徽省卫生防疫站本标准主要起草人.徐业林、胡棋、叶玲霞、杨志平、周水平-a. 玄徽省地万标准DB34/Tl73一1999公共场所微生物采样才法与检验技术规范1 范围本标准规定了公共场所
3、微生物检测的选点与采佯频率、采佯方法与俭验技术规范、现场采悻操作与佯品送检的质量控制。本标准适用于公共场所室内空气中细菌总数.公用茶具、毛巾、床上卧具中的细菌总数、大肠菌群、致病菌以及脸(脚)盆、浴(缸)盆、座垫、拖鞋中的致病菌的采律与检验工作。2 引用标准下列惊准所包含的条文.通过在本标准中引用而构成本标准的条文。本标准出版时.所示版本均为有效。所有的标准都会被修订.使用标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB14934-94食(饮)具消毒卫生标准GB/T 17220-1998公共场所卫生监测技术规范3 监测点的选择与监测频率按GB/TI7220规定执行。4 采样方法与检验技术规范
4、4. 1 公共场所空气中细菌总数4. 1. 1 采样!i:、采样高度与频率接GB/TI7220规定执行。4. 1. 2设备与材料接附录A执行。4. 1. 3 采悸与俭验方法4. 1. 3. 1 撞击法采撵时选择对空气中的细菌捕获率达95%的撞击式空气微生物采样器3按照仪器使用说明的要求对仪器外表进行处理.对采洋装置进行清洁灭菌;将采梓时间的选择淀钮转到选定的采佯时间档上，采悸时间的选择视采佯最空气含菌量的大致估汁情况而定。带空洞的公共场所3挡，一般公共场所l-2出，I将事先准备好的灭菌采佯平皿饺说明书要求仔细安装仔百.即可进行采悸，流量以25L/min为宜。采律结束后.仔细取下平皿.放于平皿储
5、存器中-4h内送俭3样品采完后.将带菌营养琼脂平板置36: 1 c恒温箱中，培养48= 2h，计数菌落数，并安徽省技术监督局1999-01-01批准1999-01-01实施DB34/Tl73一一1999根据采佯器的流量相采样时间.换算成每m空气中的菌落数。以CF1:报告结果。4. 1. 3.2 自然沉降法设置果佯#.肘，应根据现场的大小.选择有代表性的位置作为空气细菌检测的果撑哉。通常设置3-5个采悻点，设3.#.时即室内墙角与对角墙角均匀布3点，设5个是时即室内墙角对角线交s为1采佯击。该交g与四墙角连线的中g为另外4个采律哉。采样高度为1.2-1. 5m。采佯._应远离墙壁1m以上.并避开
6、空调、门窗等空气流通处。将营养琼脂平板置于采悻是处，打开皿盖.暴露5min.盖上皿盖.翻转平饭，置36:t1 (;恒温箱中，培养48:t矶。计数每块平板上生长的菌落数.求出全部采样点的平均菌落数。以CFU!皿报告结果。4. 2 公用茶具微生物4. 2. 1 采祥部位应在茶具与口唇接触1.5cm处内外缘采样一周。4. 2. 2 细菌总数4. 2. 2. 1 设备与材料按附录A执行。4. 2. 2. 2 采样方法随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘.规定部位和面积范围内采样。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部位，将棉拭子放入10m!生理盐水内，4h内送检。4. 2.
7、 2. 3 检验方法将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。以无菌操作，吸取2m!检样，分别注入到两块灭茵平皿内.每皿1m!，如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1m!加到9ml灭菌生理盐水中，混匀.此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。将已融化冷至-15左右的营养琼脂培养基倾入平皿.每皿约15m!，并立即旋播平皿。冷凝后放36:t1(;培养箱培养48:t 2h。4. 2. 2. 4 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察.必要时用放大镜检查以防遗漏.在记下各平皿的菌落数后.求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落敬。若平皿中有连成片状的菌落z该平皿不宜汁数;若片状菌不到平皿
8、中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，贝可将此半个平皿菌藩计数后乘2.以代表全皿菌落数。平均菌落数精帝倍数细菌总数(CFU!cm)= . (1) 50 o . DB34/T173一-19994. 2. 2. 5 菌落计数的报告选择平均菌落数在30-300之间的稀稽度.乘以精释倍数报告a若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间.则应求出两个稀释度菌落总数之比筐来决定，若其比值小于或等于，应报告其平均数，苦大子2则报告其中稀释度较低的平皿窗落数。若所有稀释度的平均茵落数均大子300.贝m按精释度最高的平均茵落数乘以干活释倍数报告之。若所稀释度的平均菌落数均小子30.则应按稀释度最低的平均菌落
9、数乘以商释倍数报告之a若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间.其中一个稀释度平均菌落数大子300.而相邻的另一个稀释度平均菌落数小子30.则以接近30或300的平均茵落数乘以稀释倍数报告之若所有的稀释度均无菌生长.报告数为每ml小子lcfu。菌落汁数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大子100时.采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数可用10的指数来表示。在报告菌落数为不可计时，应注明佯品的稀释度。4. 2. 3 大肠茵群4. 2. 3. 1 设备与材料接附录B执行。4. 2. 3. 2 采样方法随机抽取清洗消毒后准备使用的
10、茶具。涂抹法s用上述测定细菌总数采集的佯品，无需重采。纸片法:用灭菌生理盐水湿润5cmx5cm大扬菌群快速测定纸片两张，分别粘贴在茶具内、外缘口唇接触处.约305后取下，置于无菌塑料袋内4h内送检。4. 2. 3. 3 检验方法发酵法.用测定细菌总数剩余的检悻，但l入双料乳塘胆盐发酵培养液中3置36:tlc培养箱内培养24ho观察是否产酸产气，若有变黄相气体产生，该管推测性检验阳性a如不严酸，不产气贝u为大肠菌群阴性。自推测性检验阳性管中取一接种环培养液.转种伊红美蓝琼指平饭上.置36工1C培养丰富培养18-24h.然后取出.观察菌:吉形态，并i故革兰氏染鱼甜证实性试程。在上述平极上.挑取可I
11、i大场商群茵落1-2个进行染色镜俭.同时接仲乳情发酵管.TI 36 :t 1 c培养24h。纸片法:将己采悖的纸片置36: 1 c培霖箱内培养16-18h.观察结果33 DB34/T173一一19994. 2. 3. 4 结果报告发酵法:凡乳檐发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，i!P可报告俭出大局菌群。纸片法:纸片保持紫蓝邑不变为大肠菌群阴性。纸片变黄，并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕均报告俭出大肠菌群。4. 3 毛巾、床I二卧具微生韧4. 3. 1 采佯部位毛巾、忧巾(套)采佯.应在毛巾、枕巾(套)对折后两面的中央5cmx5cm面积上用力均匀涂抹5次a床单、被罩采佯:应分
12、另IJ在床单、被罩两端的中间5cmx5cm处以及床单、被罩的中央部位5cmx5cm面积上用力均匀涂抹5次。浴巾、浴衣、浴裤随机选择某部位5cmX5cm面积上用力均匀涂抹5次。4. 3. 2 细菌总数4. 3. 2. 1 设备与材料按附录A执行。4. 3. 2. 2 采样方法(涂抹法)随饥抽取清洗清毒后准备使用的毛巾、床上卧具。用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾、床单、被单规定部位和面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀去棉签手接触的部位，将棉拭子放入10ml生理盐水内.4h内送检。4. 3. 2. 3检验方法按4.2. 2. 3执行。4. 3. 2. 4 菌落计数方法菌落计数方法接4.2.
13、 2. 4执行;按下列公式计算, 平均菌落数稀释倍数细菌总数(CFU/25cmZ)=2 . (2) 4. 3. 2. 5菌落报告方式按4.2. 2. 5执行。4. 3. 3 大肠菌群4. 3. 3. 1 设备与材料按附录B执行。4. 3. 3. 2 采悻方法随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。涂抹法:用上述测定细菌总数采集的样品，无需重采。纸片法:用灭菌生理盐水温润5cmx5cm大局菌群快速iII!Jii纸片两张，分别粘贴在毛巾、床上卧具规定部位何面积范围内.约30s后取下，置于无菌塑料袋内.4h内送检。4. 3. 3. 3 检验方法接本标准4.2. 3. 3执行。4. 4 理提用具微
14、生物4. 4. 1 采佯部位4 DB34/T173-1999 理发锥子采样:应在推子前那上下均匀各涂抹三次。一个锥子为一份样品。理发刀、剪和修脚工具的采佯:应在使用的刀、剪刃的两个侧面各涂抹-次采佯3两个刀(或两个剪)为一份样品。胡刷采佯=胡刷应浸湿在50ml无菌生理盐水中充分漂洗(或用棉拭子在胡届1)内外面均匀地各涂抹2次)。使用一次性胡刷不采佯34. 4. 2 大肠菌群4. 4. 2. 1 设备与材料按附录B执行a4. 4. 2. 2 采律方法随机抽取消毒后准备使用的理发用具3涂抹法:采佯应在无菌操作下进行。将蘸有无菌生理盐水的无菌棉拭子在推子前部、刀、剪刃的两侧规定部位和面积范围内各涂抹
15、采佯3将采悻后的棉拭子剪去手接触部位.放入10ml灭菌生理盐水中.4h内送检。4. 4. 2. 3 检验方法将放有棉拭子的试管充分振摇.取5ml放入双料乳糖胆盐发酵管中置36:t1 c温箱培养24h.如乳糖胆盐发酵管不产气.则可报告大局菌群阴性，如有产酸产气者，则进行分离培养。分离培养z将产酸产气的发醇管如j线接种的伊红美兰琼E昌平板上，置37C温箱培养18-246小时.观察菌落形态，典型的大肠菌群、菌落为黑紫色或红紫色.具有金属光泽。做革兰氏染色和证实试验。证实试验2挑取可疑大局杆菌菌落1-2个，进行革兰氏镜检阴性者接种乳糖发醇管于36 土1C培养24h.观察产气情况。4. 4. 2. 4
16、结果报告如乳糖管最终产酸严气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌.即可报告大肠菌群阳性a4. 4. 3 金黄包葡萄球菌4. 4. 3. 1 设备与材料 按附录C执行。4. 4. 3. 2采佯方法接4.4. 2. 2执行。4. 4. 3. 3 检验方法将大局菌群俭测后剩余的5ml待俭梓品，放入7.5%的氯化纳肉汤4Sml或膜酶陈大豆肉汤培养基中.36土1C培养24h。从土苦于事液中取1-2接种环.J线接神在BairdPairl四r氏培养基(或用血平皿).予36= 1C 培养24h，在BairdPairker氏培养上望落为圆形.光滑.凸起湿润.颜色呈黑灰鱼.边缘整齐、周围混浊.外层有一透明带.在血平板上
17、呈圆形、凸起、表面光滑、金黄鱼;g血圆的菌藩，t!t取1主型商:吉涂片染鱼镜检.为革兰民阳性.,1G iii萄状排列35 DB34/T173一一1999甘露醉发酵试验取上述分离纯菌落接种到甘露醉发酵培养基中.于36:!: 1 c培养24h.金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验玻片法:取;青洁干燥玻片.一端滴加一滴生理盐水.另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待俭菌落.分别在生理盐水及皿浆中充分研磨混合。血浆与茵苔i!l.悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时.而盐水滴仍呈均匀混浊凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆均有凝固现象.再进行试管凝固
18、试验。试管法:吸取1:4新鲜血浆。5ml放入灭菌小试管中再加入待检菌24h肉汤培养物O.5ml。混匀.放36:!:1 c温箱或水浴中，每半小时观察一次.24h之内如呈现凝块即为阳性a同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各O.5时，分别加入灭茵小试管内O.5ml. 1: 4血浆混匀，做为对照。4. 4. 3. 4 结果报告凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检.证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性，可报告检出金黄色葡萄球菌。4. 5 公用拖鞋的霉菌和酵母菌4. 5.1 1 采佯部位:拖鞋采样时应在每只拖鞋面与脚趾接触处5cmX 5cm 面积上
19、有顺序均匀涂抹3次采祥。一双拖鞋为一份样品。4. 5. 2 设备与材料按附录C执行。4. 5. 3 采样方法4. 5. 3. 1 随机抽取消毒后准备使用的拖鞋。4. 5. 3. 2将无菌棉试子亩取无菌生理盐水.在每只拖鞋规定的部位和面积上涂抹采样后.用灭菌剪刀将棉试子手执部分剪断，将棉试子放入10ml装有玻璃珠的无菌盐水管中.4h内送检。4. 5. 4 检验方法4. 5. 4. 1 将盛有棉试子的盐水管在手心用力振荡100次，再用带楼皮乳头的1ml灭菌吸管 反复吹吸50次.使霉菌泡子充分散开，此液为1:10稀释液。4. 5. 4. 2 用灭菌吸管吸取1:10检液2ml.分别注入到2个灭菌平皿内
20、，每皿1m!另取lml注入9ml加有玻璃珠的灭菌盐水管中，换1支lml灭窗吸管吹吸5次.此液为1:100稀释液34. 5. 4. 3 按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换一支Iml灭菌吸管.根据样品污染情况.选择3个合适的稀释度。4. 5. 4. 4 将溶化并冷至对45C左右的培养基注入灭菌的平皿中.待琼脂凝固后，倒置于25-28C温箱中.:1天后开始观察.共培养观察一周。4. 5. 5 计算方法6 DB34/T173一一1999通常选择菌落数在30-100之间的平皿进行计数.同稀释的两个平皿的茵落平均数乘以稀释倍数.HP为每mlj金样中所含真菌数G若有两个精程度的菌落数皆在规定范
21、围之间或三个稀释度皆不在此范围时，应参照细菌总数的报告方式报告。4. 5. 6 结果报告真茵茵落数(CFU)/50cm 真茵茵落数稀释倍数.(3) 注.一只拖鞋的涂抹面积是5cmX 5cm = 25cm;一双拖鞋的涂抹面积则为25cmx 2 50cm-4. 6 准盆、检(脚)盆中微生物4. 6. 1 采佯部位采祥必须在无菌操作下进行，采佯用具高压灭菌121C20min.脸(脚)盆采佯时应在盆内壁1/2-113高度涂抹一圈采悖。浴盆应在盆内四壁及盆底呈梅花状布点。4. 6. 2 细菌总数4. 6. 2. 1 设备与材料按附录B执行。4. 6. 2. 2 采佯方法涂抹法.用漫有无菌生理盐水的棉拭子
22、在规格板(5cmx 5cm)内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉拭子，剪去予接触部位后，将涂抹浴盆的5个棉拭子一并放入125m!的生理盐水烧瓶中，涂抹脸(脚)盆的2个棉拭子一并放入50ml的生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在旋涡振荡器上振荡lmin.此lmL的菌浓度相当lcm的菌量。斑贴法:将5cmX 5cm无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水lml/片(吸满为止).以无菌操作将滤纸片贴到采样部位.lmin后按序取下，将贴浴盆的5片滤纸一并放入125ml生理盐水瓶中，贴脸(脚)盆的2片滤纸一并放入50ml生理盐水瓶中.充分振摇或在旋涡振荡器上振荡lmin.此lml的菌浓度相当于lcm的菌量
23、。4. 6. 2. 3 俭验方法按4.2. 2. 3执行。4. 6. 2. 4 菌落计数方法按4.2. 2. 4执行;按下列公式计算.茵茵总数(CFU/25cm)平均菌落数稀释倍数X25. . (4) 4. 6. 2. 5 茵藩计数的报告夜4.2. 2. 5执行d4. 6. 3 大汤菌群4. 6. 3. 1 设备与材料楼附录B执行。4. 6. 3. 2 采悻方法7 DB34/T173一一1999涂抹法和斑贴法:接本标准4.6. 2. 2执行。可用细菌总数检测后剩余的悸品检测大肠菌群，无需重新采悖。纸片法:用无窗生理盐水湿润大喝菌群快速测定纸片(5cmX5cm)分别贴子采佯处.约3D.取下，置无
24、菌塑料袋内，4h内送诠34. 6. 3. 3检验方法按4.2. 3. 3执行。5 现场采样操作的质量控制5. 1 每次来悸前应对现场采佯人员进行工作前培训1.其内容包括采样目的，计划安排、采样技术的具体指导和要求，记录填写以及工作责任感等，以确保工作质量。5. 2 采佯都必须在无菌条件下操作3采祥用具(如采样器、试管、广口瓶、剪子等)必须经过灭菌处理无菌保存。5. 3 现场采佯前.熟悉仪器性能及适用范围.确保能熟练使用仪器。5. 4 采佯前对采悸器流量和其他仪器都应该校准或标化处理。校正流量时必须使用现场采样吸收管。5. 5 采悸和送佯中防止一切污染的可能。5. 6 采集空气细菌总数样品时应避
25、开人流通风道和通风口.并距离墙壁1m远。6 样品送检质量控制6. 1 采悻前或采样后应立即贴上标签。6. 2 采佯时认真填写样品采集记录表，采撵记录的编号应与祥品编号一致。采样后应立即贴上标签.每牛佯晶必需标记或登记名称、来源、数量、采样地点、来样人及采样年月日。6. 3 样品应在4h内送实验室，为防止在运输过程中样品的损失或污染，存放样品的器具必须密封性好，小心运送。6. 4 送诠时要认真填写卫生监测样品送检单、样品交接单，连同样品一并交实验室.以供检验人员参考s8 DB34/T173一-1999附录A(标准的附录)检验公共场所细菌总数的设备与材料A. 1 检验公共场所空气中的细菌单数的设备
26、和材料A. 1. 1 仪器与设备高压蒸汽灭菌器，干热灭茵器，恒温培养箱.冰箱，平皿(直径9cm)。制备培养基用一般设备.量筒，三角烧瓶.PH计或精密PH试纸等。撞击式空气微生物采样器。A. 1. 2 营养琼脂培养基A. 1. 2. 1 成分:蛋白陈牛肉浸膏氯化纳琼E旨蒸馆水10g 3g 5g 15-20g 1000m! A. 1. 2. 2 制法将上述各成分混合，加热溶解.校正PH至7.4，过滤分装.121(; 20min 高压灭菌。用自然沉降法测定时.倾注约15m!于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。A. 2 检验公共场所茶具、毛巾、床上卧具、浴盆、脸(
27、脚)盆的设备与材料A. 2. 1 仪器高压蒸汽灭茵器，天平，干热灭菌箱.灭菌平皿:直径9cmo培养箱36:!:1(;。灭菌刻度吸管:1m!, 10m!。冰箱.灭菌棉拭子，电炉，灭菌剪刀.放大镜，PH计或精密PH试纸。A. 2. 2 培养基与试剂A. 2. 2. 1培养基按本附录A.1. 2执行。A. 2. 2. 2 生理盐水成分:氯化纳8. 5g 蒸馆水1000m! 制法z溶解后.分装到l试管内，每管10时，121 C, 20min高压灭菌。另分装125ml/瓶.供浴盆采样使用.50mll瓶.供险(脚)孟采悸a9 DB34/Tl73一-999附录B(标准的附录)检验公共场所大肠菌群的设备与材料
28、B. 1 检验公共场所茶具、毛巾、床上卧具、理发E目具、浴盆、检(阴)盆大肠菌群的设备与材料3B. 1. 1 俭检茶具、毛巾、床上卧具、理发用具的仪器与设备高压主主1气灭甫器.天平.干热灭菌箱.灭菌平皿言:径9cm、培养筒，36:!: 1 c、灭菌刻度吸管，1ml. 10ml。冰箱.灭菌棉拭子.冰箱.灭茵剪刀.电炉.PH计或精密PH试纸。B. 1. 2 检验浴盆.险(剌)盆的仪器与设备无菌滤纸片.显做镜，酒精士丁.恒温箱.旋涡振荡32.载攻片，冰箱(0-4C)。平皿(中90mm).试管架3天平(11干).吸管，三角t瓶或口瓶(容量125mL或250mL)倒管-5cm x 5cm标准规格饭3高压
29、蒸汽灭菌器3B. 1. 3 培养基于口试剂B. 1. 3 乳糖月E盐发酵培养液成分:蛋白陈20日f苦!盐(或牛、草但盐)5g 乳糖lOg O. 04%澳甲盼紫水溶液5ml 要t白水1000ml 制法.将蛋白院、月E盐及乳槽溶于霉富水中，1周PH7.4，力1i真甲盼紫溶液i昆匀，分装带有倒管试管.每管IOml，以115C高压灭茵15min( ;主z料乳塘归盐发窍音除菜:留水外.其他成分加倍。)日l.3. 2 伊江美盖琼月旨成分:蛋白陈10g 孔情10g f是E主氢二捍-卢、E 2芭lE 17日2 !l I尹红t济ft20m! 。向5);吉;f10ml 苦用水1000口1iO DB3.J!TI73
30、一-1999iJltJ法将蛋白陈、陈Illi盐水肿、脂溶解于某诩Jj(中.)周PH7.1.分装烧瓶内，121(;高压灭南ISmin备莉:11面唱时加入:lL情并JD热j寄f七束后号至50- 55(; .加入伊红何美蓝溶液I甚匀.倾注平吨。B. 1. 3. 3 乳精发酵管说分z孟白陈孔节吉20g 10日。04%;曳甲酌紫水溶液5m! 主主tl水IOOOm! i制法:将蛋白陈反乳糖1寄子在中i周PH7.加入指示剂.分装带有倒管试管.每管3时，.1151:高压灭菌15minB. 1. 3. 4 革兰氏染色液结晶紫染色液:结晶紫Ig 95%乙醇20m! 1%草酸镀水溶液30m! 将结晶紫溶导乙醇中.然
31、后与草酸镀溶液混合a革兰氏萌液:硕IgE起化御2g 蒸馆水300m! 将硕与日跑他饵先进行混合，力日入蒸馈水少许，充分振摇.待完全溶解后，再加蒸馆水至300m!, 脱色i!-: 95%乙醇沙黄豆染液:j生、黄O.25日95%乙醇10m! 苦;富农90m! 将沙tJt溶解于乙醇叶I然tCi用弄雪白;j(稀程二B. 1. 3. 5 ;是巴法将涂片在火焰上固定贺f1l!注晶紫染色泛.染lmin.-:1;:走。清加142兰LEI理液.1)0 il 1阳n./c1.克3苟力I!95%乙dj.，元毡，约30S.水Lit 11 DB34/T173一一1999滴加复染液，复染lmin，水洗.待干，镜俭。B.
32、1. 3. 6 染色结果革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。B. 1. 3. 7 大肠菌群快速应验纸片质量要求纸片必须符合食(饮)具用大厨菌群快速检验纸片质量标准3每张纸片5cm )( 5cm, PH值7.0-7. 4，包装无菌.生产广家经卫生部门审核认可。1: DB341T173一-1999附录C(标准的附录)检验公共场所致病菌的设备与材料C. 1 理发用具的金黄色葡萄球菌设备与材料C. 1. 1 仪器与设备显微镜.培养箱，离心矶，灭菌吸管，灭茵试管.载玻片，酒清灯.革兰民染色用有关器材。C. 1. 2 培养基租试剂C. 1. 2. 1 膜酷陈大豆肉汤成分:膜酷陈(或膜蛋白陈)17g 植
33、物蛋白陈(或大豆蛋白陈)3g 氯化纳100g 磷酸氢二饵2. 5g 葡萄糖2. 5g 蒸馆水1000ml制法:将上述成分混合后.加热溶解.调PH为7.2-7. 3，分装，121 t:, 20min高压灭菌。C. 1. 2. 2 7. 5 %的氧化纳肉汤成分:蛋白陈牛肉膏氯七纳蒸馆水10日3g 75g 1000ml 市j法将上述成分加热;在解)周PH为7.4，分装，121 t:, 15min高压灭菌。C.1. 2. 3 Baird Parker平板nlt分.咦蛋白陈10g 牛肉霄5g 酵母浸背Ig 丙liJ酸纳10g 甘氨酸12g 氯1I!(LiCI. H、0)g 13 琼脂蒸筒水0834/T1
34、73-1999 20日950g PH 7. O:!:O. 2 增菌剂的配制:30%卵黄盐水50ml与除菌过滤的1%亚磺酸绑溶液10ml混合.保存于冰箱内。制法.将各成分加到蒸馆水中，加热煮沸完全m解，冷至25C校正PH，分每瓶95ml 121 c高压灭茵15min.I脑用时加热熔化琼脂.待冷至50C加入预热至50C的卵黄亚暗酸饵增菌剂5ml，怪匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。C. 1. 2. 4 血琼脂培养基成分.营养琼脂脱纤维草血(或兔血)100ml 10ml 制法:将营养琼脂加热溶化.待冷至50C左右以无菌手续加入脱纤维羊血.摆匀.哥哥成平板.置冰箱内
35、备用。C. 1. 2. 5 甘露醇发酵培养基成分.蛋白陈10日氯化纳5g 甘露醇!og 牛肉膏5g O. 2%鹰香草酸蓝溶液12m! 蒸馆水1000ml 制法.将蛋白陈、氯化纳、牛肉膏加到蒸饱水中，加热溶解.调PH7.4, 加入甘露醇和指示剂，7昆匀后分装试管中，115C, 20min高压灭菌备用。C. 1. 2. 6 兔(人)血浆制备取3.8%拧蒙酸纳溶液，115C, 30min高压灭菌，1份加兔(人)全血4份，混匀静置.2000 - 3000rl min离心3-5min.血球下沉，取上面血浆。C. 1. 2. 7 革兰民染色液见B、1.3. 4 C. 2 公用拖鞋的霉商和酵母茵设备与材料C
36、. 2. 1 仪器与设备恒温箱.25-28C。平皿.直径9cm.，显微镜.试管架，高压蒸汽灭菌器.试管，酒精灯.玻璃珠，接种针.无茵棉拭子3C. 2 培养基本和试剂C. 2. 2. 1 生理盐水按本附录AA. 2. 2. 2执行314 DB34/T173一一1999溶解后.分装jlJ加玻璃珠的试管内，10m!相9m!.121 t:. 20min高压灭菌。C. 2. 2. 2 霉茵培养基成分3蛋白陈g E￥母浸出粉2g 葡萄糖20g 磷E主氢二押Ig 硫般读(MgS.7H20) O. Sg 琼1旨20g 氯霉素O. Ig 蒸饱水1000ml 制法:除葡萄糖外，取上述成分加入水内.徽温溶解，调PH
37、为6.8.煮沸，加葡萄糖溶解后，过滤调PH.使灭菌后PH为6.4 :t O. 2. llSt:. 20min高压灭菌。C. 2. 2. 3 虎红(孟加拉红)培养基成分:蛋白陈元葡萄糖10g 磷酸二氢饵Ig 硫酸模Mg四14.7日20)O. Sg 琼E旨20g 1/3o虎红水溶液100m! 氯霉素O. Ig 蒸馆水1000m! 制法:将上述各成分(除虎红外)加入蒸馆水中溶解后，再加入虎红溶液.分装后.高压灭菌121t:. 20min. C. 2. 2. 4 马铃薯葡萄糖琼腊培养基(PDA)成分马铃薯去皮切块)300g 葡萄糖20g 琼脂黎熔水20g 1000ml 制法:将马铃薯去皮切块.加1000ml蒸馆水，煮沸1O-20min。用沙布过滤，补加蒸馆水至1000ml。加入葡萄糖租琼窟，加热溶化，分装.121 t:高压灭菌20min。1S
