1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1607-2005 进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法Total bacterial count, coliform, fecal coliform and Escherichicoli counts in drink for import and export Hydrophobic grid membrane filtration method 2005-08皿18发布060608000126 2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检菇总局中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口饮料
2、中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法SN/T 1607 2005 手唔中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷9咛开本880X12301/16 印张O.5 字数8千字2005年11月第一版2005年11月第一次印刷亏贮书号:155066.2-16451 定价6.00元如有印装茬错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533前言本标准的附录A是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并阳口。本标准主要起草单位:中华人民共和国上海
3、出入境检验检疫局。本标准主要起草人:关睐。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。司SN/T 1607-2005 I 1 茹围进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法SN/T 1607-2005 本标准规定了进出口饮料中商落总数、大踊菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数方法疏水栅格滤膜法。本标准适用于进出口饮用天然矿泉水、瓶(桶)装饮用纯净水、茶饮料和破酸饮料的测定。2 方法提要一定数量的样液通过滤膜时，细菌被截留在滤膜的方格内，将滤膜置于培养基上培养后，计数细菌生长的方格数就可测得菌落总数;若将滤膜置于选择性培养基上培养后，阳性菌落呈现特定颜色.计数这些特定颜
4、色的阳性菌落方格数，则可测得样品中阳性菌落的数目。3 培养基和试剂3. 1 膜化大豆坚固绿琼脂见附录A。3.2 MFC琼脂见附录Ao3.3 膜化大豆硫酸镜琼脂见附录A。3.4 膜蛋白陈胆汁琼脂见附录A。3.5 日引噪试剂见附录A。3.6 元菌生理盐水。4 设备和材料4. 1 疏水栅格滤膜:孔径为0.45mo4.2 臆器。4.3 培养箱:360C士lOC,44. 50C士O.50C 0 4.4 真空泵。4.5 抽滤瓶。4.6 元菌慑子。4. 7 吸管:以0.1mL为刻度的1mL吸管，以1mL为刻度的10mL吸管。4.8 高压灭菌器。4.9 培养皿:直径90mmo 4.10洁、纸。5 试样制备5.
5、 1 缩商含量低的样品可用无菌吸管吸取50mL直接过滤。5.2 根据对样品污染情况的估计，用无黯生理盐水将样品制成一系列10倍递增的样品稀释液。制备样品全过程不得超过15min，然后用50mL样品稀释液过墟。亨窍弯弯了灾万 SNjT 1607-2005 6 制定步骤6. 1 过捷、将灭过菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用无菌慑子夹取撞膜，然后将滤膜放至法器底部，并用夹子固定。无菌吸取50rnL样液歪滤器内，打开真空泵电掘进行抽豫，当全部样液滤过后，再另加15rnL无菌生理盐水至掳器，进行间样的抽洁、，当全部液体通过捧膜后，关闭真空泵电源，移去夹子，打开法器，用无菌银子移取滤膜。肉一样品做两次甜定。
6、6.2 菌落总数酣定6.2. 1 培养将6.1的滤膜紧贴至膜化大豆坚固绿琼脂平板上，滤膜生主琼脂之间应无气泡。360C士10C培养48 h。6.2.2 计数计数所有细菌生长的方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的菌落总数。式中:X一一为每星毫升菌落数;M一一为阳性菌落方格数，单位为个;D一一为稀释度。6.3 大肠菌群甜定6.3. 1 培养X = DM/50 . ( 1 ) 将6.1的滤膜紧贴至MFC琼脂平板上，捧膜与琼脂之间应元气泡。360C士10C培养24h土2ho 6.3.2 计数计数所有蓝色的阳性商落方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的大肠菌群数。6
7、.4 粪大肠留群wW定6.4. 1 培养将6.1的滤膜紧贴至膜化大豆硫酸镜琼脂平板上，滤膜与琼脂之间应元气泡。360C士lOC培养4h5 h，然后将滤膜移至MFC琼脂平板上，除去气泡，44.50C土0.50C培养24h士2ho 6.4.2 计数计数所有蓝色的阳性菌落方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的粪大肠茵群数。6.5 大肠杆菌测定6.5. 1 培养将6.1的滤膜紧贴至膜化大豆硫宫室镜琼脂平板上，滤膜与琼脂之间应无气诲。360C士10C培养4h5 h，然后将舔膜移至膜蛋白陈胆汁琼脂平板上，除去气泪，44.50C土0.50C培养24h土2h。6.5.2 昭|睐试验将9crn
8、的圆形洁、纸放在玻璃平皿盖中，注入1rnL2 mL n引喋试剂.将经6.5.1培养的掠膜紧贴在滤纸上，除去气泡，室温下保存10rnin15 min，再将滤膜放回到膜蛋白陈胆汁琼脂平板上。6.5.3 计数计数所有粉红色或深红色的阳性菌落方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的大踊杆菌数。2 A.l 膜化大蓝蓝图绿琼瞄(TSAF)膜蛋白陈大豆陈氧化铀坚固绿琼脂蒸锚水附录A(规范性附录)培养基和试剂15.0 g 5.0 g 5.0 g 0.25 g 15.0 g 1 000 mL SN/T 1607-2005 将以上各成分搭于1000 mL蒸馆水中，加热煮沸至完全榕解，分装后置于12
9、10C高压灭菌15min , 最终pH7.3土O.2。待冷却至500C550C ，分装至培养皿18mL，待凝固。40C60C可保存4周。使用前先从冰箱中取出，待恢复室温琼脂表面干燥后使用。A.2 MFC琼脂膜蛋白陈10.0 g 二号蛋白陈5.0 g 酵母浸膏3.0 g 氧化铀5.0 g 乳糖12.5 g 二号胆盐1. 5g 苯胶蓝0.1 g 琼脂15.0 g 蒸锢水1 000 mL 将各成分溶于1000 mL蒸榴水中，加热煮沸至完全梅解，不需要灭菌，待冷却至500C 550C ，调pH 7.4土0.2，分装至培养皿18mL，待凝固。40C60C可保存4周。使用前先从冰箱中取出，待恢复室温琼脂表
10、面干燥后使用。A.3 脑化大革研酸镶琼脂(TSAM)膜蛋白陈大豆陈氧化铀硫酸镜琼脂蒸锚水15.0 g 5.0 g 5.0 g 1. 5g 15.0 g 1 000 mL 将以上各成分溶于1000 mL蒸馆水中，加热煮沸至完全溶解，分装后置于1210C高压灭菌15min , 最终pH7.3土0.2，分装至培养皿18mL，待凝固。40C60C可保存4周。使用前先从冰箱中取出.待恢复室温琼指表面干燥后使用。mCON-hoSHZ SN/T 1607-2005 膜蛋白臆阻汁琼脂(TBA)E亮蛋白陈三号胆盐琼脂蒸锚水将以上各成分溶于1000 mL蒸榴水中，加热煮沸至完全洛解，分装后置于1210C高压灭菌15min, 最终pH7.2土0.2，分装至培养皿18mL，待凝固。4oC 60C可保存4周。使用前先从冰箱中取出，待恢复室温琼脂表面干燥后使用。20.0 g 1. 5g 15.0 g 1 000口lLA.4 用i睐试荆A.5 90 rnL 10 mL A*夜乙醇95%放盐酸二甲氨基苯甲醒2.5 g 完全溶解储存在棕色瓶中，40C60C保存。B被1. 0g 100 mL 过硫酸锦蒸锢水或过滤水完全溶解储存在棕色瓶中，40C60C保存。A液和B液可长期保存，但它们的泪合液很不稳定，临用时再等体积混合。侵权必究书号:155066.2-16451 定价:6.00元版权专有SN/丁1607血2005
