1、中华人民共和国出入境检验检擅行业标准SN/T 1615-2005/ISO 17410:2001 食品和动物饲料中嗜冷微生物计数方法Microbiology of food and animal feeding stuffs一Horizontal method for the enumeration of psychrotrophic microorganisms (ISO 17410:2001, IDT) 2005一08斗8发布060608000118 200602-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检接总局SN/T 1615-2005/ISO 17410: 200 1 前富本标准等问
2、采用ISO17410:2001(食品和动物饲料微生物学一一嗜冷微生物计数方法)(英文)。为便于使用，本标准做了下列编辑性修改:a) 本国陈标准一词改为本标准。b) 用小数点，代替作为小数点的逗号，。c) 删除国际标准的前言。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国问南出入境检验检疫局。本标准主要起草人:江志毅、杨相莹、李志培、张巨洲、茵丽G本标准是首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 1615-2005/ISO 17410:2001 食品和动物饲料中嗜冷微生物计数方法1 范围本标准规定了嗜冷微生物6.5C菌落计数方法。本标准适用于食品和动物饲料中嗜
3、冷微生物的计数。2 规范性引用文件下列引用标准中的条款通过本文的引用而成为本标准的条款。对于注明日期的引用标准，其后的任何更改或修订版均不适用:然而，鼓励基于本标准的协议各方探讨使用下述引用标准最新版本的可能性。对于未注明日期的引用标准，其最新版本是适用的。ISO 6887-1 食品和动物饲料微生物学一一微生物学检测样品的准备包括初始悬夜和十倍稀释液一一第部分:样品初始悬液和十倍稀释液的制备通贝。ISO 7218 食品和动物饲料微生物学一微生物学检验通则ISO 8261 牛奶和牛奶制品一微生物学检验样品的制备和稀释3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 嗜冷微生物pSYChI悦rop
4、hicmicroorganisms 在本标准特定条件下形成可计数菌落的细菌、霉菌和酵母菌。4 原理4.1 用非选择性固体培养基制做两个琼脂平板，如果原产品是液体，用规定量的试验样品原液，其他产品用规定量的试验样品初始悬眩，为避免受热力影响，采用表面接种。在相同条件下，每一稀释度试验样品分别接种两个琼脂平极。4.2 将平皿放入6.5C培养箱中有氧培养10d, 4.3 以从琼脂平板上获得的菌落数来计算每毫升或每克样品中的微生物数量。5 培养基和稀释液现行的实验室操作.可按ISO7218进行。除另有规定外.所有试剂均为分析纯级，水为蒸锚水，去离子水或纯净水。如果巳准备好的培养基和试剂不能立刻使用，除
5、另有说明外，可储藏在3C土2C的暗环境中，在培养基成分不发生任何改变的前提下储藏期不超过一个月。5. 1 稀释液见ISO6887-L 5.2 平板计数琼脂(PCA)5.2.1 成分蛋白陈5.0 g SN/T 1615-2005/ISO 17410 :2001 酵母浸膏2.5 g 葡萄糖1. 0g 琼脂9 g18 gl) 水1 000 mL 做奶制品检测时，建议每升培养基中加入1.0g脱脂奶粉，此奶粉中不应含有抑菌物质。5.2.2 制备用水溶解各成分或脱水合成培养基，必要时可加热。彻底搅拌均匀后静置数分钟。必要时调整pH值(6.的，使灭菌后的培养基在25C时p丑值为7.0士0.2，将造蠢的培养基
6、装入三角烧瓶或瓶子中(6.10)，放入高压灭菌器中(6.1)门12归1C灭菌1刊5mi丑旧1让m如果培养慕需要立即使用，用之前可将其放入4性4C4盯7C7水k浴箱中(刊6.7门)冷却。否则，允许将培养基凝固在三角烧瓶或瓶子中。使用之前将其放在沸水中使培养基完全融化，再放入44c 47C水浴箱(6. 7)冷却。每一个培养皿中(6.5)加入大约15mL巳制备好的培养基，凝固后使用。在使用刚制备好的琼脂平极之前，先仔细将其表面干燥(合适的做法是打开平皿盖.琼脂表面朝下)，放入37C55C的培养箱内(6.3)直到琼脂表西干燥，也可将培养皿半开盖放置在层流安全柜中30 min或加盖过夜。6 仪器和玻璃器
7、皿通用要求见ISO7218 , 玻璃器皿可选择相似规格，微生物实验室设备要求如下。6. 1 高压灭菌器:可操作温度为121C。6.2 干热灭菌器:可操作温度在170C175C，时间为1h。6.3 培养箱:可操作温度为37C55C。6.4 培养箱:可操作温度为6.5C士lC。6.5 培养皿z玻璃或塑料制品均可使用，直径约为90mm100 mmo 6.6 吸管:经过校准的有微量刻度的吸管，0.1rnL、1mL和10rnL, 6. 7 水浴箱:或类似装置，其中一个可操作温度为44oC 47C ，另一个可以把水煮沸。6.8 商落计数仪:由一个发光基座和一个机械或电子数字计数器组成。6.9 pH计:在2
8、5C时pH计的读数值应最接近0.01pH单位.使测量结果能精确到土0.1pH单位。6. 10 瓶子或三角烧瓶:选取合适的容量，用于制备、灭菌和贮存(必要时)培养基。6. 11 政璃或塑料涂抹棒:经灭菌后，用于涂抹培养基表面的接种物。7 采样实验室所接受样品应具有产品的真实代表性并且在运输和储藏期间不得损坏或改变，这一点很重要。采样不是本标准规定方法的组成部分，相关产品的处理参见具体的国际标准。如果没有具体的国际标准，推荐使用相关团体根据本标准所达成的协议。8 试验样品的制备试验样品的制备按照ISO6887-1或ISO8261C奶制品)的要求进行。1)根据琼脂凝胶的强度而定c2 SN/T 161
9、5-2005/ISO 17410:2001 9 程序9.1 初始悬液和稀释初始悬液(初次稀释)和进一步的稀释按照ISO6887-1或ISO8261(奶制品)进行。9.2 接种和培养9.2.1 试验样品(如果是液体)或其他产品的初始悬液及其每一个稀释度悬液需各接种两个平板计数琼脂，用灭菌吸管(6.6)吸取0.1mL液体加到相应每一个做有标i己的平板计数琼脂(PCA)平皿中央。9.2.2 用已灭菌的涂抹棒(6.11)小心地将琼脂平板表面的接种物尽可能快地涂抹均匀，注意不要接触到平皿边缘，直到琼脂表面不再有可见的液体为止.一个涂抹棒只涂一个平皿，不得重复使用。应设一个不含接种物的琼脂平板做为对照，以
10、检查灭菌情况。为了使稀释悬液含有最大数量的试验材料，一个样品的所有稀释液从最高稀释度到最低稀释度可以使用同一个涂抹棒操作。9.2.3 将接种好的琼脂平板(9.2.2)倒置放入6.50C培养箱中(6.4)，培养10d。9.3 计数琼脂平板经6.50C培养10d后(9.2.3)，用菌落计数仪计数每一个琼脂平板上的菌蔼数，菌落数在15个150个为合适的计数范围。重要的是针尖样的菌落成计数在内，但应注意与平板内未溶解微粒或沉淀物质的区别，避免误判。蔓延生长的菌落应视为单个菌落，如果蔓延生长菌落的面棋小于整个培养血的四分之一.计数其余未受影响部分的菌落数，以此代表整个培养皿的菌落数。如果培养皿有四分之一
11、以上的面积被蔓延生长蔚落覆盖，放弃对该琼脂平板的计数。10 结果计算与表述10. 1 计算般情况下一个琼脂平板上的菌落数至少不少于15个。计算每克或每毫升样品中嗜冷微生物菌落数(CFU)N，使用式(1)计算:式中:N一一一一二豆一V(nj + o. 1n2)d . ( 1 ) L:C两个连续稀释度的所有琼脂平板上商落数的和，每一个琼脂平板上的菌落数不少于15个;V一每一个琼脂平板上的样品悬液的实际接种蠢，单位为毫升(mL);nj一第一稀释度琼脂平板的数量;nz一一第二稀释度琼脂平板的数量;d一一第一稀释悬液的稀释倍数。注:最低稀释度悬液是含试验祥品最多的悬液。10.2 结果表述10.2. 1
12、一般情况琼脂平板上的菌落数在15个至150个之间。结果保留两位有效数字.第二位数字以四舍五入方法计算。例如:28 500修约为29000 , 11 500修约为120000 每每升(液体产品)或每克(其他产品)样品中嗜冷微生物菌落数(CFU)最好用数字1.09. 9乘以10的幕来表示。3 SN/T 1615-2005/ISO 17410 :2001 10.2.2 低数值的估算如果试验样品(液体产品)或初始悬液(其他产品)的两个琼脂平板上的菌落数均小于15个.计算两个琼脂平板上菌落数的算术平均数。结果表示如下:一一每毫升(液体产品)或每克其他产品)试验样品中嗜冷微生物菌落数的估算值为NEoNE的
13、采用式(2)计算:Nr:= C -E一(VxXd) 式中:I;C一两个琼脂平板上黯落数的和;V一每一个琼脂平板上样品悬攘的实际接种量.单位为毫升(mL); rz-一琼脂平板的数量(本例n=2); d一一样品初始悬液或实际接种悬液的稀释倍数。10.2.3 元菌落出现如果与试验样品一致的两个琼脂平板均无菌落出现，报告结果如下:一每毫升(、液体产品)或每克(其他产品)中嗜冷微生物数量小于l/(V.d);10.2.4 大数值的估算 ( 2 ) 如果只有琼脂平板上菌落数大于150的这种情况，计数最接近150个菌落数的琼脂平板上的菌藩并计算出算术平均数。结果用式(3)计算:N = C 一(V x 11 X
14、 d) 式中:N一一每毫升或每克样品中嗜冷微生物菌落数的估计值:I;C 两个琼脂平板上菌落数之和;V一每一个琼脂平板上样品悬液的实际接种量.单位为毫升(mL); 7l一一琼脂平板的数量(本倒n=2); 品悬液相致的稀释倍数。10.3 计算举例11 试验样品接种量0.1mL.嗜冷微生物计数结果如下:一一一接种10-2稀释度悬液，两个琼脂平板上的离落数分别是138和125;一一接种10-3稀释度悬液.两个琼脂平板上的菌落数分别是20和18:C 138十125十20十18301 N 一一一一一=136 818 -V(nj十O.17l 2)d -0.12十(0.1X 2)J X 10-2一0.0022
15、 按照规定，结果修约为:每克(每毫升)产品中140000或1.4 X 105个嘻冷微生物(CFU)。精密度. ( 3 ) 按照所计数的菌落数给出一个培养基上微生物的泊松分布，本方法的置信限变化范围大约在16%52%(见参考文献lJ)。在实际运用中可能变化范围更大。关于小数量微生物的估算置信限的更多倍息见ISO72180 4 12 试验报告试验报告应注明:一一样品完整标识的必要的全部信息;一一采用的取样方法，如果有的话;一一采用的试验方法(平板计数琼脂中是否加有脱脂奶粉): SN/T 1615-2005/ISO 17410:2001 一一本标准中没有规定的所有操作细节以及可能已经影响试验结果的一
16、些因素:一获得的结果，指明所采用的表后方法:一如果做了重复性核查.最终引用的所得结果。5 SN/T 1615-2005/ISO 17410: 200 1 6 参考文献1J Cowell and Morisetti , J. Sc. Fd. Agri , 20 , 1969 , P. 573. 2J IDF Standard 132人:1991, Milk一Estimationof numbers of psychrotropl山microorganisms , rapid colony count technique , 25 hours at 210C. 3J 1S0 6887叩2:Micr
17、obiology of food and animal feeding stuffs-preparation of test samples , 1m叩tial suspension and decimal dilutions for microbiological examination-Part 2: Specific rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions of mear products. 4J 1S0 6887-3 Microbiology of food and animal
18、 feeding stuffs-preparation of test samples , initial suspension and d巳cimaldilutioJls for microbiological examination-Part 3: Specific rules for the preparation of test samples and initial suspension of milk products. 5J IS0 6887-4 Microbiology of food and animal feeding stuffs-preparation of test
19、samples , initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination-Part 4: Specific rules for the prepararion of the initial suspension and decimal dilutions of fish products. 6J IS0 6887-5 Microbiology of food and animal feeding stuffs-preparation of test samples, initial suspension
20、 and decimal dilutions for microbiological examination-Part 5: Specific rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions of products other than milk and milk products, meat and meat products , or fish products. 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准食品和动物饲料中嗜冷微生物计数方法SN/丁16152005/ISO17410:2001 合毛中国标准出版社出版发行北京复兴门外三河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷专唔开本880X1230 1/16 印张O.75 字数11千字2005年11月第版2005年11月第一次印刷+ 书号:155066 2-16461 定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533SN/丁16152005严OONHO户叶kh嗖阻-。的时的OONimFC户HZ的
