1、ICS 11. 040. 40 C 45 中华人民共和国医药行业标准YY/T 0606.13-2008 . w 组织工程医疗产品第13部分:细胞自动计数法Tissue engineered medicaJ product-Part 13: Standard test method for automated enumeration of cell suspensions 2008-04-25发布2009-06-01实施艳阳国家食品药品监督管理局发布YY/T 0606(组织工程医疗产品分为:一一第1部分:通用要求;一一第3部分:通用分类;- - 剧昌一一第4部分z皮肤替代品物的术语和分类;一一第
2、5部分:基质及支架的性能和测试;一一第6部分:1型肢原蛋白;一一第7部分s壳聚精s一一第8部分z海藻酸销;一一第9部分:透明质酸铀z一一第10部分:修复或再生关节软骨的植入物的体内评价;一一第11部分:脱钙骨异位骨诱导性组织学评价指南s一一第12部分:细胞、组织、器官的加工处理z一一第13部分:细胞自动计数法.本部分为YY/T0606的第13部分.本部分由国家食品药品监督管理局提出.本部分由国家食品药品监督管理局中栓所医疗器械质量监督检验中心归口.本部分国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心起草.本部分主要起草人:陈亮、英廷斐、王春仁.l1(/T 0606.13-2008 I Y
3、Y/ T 0606.1 3-2008 组织工程医疗产品第13部分:细胞自动计数法1 范围YY/T 0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数，包括黯附生长细胞和悬浮生长细胞.2 术语和定义. 下列术语和定义适用于YY/T0606的本部分.2. 1 电解灌d创削阶用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液.2. 2 重合coincideoce 一个以上的细胞同时穿过小孔.2.3 原始计数raw connt 来对重合细胞进行校正的细胞计数.2. 4 校正计量配tednnt对重合细胞进行校正后的计数.2. 5 阉值size thr臼bolds在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值，是可
4、调整的界值.在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外.3 原理本部分中细胞自动计数的原理方法是电阻抗，即栓测囱悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数(如图1所示).当细胞悬浮在传导性溶液中时例如磷酸盐缓冲液)，它们是不连续的绝缘体.当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时，每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗，由此产生的电脉冲可用于细胞计数.细胞在小孔间通过被检测到的区带称为电感应区.这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞.脉冲的数目意味着细胞的数量，脉冲的幅度与细胞的体积相关.1 lrr/T n606.13-2008
5、 4 意义和用途4. 1 组织工程血细胞计数具有更高的准确度的细胞.5 检测限的讨论5. 1 重合当一个以上的细胞同时穿过/问岖，不是发生细胞计数结果偏少，测量的细胞体的函数，因此可通过仪器校正，这称为重合校正.生，确保结果的准确(误差不超过5%5.2 细胞的尺寸变化J ，如显微镜下用细胞自动计数的脉冲庐兔产生一个更大的脉冲.结果会看作是细胞浓度在统计学上可预测细胞悬液浓度，可最大程度的降低重合的发细胞直径变化可达30:1，体积变化可达27000 : 1，而这仅是反应了选择的小孔管的测量功能.应用这项技术，可以在大约0.6ml200m的范围内测量.低限以下会受到热和电噪声干扰.5.3 小孔管的
6、测量范围小孔管的测量范围与其直径成比例.在0.02倍直径到0.8倍直径的范围内，小孔管的测量范围与直径成线性相关.但在细胞尺寸大于0.6倍小孔管直径时，小孔管容易堵塞.因此，在实际操作中，小孔管的测量范围被规定为其直径的2%60%.2 YV/T 0606.13-2008 5.4 电解质溶液细胞悬浮溶液应具有传导性，对细胞大小元影响.最常选择的电解质溶液是磷酸缓冲生理盐水.6 干扰6. 1 碎属和细胞碎片修正细胞大小阔值的设置有助于分析时校正计数的碎屑或细胞碎片.6.2 细胞覆集体细胞聚集体将被视作单一细胞计数，悬浮液.6.3 沉淀.细胞样品可因放童出确的结果. 6.4 黯附细胞可能秸附6.5
7、其他7 危害7. 1 警告化不能使用性溶液中不8 操作8. 1 不论使用何种可选择的小孔管直径细胞计数功能，然而，的基础上，通过区别细8.2 按制造商的使用说明标准粒子进行校正.8.3 用电解质溶液(常用磷酸盐缓冲样品制备的20min内进行分析.的细胞.市售的酶溶液有助于制备单细胞品容器，以获得更准确和精剧烈反应.在酸器可能在仪器大小、，某些型号的仪器只提供某些型号的仪器在计数汰的操作使用后进行.应使用，通过翻转七到人次使之轻轻混合.应在8.4 在仪器上设定待分析的特定细胞的大小阁值.选择合适的小孔管.制造商的操作手册中可能会有合适的操作方案.8.5 设定每次分析时的需液体积，通常是0.5mL
8、.把细胞样品放在样品台上.8.6 按启动键.为了监测小孔管是否堵塞，可以观察每份细胞样品的分析时间.而且，目前大部分的仪器都有小孔管现察窗，能方便的检查是否堵塞.另外，许多仪器也提供小孔管自动除障功能.8. 7 结果记录.许多仪器能自动记录和分析结果.8.8 为了确保检测质量，应周期性的测定不同浓度的标准品或参考品.应由每一实验室自行制定质量控制方案.管理机构也可不定期的要求实验室进行标准品或参考品的比较测试.3 VY/T 0606.13-2008 9 精度和偏倚国际血液学标准化委员会通过测定红细胞评估本计数方法得出的变异系数是0.24.%-0. 72 Yo. 某些制造商的使用手册中会列出典型
9、细胞类型的测量精度.随仪器一起提供有合格的仪器安装、使用、性能维护说明书.本计数方法的偏倚尚未有相关报道.国际血液学标准化委员会已将此计数方法作为红细胞和自细胞计数的参考方法.队4 YY / T 0606.13-2008 参考文黯1 Picciolo, G. L. , Hellman, K. B. , and Johnson, P. C. , Meeting Report: Tissue Engineered Medical Products Standards: The Time is Ripe. Tissue Engineering, Vol 4(口，1998，pp.5-7.2 Lamo，
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