1、ICS 11.100 C 44 yy 中华人民共和国医药行业标准YY/T 1171-2009 改良罗氏基础培养基Lowenstein - J ensen medium base 2009-12-30发布2011-06-01实施因家食品药品监督管理局发布YY/T 1171-2009 目u言本标准全部技术条款为推荐性。本标准是在参考GB15987-1995 传染性肺结核诊断标准及处理原则、中华人民共和国药典的基础上，结合中自国情及实际情况和要求而制定。本标准的附录A为规范性附录。本标准出国家食品药品监督管理局提出。本标准出全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位
2、2中国药品生物制品检定所。本标准主要起草人:孙彬裕、刘艳、曲守方、高尚先。I YY/T 1171 -2009 改良罗氏基础培养基1 范围本标准规定了改良罗氏基础培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、贮存。本标准适用于改良罗民基础培养基。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 191 包装储运图示标志GB 15987-1995 传染性肺
3、结核诊断标准及处理原则中华人民共和国药典2005年版JJF 1070一2000定量包装商品净含量计量检验规则3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 培养基cnIture medium 培养基是指出人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的提合营养物制品。3.2 质控菌株quality control strain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。3.3 菌落形成单位colony forming unit, cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，出单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。4 培养
4、基配方单位:g/L谷氨酸销磷酸二氢怦硫酸镜拧攘酸镜马铃薯淀粉孔雀绿7.2 2.4 0.24 0.6 30 0.4 1 VY/T 1171-2009 5 质量要求5. 1 理化要求5. 1. 1 外观应为均一的蓝绿色粉末。5.1.2 装量应不低于标示量。5. 1. 3 干燥失重应不超过6.0%0 5. 2 生长试验培养基接种质控菌应生长良好。空白对照管应无杂菌生长。6 栓验方法6. 1 理化检验6. 1. 1 外观采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。6. 1. 2 装量按JJF1070-2000，使用通用量具，测定装囊，应符合5.1.2的规定。6. 1. 3 干燥失重按中华
5、人民共和国药典干燥失重翻定法测定，应符合5.1.4的规定。6. 2 生长试验按附录A试验方法进行，结果应符合5.2的规定。7 使用说明书使用说明至少应当具有下列内容=a) 产品名称、规格sb) 配方;c) 用途zd) 使用方法;e) 注意事项;f) 贮存条件与失效期;g) 生产单位名称、联系方式。8 栋志与标签标志与标签至少应当具有下列内容ga) 执行标准号;b) 产品注册证号;c) 产品名称、规格、数量、批号;2 d) 制造厂名称、商标和广址;e) 贮存条件和失效期。9 包装、运输、贮存9. 1 包装YY/T 1171-2009 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封
6、性良好，不易破碎。9.2 运输培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触，防止内外包装破损。9.3 贮存产品应置阴凉干燥处贮存。3 YY/T 1171-2009 附录A规范性附录)改良罗氏基础培养基生长试验方法A. 1 质控菌株偶友分枝杆菌CMycobacteriumfortuitum)ATCC 6841; CMCC(B) 93020 胞内分枝杆菌CMycobacteriumintracellulare)ATCC 13950; CMCC(B)93314 堪萨斯分枝杆菌(Mycobacteriumkansasii)ATCC 12478; CMCC(B)
7、93304 凛瘸分枝杆菌(Mycobacteiumscrofulaceum)ATCC 19981;CMCCCB)93307 结核分枝杆菌H37Ra(Mycobacteriumtuberculosis H37Ra)ATCC 25177;CMCC(B)93020 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代).并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。不应同时操作2个以上菌株。A.2 方法A. 2.1 无菌操作要求培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应照中华人民
8、共和国药典灭菌法的要求，采用验证合格的灭菌程序灭菌。A.2.2 菌种复苏启开质控菌种，用0.9%无黯氧化铀榕液O.3mL制成菌悬攘，加至改良罗氏培养基斜面上，置培养箱中36C士lC培养1421天。A.2.3 菌种传代刮取上述复苏后的质控菌种的新鲜培养物，加至改良罗氏培养基斜面中，置培养箱中36C土lC培养1421天。A. 2. 4 菌种增菌培养刮取上述传代后的质控菌种的新鲜培养物，加至改良罗氏培养基斜面中，置培养箱中36C士lC培养1421夭。A. 2. 5 菌悬灌制备用0.9%元菌氧化铀溶液将上述增菌培养后的质控菌种的新鲜培养物制成(1.03. 0) X 1Q3cfu/mL 的菌悬攘，作为工
9、作菌液。A. 2. 6 培养基制备分别称取40.84g待检培养基和经检验合格的对照培养基，加入600mL蒸馆水和12mL甘袖，氓匀，沸水锅内煮沸30min40min(其间不时摇动，防凝块).呈糊状，待冷后，加入经消毒纱布过滤的新鲜全卵破lOOOmL(新鲜鸡卵经自来水清洗，肥皂水刷洗干净，待干后以75%乙薛擦拭捎毒。在元菌操作下把那液倒入巳灭菌的有刻度搪瓷杯内，灭菌纱布过滤人培养基中).捏匀，分装试管Cl8mmX180mm)。每一试管加培养基7mL.培养基斜面高度为培养基占试管底部的2/3处为宜，童血清凝固器内凝固。凝固器内温度至90C时，放入分装试管，以摆放两层为宜。待凝固器内温度达85C-9
10、0C.计时，4 YY/T 1171-2009 凝固1h1.5h后取出，放冷，即为改良罗民培养基，元菌试验后放40C冰箱备用，1个月内使用。制备的培养基颜色鲜艳，表面光滑湿润，有一定韧性和酸碱缓冲能力。A. 2. 7 培养基接种按照GB15987-1995 传染性肺结核诊断标准及处理原则。检测时，每支斜面接种O.lmL工作菌破口OO300cfu)，每一质控菌株接种2支解丽。另取2支不加菌攘的斜面作为空白对照管。置培养箱中36C士lC培养，持续培养3周。以对照培养基进行平行试验。检测结核分枝杆菌H37Ra时，加菌班后需摇晃一下。A. 2.8 观察记录结果每天观察井记录菌落生长情况。A. 2. 9
11、结果判定对照培养基元杂菌生长且质控菌生长良好，则试验有效。否则试验无效，应重试。待检培养基元杂菌生长旦质控菌生长良好者判定为合格。5 YY/T 1171-2009 参考文献lJ 李影林.中华医学检验全书.北京2人民卫生出版社，19966 。OON-FhFVHK问阳中华人民共和国医药行业标准改良罗氏基础培养基YY/T 1171-2009 * 中国医药科技出版社出版发行北京市海淀区文慧回北路甲22号邮政编码，100082网址电话2发行，010-62227427邮购，010-62236938三河市腾飞印务有限公司印刷各地新华书店经销告岳印张0.75字数16千字2011年5月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2011年5月第一版争e定价15.00元如有印装差错由本社发行部调换版权专有侵权必究举报电话:(01062214756书号:145067.57
