1、 适用范围中华人民共和国国家标准甘薯种苗产地检疫规程Plant quaranne rules for produclnl areas of s eet potato seedllnl and seet potato seed 本规程适用于所有甘薯种茵地。2 名词解释UDC 635.22 -152 GB 7413-87 2.1 产地检疫s本规程所指产地检疫是指种苗生产过程中的全部检疫工作，包括培育无检疫对象的种苗和种茵生长期间田间检疫检验及必要的室内检验等。2.2 健康种茵g本规程所指健康种苗是指按本规程所列检疫检验方法检验，未发现检疫对象和危险性病虫害的事块、薯苗。S 检疫对象及危险性病虫8.
2、1 检疫对象z甘薯瘟CPseudomoassolanacearum (E.P .Smith) powson) 8.2 危险性病虫害z甘薯黑斑病CCeratocystisfimbriata Ell.时Hals峙的甘薯疮癫病Csphaccloma batatae回w)甘薯蔓割病CPusarium bul bigenum cooke etma田.Var. batatas wollew. F. Oxysporums chJf zwollenw)甘薯小象甲CCyJas.formicarius (Pabricius) 等。4 健靡种菌的生产4.1 种菌地的选择4. 1. 1 种茵地必须选在无检疫对象发生的
3、地区。4. 1. 2 有病地区必须选在有隔离条件周围lkm范围内不种甘薯，种亩地上游无薯瘟病和危险性病虫发生，排灌系统独立的地块。4. 1.8 在育苗、抨插前一个月育茵单位或个人向所在地植检部门申请并填写甘薯种茵产地检疫申请表，见表l。中华人民共和国农牧渔业部1987- 02 -20批准1987 - 10 -01实施129 GB 7418-87 表1甘薯种苗产地检疫申请表申请表编号申请单位育简单位联系人繁殖地点面积种苗果源晶种隔离条件育苗忏插期备注检疫机关意见2检疫机共盖章年月日检疫围注2申请在一式两份，一份留植检部门，一份繁育单位备查。4.2 种茵的采集4.2. 1 种苗采自无薯瘟病区并持有
4、植物检疫证书，若采自上季通过本规程生产的种苗，持本县檀检部门出具的产地检疫合格证。4.2.2 育菌前对种茵进行逐一检查，方法详见附录A(补充件h附录F(参考件).对可疑病株(块)进行室内鉴定，方法详见附录B(补充件。4.3 种苗地防疫措施4.3. 1 禁止携带未经检疫的种苗进人种苗地。4.3.2 严禁病区的猪、牛、羊粪和土杂肥进入种茵地。4.3.8 闲人、牲畜严禁进入种苗地。4.8.4 种亩地的农具要新置专用，专人负责。4.4 种苗地药剂防治树苗地发现危险性病虫时，要适时喷药防治。5 检查、疫情处理、入窑管理、签证5.1 田l闻检查5. 1. 1 由植检机关会同有关单位进行产地检疫。, 5.
5、1. 2 种苗出圃前薯瘟症状明显时选择晴天中午前后进行囡间检查，出薯时也检查一次。5.1.3 在全面目测的基础上，采取随机取样方法检查，每块种苗地抽查五点以上，每点不少于200株，薯块不少于200块。-5. 1. 4 田间症状鉴定见附录A(补充件、附录F(参考件。5. 1. 5 记录检查结果，载入甘薯种苗田间检查记录表(见表2)及甘薯种茵产地检疫档案卡片(见附录C)。130 GB 7413-87 表2甘薯种菌田间检查记录表地点年月日调查发现精株块).虫株接)、虫量情况项目调甘事瘟病甘曹黑斑病甘薯疮就病甘事蔓割病甘事小草事备直调查数病锅病病虫虫量注株% 株% 株% 株% 株是数块(块(惶(块)块
6、)量问五六口I疑病株块编号检童人员意见5.2 室内检查5.2. 1 发现可疑病株(块)的田块采集可疑病株块作室内检查，未发现可疑病株(块的田块抽样采集部分标本作室内检查，方法见附录B(补充件。5.2.2 把室内检查结果载入甘事种茵室内检查记录表(见表3)。表3甘薯种茵室内检查记录表检验可蜒病株块检验数量检监对靠检维方法检验结果班源编号t 5.2.3 把室内检查结果载入甘薯种茵产地检疫档案卡片(见附录c)。5.3 疫情处理年月检验5.8. 1 发现种苗带有检疫对象，不管发生轻重，立即停止育苗，并采取以下措施。日备注5.3.1.1 病地中的病薯病苗，应就地烧毁或挖坑深埋，尚未表现症状的事事块和薯苗
7、，也要集中煮熟后做饲料。5.3. 1. 2 病地和病地固周回块，每亩撒石灰100kg.并改种水稻一年，如果没水利条件，应改种玉米，高粱等旱作物三年以上。5.4 种薯入窑管理5.4. 1 种薯单收、单放单窑贮藏。131 GB 1418-87 5.4.2 种薯人害前必须对害进行消毒处理。5.4.3 严格检查挑选无病种薯，凉干后人害。5.4.4 贮藏过程中专人负责管理。5.4.5 出害时严格进行检疫检验，若发现薯瘟、危险性病虫时，全部种薯不得再做种用，改变用途。5.5 答i正g凡经田阅、室内检查未发现甘薯瘟病、危险性病虫的种菌，可由当地植检部门签发甘薯种茵产地检疫合格证(见附录D)，调往外县签发植物
8、检疫证书。132 A .1 病苗GB 7411-17 附录A甘葛瘟病的田间症状鉴定(补充件)在晴天中午，病菌顶部叶片萎垂，茎基呈现黑褐色水烂状，维管束从下而上呈黄褐色条纹状。A .2病病重薯块，整块呈黑褐色腐烂或一端腐烂，有版液状白色或淡黄色菌液，臭味很甚。病轻薯块，外表常不表现明显症状，仅在病薯的薯蒂附近呈褐色到黑揭色或尾根呈现不同程度的病变。剖开事块检查维管束，横切面表现为分散的褐色小斑点或黄褐色至深褐色斑块，纵切面可见从藤头或自尾根处开始，维管束呈黄褐色条纹状，可挤出乳浊状菌隙。133 B .1 细菌溢检验法GB 1413-81 附录B甘薯瘟病室内检验方法补充件在检验可疑病苗时，选发病未
9、腐烂的部位，将表皮剥开，用刀片纵切一小块(大约长5mm、宽3mm、厚1mm)黄褐色维管束组织放在载玻片上，滴一滴清水，如果1min后有乳白色的细菌溢在切口处出现，十几分钟后病组织四周布满细菌液肉眼或放大镜可看到就证明有薯瘟病细菌。在检验可疑薯块时，选发病未腐烂的部位，取一小块变色的维管束组织，制成玻片，在显微镜下检查，若有细菌液出现，即为薯瘟病菌。B .2 番茄茵接种测定法选感病品种的番茄(如沈阳番茄为接种材料，先把番茄种在小钵中，每钵4株，等长出2- 3 片真叶时备用。可疑病株按上述方法制成1mL的病菌组织液，随即把组织液装人4号针头的注射器中，通过叶背叶脉把组织液注入叶脉渗到叶肉组织巾，使
10、叶片呈水渍状，每次接种5株10叶，然后置于调温调湿箱中，保持28-30C和90%左右的程度(没有调温调湿箱，可用尼龙袋保湿)，如果接种用的事苗液带有著瘟病细菌，经过24-36h，接种的番茄叶片呈暗灰色水渍状，以后病部扩大叶片萎辜。湿度大时接种部位有白色的细菌版溢出，检查接种叶片的叶脉和叶柄，有细菌溢出。B .3 水商薯苗自根测定法第一步z育根。按常规剪取无病著苗20-30株，每株分别插入无菌的大号试管中，每管灌满无菌清水(自来水)，装上试管架，在甘薯生长季节室温下，经7-10天，水下各节萌发苗根，需常补足管水，使茵根雪白幼嫩。第二步z剪根。用无菌剪刀剪取第一步培育的白根20段每段3- 4 cm
11、)。第三步g接种测定。(1 )备灭菌培养皿4副，内垫无菌吸水纸加灭菌水滋润保湿。(2 )将待测定的薯苗或薯块等可疑病部组织浸出液(或直接取苗版)，用上备白根10段浸横接种后，移入保湿灭菌皿中各5段，另三皿10段用无菌清水接种为对照。(3 )所有培养皿均放30c恒温下，经12-24h，即可诱致臼根段里淡黄而腐烂，对照白根则雪白无病。B .4 红四.瞠(TTC)平板检验法选维管束变黄渴色未腐烂的病菌一段，党用肥皂水洗净，再用70%酒精擦洗表皮和手指，然后用灭菌的小刀将表皮剥开，置于灭菌的培养皿中，用灭菌的手术剪将病组织剪碎，加10倍无菌水浸渍，使病组织中的细菌泳入水中，半小时后用灭菌的移植坏抽取菌
12、液，在预先备好的红四氮哇琼脂平板配方见附录E)上划线分离，划线后将培养皿翻转置于30c温箱中培养24-4拙，如果出现白色中央带血红色的菌落，就证明是薯瘟病的细茵茵落。B .5 间接血a抑制方法第一步g取可疑病组织的维管束切片若卡克于生理盐水(NaC I含量。.85%)的试管中，静置30m in.ililJ成浓缩的浸出液。第二步g取抗血清以1:5为基数进行倍比稀释，稀释到1:5120 (第十一支试管)，在8x 12V 型血凝板上依次排列，第十二列安排生理盐水做对照。用标准滴管每种浓度滴一列，每穴一滴(每J苗。.025mL)。134 GB 7418-87 第三步g每行安排一个样本.i!:生理盐水对
13、照一个，待检材料六个，纯菌对照一个。每穴一滴，然后用微型混合器振摇2mino盖玻璃板，置37C温箱中40min 0 第四步B每穴滴加抗原致敏血球一滴，再振摇2m in，盖玻璃板，置37C温箱90min。第五步g结果判定。血球凝集程度的分级按常规标准记载，在血凝抑制试验中+以上的抑制凝集即记载为阳性。发生抑制作用的孔数比生理盐水对照行多2孔以上的为明显阳性反应，定为有病。比对照行多l孔的为可疑阳性反应，怀疑有病，与对照孔相同的无病。注E室内检验必备仪器设备，显微镜一台恒温箱-台高压消毒锅一台注射器一只培#皿4个市IJ备抗血清必备仪器，材料。抗血清凝集效价必备仪器。致敏血球制备必备仪器，材料。调温
14、调湿箱一台4号钟头一只8 x 12V型血撞饭一个135 地点价ttItII 1 I 种茵育苗日期种束源日期GB 7413-87 附录C甘薯种苗产地检瘦档案卡片补充件)田块编号田间检查小象甲病株块事虫株块率株% % 块室内检查田间室内病株(块事% 检查人检查人说明z田间检查一栏病株块率(%)应填人甘薯瘟病、甘薯黑斑病、甘薯疮肮病、甘薯蔓割病的病害株(块率(%)。136 植检字号申请检疫单位t个人商苗时间19 年月品种繁琦面积田间调查次数检疫结果GB 7411-町附录D甘种苗产地栓瘦合格证(补充件日歪19 年月预计总产kg、株室内检查次数日审批意见，经产地检疫符合国家健康种苗标准，准予作种用，特发
15、此证检疫机关盖章检疫员签证年月日注z本E式三联，第一联为存根，第二联交制种单位农户)，第三联变种子收购部门(或用户。本E恬只限本单位户)该批种事使用，不得转借他人或弄虚作假.否则以违章调运论处。本证拈不作检疫证书使用。调往外县的种苗，可凭此证恬向当地植检部门换取检疫证书。137 GB 7411-町附录E红囚.睡培养基的制备参考件成分含有葡萄糖10g(或甘油5m L) .蛋白陈10串，水解物酷素酷蛋白的水解物)1 g.琼脂18g.蒸馆水100mL。大约用四分之三的水加热琼脂，其他配料溶于剩下的水中。当琼脂溶解时，加入其他配料的水溶液，搅拌均匀，调节pH= 7左右，经纱布过滤后每个三角瓶装100m
16、L.高压消毒不跑过20 m i n.分离前每100mL培养基加1%红四氮略溶液。.5mL.138 F .1 甘葛小象甲GB 7413-87 附录F甘蕃种苗产地检搜规程危险性病虫田间症状鉴定参考件检查薯蔓基部有无肿大不正常现象，事块表皮有无虫驻小孔或排泻物，并将薯块或薯蔓基部剖开，检查有无隧道或虫子。F .2 甘薯黑斑病薯块z薯块上形成黑褐色近圆形病斑，病部梢凹陷，轮廓清晰，组织坚实，如用刀横割病斑部，可见薯皮下的薯肉皇青褐色或黑褐色，深约0.5-2 cm.有苦昧和强烈的臭味。在适当的条件下，病斑中央会长出黑色刺毛状物一一子囊壳。植株s茎基部形成黑揭色梭形或椭圆形病斑稍凹陷。病斑上初期有灰色霉层
17、，后变黑色粉状物，病斑逐渐扩大。重者基部全部变黑，枯死。F .3 甘葛疮萄病叶片卷皱呈木耳形，嫩芽僵缩，藤蔓和叶柄生出无数凸凹粗糙的病斑，病蔓先端硬化僵直不再伏地蜿蜒。F .4 甘葛蔓割病薯块s维管束变褐，横切薯块蒂部，可见褐色圆环形斑点，严重时，上部茎蔓枯死，而薯块并不腐烂，且在土表抽出很多幼蔓。植株g幼苗、叶脉间叶肉变黄，茎内维管束变褐色。潮湿时，病部产生白色至淡红色的霉层。轻者分校增生和节问缩短，茎基自革大，出现青晕，表皮似列呈丝状。附加说明z本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。本标准主要起草单位农牧渔业部全国植保总陆、福建省农业厅植保站、浙江省农业厅植保础。本标准主要起草人钱菊梅、王大兴、赖文昌、陈元正、宋大荣。139
