1、GB 765087 1 适用范围 本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。 2 原理 谷物蛋白质碱解后，降解成肽和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸吲哚环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 3 仪器、设备 3.1 分析天平，感量0.1mg。 3.2 实验室用粉碎机。 3.3 721型分光光度计，或相当的仪器。 3.4 离心机，4000r/min。 3.5 培养箱。 3.6 20ml具塞刻度玻璃试管（须校准）。 4 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。 4.1 浓盐酸（GB 62277），比重1.19。 4.2 10盐酸溶液：22
2、.7ml浓盐酸加水至100ml。 4.3 5对二甲胺基苯甲醛（HGB 348662）溶液：5g 对二甲胺基苯甲醛溶于10盐酸中，并定容100ml。 4.4 1硝酸钠（GB 63677）水溶液（ m/V）。 注：4冰箱中保存，一周内使用有效。 4.5 10氢氧化钾（GB 230680）水溶液（ m/V）。 4.6 L-色氨酸，层析纯。 4.7 L-色氨酸标准溶液：准确称25mgL-色氨酸（105干燥2h），加少量0.1mol/L氢氧化钠（GB 62981）使之溶解，定量地转移到250ml棕色容量瓶中，用水定容。浓度为100 g/ml。 注：4冰箱中保存，一个月内使用有效。 5 试样的选取与制备
3、页码，1/3GB 7650872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR765000A.htm 5.1 选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎（带壳籽粒先脱壳），使95以上通过0.25mm孔径筛。 5.2 按GB 290682谷类、油料作物种子粗脂肪测定法脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入磨口瓶中备用。 6 校准曲线的绘制 吸L-色氨酸标准溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml 10氢氧化钾溶液，摇匀；加0.2ml5对二甲胺基苯
4、甲醛，摇匀；加0.2ml1硝酸钠，摇匀；将试管置 于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入25培养箱中显色75min（温度升到25时记时），取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以色氨酸含量（ g）为横 坐标， 吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录A。 7 测定步骤 7.1 称样：称取40mg试样两份，准确至0.1mg，与此同时，另称样品，按GB 3523 83谷类、油料作物种子水分测定法测定水分含量。 7.2 水解：将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml10氢氧化钾，振摇，样品全部湿润后，放入4
5、0培养箱中水解1618h。 7.3 显色：从培养箱中取出试管冷至室温后加0. 2ml5对二甲胺基苯甲醛，摇匀；加0.2ml1硝酸钠，摇匀；将试管置于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后置于40培养箱中显色45min（温度升到4时记时）。 7.4 测定：取出试管冷至室温后，用水稀释至刻度，摇匀。以4000r/min离心10min。取上清液以试剂空白作对照，在590nm波长处测读吸光度。 8 结果计算 8.1 计算公式 8.2 结果的表示 两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留有效数字两位，第三位数按GB 1.181标准化工作导则 编写标准的一般规定附录C规定取舍。 8.3 允许差
6、 式中： m 试样质量，mg； 从校准曲线上查得的色氨酸含量， g；H 试样水分百分率。页码，2/3GB 7650872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR765000A.htm 两个平行样品色氨酸测定值为0.10以下时，相对差允许为8；0.10或 0.10以上时为5。 为脱脂试样的色氨酸百分含量，换算成原样品的色氨酸含量应乘以系数（1-脂肪）。如脂肪含量为4以下时，二个结果在允许差之内。 附 录 A （参考件） 在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，L- 色氨酸标准溶液的显色条件可采用3060min，测定结果与2575min一致。 页码，3/3GB 7650872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR765000A.htm
