1、中华人民共和国国家标准羊毛水解物中磺基丙氨酸含量的测定纸电泳法和比色法GB/T 1 2 4 9 1 9 0 Determination of cysteic acid content of wool hydroly国t回bypaper electrophoresis and colorimetry 牛：标准等效采用国际标准ISO2915一1975用纸电泳法和比色法测定羊毛水解物中磺基丙氨酸的含挝儿1 主题内容与适用范围牛；标准规定了采用纸电泳法和比色法测定羊毛纤维中磺基丙氨酸含量的方法。本标准适用F任何形式的、未染色及染色、氧化与还原的全毛纺织品，即散纤维毛条、毛纱和织物。测定混纺织物时，必须
2、确知羊毛的含量。本标准也适用于碳化羊毛的检验。2 术语磺基I习氨酸芋毛纤维中脱氨酸的最终氧化产物。3原理将羊毛纤维在盐酸溶液中水解，存在于水解液中的磺基丙氨酸借助纸上电泳与其他氨基酸分离，将纸条显色对磺某丙氨酸的区域进行洗脱，通过与一个同时电泳和着色的己知磺基丙氨酸含量的样品相比较，用比色法定量测定未知磺基丙氨酸的含量。4试剂测试所用的水为蒸馆水或去离子水，试剂为分析纯a4. 1 甲醇。4. 2 5. 7 mol/L的盐酸溶液：由密度为1.1 g/mL的浓盐酸经恒沸蒸馆后配制。4. 3 邮三酬领试剂0.1 E乙酸锅溶于10mL水中，顺序加入5mL冰乙酸，100mL内阁和ls市三自由电溶液贮于棕
3、色瓶内在冷柜内可保留一周。4. 4 缓冲溶液，pH3. 5，将10mL毗晓、100mL冰乙酸置于l000 mL试剂瓶中，加水890mL 棍和均匀。4. 5 二刘甲烧。4. 6 氯化锁溶液2.5 g氯化领（BaCI, 2比0）溶于100mL水中。4. 7 磺基丙氨酸标准溶液2称取o.110 6 g磺基丙氨酸（HJCCH(NH山CH20 SO,H 矶时于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。称量前，磺基丙氨酸放在以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内在70土2c：条件下干燥24h0 国家技术监督局19900921批准1991 06 01实施i I 5 仪器5. 1 称量瓶。5. 2分析天平：精度为O.QQ
4、Q2g05. 3鼓风烘箱！052及70土2。5. 4干燥器。5. 5棕色容量瓶，5,100,1OOOmL0 5. 6 移液管：1,5,10,20mL。5. 7 微量进祥器，O.01 mL0 5. 8梨形烧瓶：!00 mL。5.9烧杯：100,250mL0 5. 10 索氏萃取器。5. 11 旋转蒸发器。GB/T 1 2 4 91 9 0 5. 12 电泳仪g输出电压为300v，电泳室能容纳至少30cm长的纸条。5. 13 回流冷凝管。5. 14微量吸液器：0. 05 mL。5. 15 有塞量筒：IO mL。5. 16 分光光度计3分光光度计或吸收波长400800nm的滤色光度计，吸光度读数精度
5、为0.01 0 5. 17 电泳滤纸条，6cm 30 cm0 5. 18玻璃皿05. 19玻璃砂芯漏斗z容量35mL，滤板平均滤孔4080m。5.20刻度吸管，I mL0 6 试样制备s. 1 除去试样中所有的植物性物质和其他杂物，织物拆成纱线，将纱线剪成lcm 长度，毡类则剪成小块，用滤纸包好放入索氏萃取器中，用工氯甲烧萃取1h（至少循环6次），取出试样，待试样中二氯甲：烧挥发后，再将试样放在温度20土2及相对湿度（65土2）%条件下平衡24h后称量。s. 2 称.000 0土0.000 2 g试样两份（6. 1），用以测定干燥重量。s. 3 称）.000 0土0.000 2且试样一份（6.
6、I），为生成水解物用以测定磺基丙氨酸含量。7 操作步骤7. 1 绝干重量测定2把试样（6.2）分别放入己知重量的称量瓶中（5.1），放入105士2的鼓风烘箱中干燥2h后，盖好称量瓶盖放入干燥器（5.4）中，自然冷却o.5 h后称量，重复上述操作直至恒重。算出平均干重WO7.2 水解7. 2. 1 将试梓（6.3）放入100mL梨形烧瓶中（5.幻，加入20mL 5. 7 mol/L盐酸溶液（4.刀，装上回流冷凝管。置于泊浴中105土2回流4h0 7. 2. 2如试祥是由未经碳化羊毛组成，则按7.2. I操作得到的水解物直接借助旋转蒸发器浓缩。7. 2. 3 如i式样是碳化羊毛，则将水解物移入25
7、0mL烧杯中，用水清洗梨形烧瓶，清洗液也倒入烧杯中，并煮沸，在煮沸过程中，用吸管逐滴加入lmL氯化领溶液（4.的，同时不断搅拌，冷却后放置过夜，用砂芯漏斗（5.19）过滤于梨形烧瓶中，然后用水清洗漏斗，清洗液也倒入烧瓶中。7.2.4将7.2. 2或7.2. 3烧瓶中的水解物借助旋转式蒸发器在50水浴中浓缩，为了除去残余盐酸，每次加入10mL水并在旋转式蒸发器上浓缩，重复三次。然后将浆状浓缩物用微量吸液器（5. 14）移入70 GB/T 1 2 4 9 1 9 0 5 1nL容说瓶：，少挝多次用水清洗烧瓶，将清洗放移入5mL容；王版中用水陆释豆刻度。7. 3 11!,泳7. 3. I 样纸条（斗
8、，17）的小可用铅宅l隔一条垂亘线，然后Ill微挝进悴器（5.7）移取O.O!mL1j(解物点tlE , Ji:线巾。Ij （得平行试怦两份），再在另张纸条七点样0.01 ml. 标准磺基l可氨酸济液点样l义Jo！乓.i&I草纸杂边缘。.5cm以I二。把二张纸条两端插入装有缓冲浴i在（4 . j ）的电iik槽，使滤纸JS）生1ttll吸收t是lj1(if 液也Pf将缓冲部液喷洒f纸条上（Ji次电泳后缓冲溶液必须调换。7. 3. 2 纸条充分吸收缓冲溶液后，施于纸条58V /cm的电压（电泳仪电ffi约：300v) 0 4 5 h j电泳；占来然后将险、fl以阳极纸端朝k悬挂于烘箱内，在70(
9、f燥30min, 7. 4 险也初洗脱7. 4. 1 炽二的纸条用ti了自if锅溶液（4. 3）喷洒、白色，或放入少量珩嗣锅溶液仅磁盖玻璃Ull(5.18）的！点ilil. fcl! Ht Jf,吸收显色液，而不浸入显色液内。然后将纸条悬挂烘箱中（阳极端I句！：.) .币70(0干30 1nin，磺J主丙氨酸品带位院根据电泳电压和时间约在从起始i:it向阳极方向移动46cm处。7. 4. 2 i生il气相If地剪1、水解物和标准溶液的磺基丙氨酸斑点区域，并进步剪成小块分别放入3个白苍1,:f；可（5. 15）。7. 4. 3 选用任电泳纸，在磺基丙氨酸斑点区域与阳极端之间（见下阁）剪F面积相同
10、的纸条并经同佯次数剪训后，放入有塞量筒中。nu n川U。3，比值色区2 .基丙氟酷色区I .忽始线7.4.4 .(1:1个有塞量筒中分jjlj用移液管移入5mL甲醉，轻轻摇动，在30min内纸上红色斑点熔F甲醉巾，然后过滤除去杂质，取滤液进行比色。7. 5 It色7. 5. 1 采用10mm比色池，波民为500土l0 nm. 7. 5. 2 以7.4. 3纸条的洗脱液作为参比液。7. 5. 3 测定吸光度吸光J!t.( o. 2 o. 7范围内，如大于o.7，则将水解液稀释或减少水解试样的量如吸光度小r。.2. 则l可附加l;j(解试佯f量。8 分析结果的计算横慕l苟氨酸含量c（以重量百分比表
11、示）计算如下：e旦二1xI00 . -. ( I ) v H I r Pl, m川式I r 磺Ji丙氨酸含址，%； 标准溶液点样量中磺基丙氨酸的质量，g,I 水解物稀释液体积，mL;lu 水解物的点样量，mL;f:H . 水解物的吸光度，GB/T 12491-90 E, 标准溶液的吸光度sm一分析试样的绝对干燥质量，g,如采用相同的叫、民、v数值，则上述公式可简化为2Ck！100 . ( 2 ) E, 恤式中k 常数因子。9 对照试验每次系列试验应用未处理原样作对照试验。10试验报告. 未处理原样的磺基丙氨酸含量$b. 各处理试样的磺基丙氨酸含量；c. 注明按本标准方法测试，或注明偏离本标准方法测试情况； 试验日期。附加说明本标准由中华人民共和国纺织工业部提出。本标准由纺织工业部标准化研究所归口本标准由上海毛麻纺织科学技术研究所负责起草。本标准主要起草人储国强、徐壁城、沈美华、钱瑞莲。72
