1、中华人民共和国国家标准阴生物降解度试验方法GB/T 1 581 8 -1 995 Testing melbod for biodegradablllly of anionic and nonionic surfactanls 1 主题内容与适用范围本标准规定了测定阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂生物降解度的试验方法。本标准适用的阴离子表面活性剂品种有直链烧基芳基磺酸盐、支链烧基芳基硫酸盐、统基破酸盐、烧基硫酸盐、乙氧基化烧基硫酸盐、烯基磺酸盐，非离子表面活性弗j品种有2聚乙氧基化烧基盼、聚乙氧基化脂肪醇、聚乙氧基化脂肪酸醋、山梨糖醇脂肪酸醋、脂肪酷二乙醇胶。本标准亦适用于洗涤剂中上述阴离子表
2、面活性剂和非离子表面活性剂生物降解度的测定。2 引用标准GB/T 5327 表面活性剂名词术语GB/T 5328 表面活性剂简化分类GB 5560表面活性剂纺织助剂聚乙二醇型非离子表面活性剂活性物及聚乙二醇含量的测定法GB/T 13173.1 洗涤剂样品分样方法GB/T 13173. 2 洗涤剂中总活性物含量的测定GB/T 13173.3 洗涤剂中非离子活性剂含量的测定离子交换法GB/T 5173表面活性剂和洗涤剂阴离子活性物的测定直接两相滴定法3 方法概要以表面活性剂驯化培养的活性污泥作降解生物源，加于试验份中进行振荡培养，测定培养周期中表面活性剂的减少量来计算试样的生物降解度.4 试剂和材
3、料分析中只使用认可的分析纯试剂和蒸馆水或纯度相当的水。4. 1 氯化镀(GB658)。4.2 磷酸氢二御(HGB3155). 4.3 硫酸镶(GB671)。4.4 氯化饵(GB646)。4. 5 硫酸亚铁(GB664)。4.6 酵母浸膏(生化试剂).47 1甲基十一烧基苯磺酸销z由1-十二烯制得，平均相对分子量348.5.纯度95%以上，生物降解度国东技术监督局1995-12-08批准1996-08-01实施309 GB/T 15818-1995 大于99%。4.8 聚乙氧基化正月桂醉g氧乙烯加成数7mol，平均相对分子最494.6，纯度98%以上，生物降解度大于99%。4.9 微生物源g活性
4、污泥取自处理民用废水的污水处理场，活性污泥悬浊物的浓度应调整为10OOO 20000 mg/L，采样后在5h内使用。4. 10 甲酸，38%40%溶液。5 仪器普通实验室仪器和下列仪器25. 1 振荡培养机，振幅2451mm，振动频率225-250次/min的回转式振荡机，或振幅50-100mm , 振动频率100-130次/min的往复式振荡机。5.2 振荡培养瓶，容量1L，用棉塞塞紧于170C，加热灭菌12h , 5.3 生物显微镜。6 程序6.1 试验样品的制备6. ,. , 按GB/T13173.1制备表面活性剂和洗涤剂实验样品.6. 1. 2 将洗涤剂实验室样品分别按GB/T1317
5、3. 2和GB/T13173.3分离制备总活性物(阴离子和非离予表面活性剂)样品和非离子表面活性剂样品。6. 1. 3 试验份参照物(4.7、4.8)样品分别按GB/T5173和GB/T13173.3试验方法测定表面活性剂含量，然后配制成浓度为0.01mg/L溶液备用。6.2 基础培养基溶液的制备用于试验的培养基溶液组成如下s水1L 氯化镀3.0 g 磷酸氢二梆1. 0 g 硫酸续0.25 g 氯化例。.25g 硫酸亚铁0.002 g 酵母浸膏。.3g 酵母浸膏在使用前加入，已加入酵母浸膏的培养基溶液存放超过8h，则要进行高压灭菌处理于0.11-0.13 MPa，122-125C，灭菌20mi
6、n) ，试验中所采用水应不含抑菌物。6.3 基础培养基中表面活性剂试验份的加入a. 在含500mL培养基溶液(6.幻的培养瓶中，加入试验份表面活性剂，浓度约30mg/L. b. 为了验证试验条件，同时准备同样量培养基溶液(6.2)加入1-甲基十一统基苯磺酸销(6.1.3)榕液或聚乙氧基化正月桂醇(6.1.3)溶液的对照试验培养瓶，使浓度约为30mg/L，以及只有培养基溶液(6.2)不加表面活性剂的空白试验培养瓶.6.4 活性污泥的接种在6.3各培养瓶中，每100mL基础培养基溶液加1mL活性污泥(4.9)。6.5 培养将已接种活性污泥的各培养瓶，安装在振荡培养机(5.1)上，在25土;lC进行
7、振荡培养。6.6 驯化按照6.7规定在8天试验前，用下面方法进行驯化培养。310 GB/T 15818-1995 将6.3制备供试验用的培养瓶按6.4接种后，依照6.5振荡培养72h.然后将此培养瓶中的内容物按照6.4规定分别接种于按6.3另外准备的各个培养瓶中，依照6.5的条件再振荡72h进行驯化培养。6.7 生物降解度试验将按6.6经过二次驯化培养的内容物，按6.4规定接种于按6.3所制备的培养瓶中，在6.5所示的条件下，进行8天的振荡培养，为了计算生物降解度，在培养开始和满7天及满8夭时，分别从务培养瓶中取部分内容物，按附录A(补充件或附录以补充件)测定表面活性剂的浓度。如果不及时定量，
8、则每100mL阴离子表面活性剂试样溶液中加入1mL甲隆溶液(4.10)以便保存，非离子表面活性剂试样溶液不能加甲&保存，否则会影响结果的准确性。7 试验结果计算表面活性剂的生物降解度由培养开始和第七天、第八天与空白试验培养瓶溶液的分析值之差，求出相应期间的表面活性剂浓度，按下式计算出生物降解度D.以第七天和第八天的降解度平均值表示，所得结果应表示至一位小数。D=S。一Bo)一(S，- B,) = . . X 100 So - Bo 式中2D-x天后的降解度，%; So一试验开始时试验培养瓶(6.3a)中或对照试验瓶(6.3b)中表面活性剂的浓度.mg/L，Bo一一空白试验值.mg/L.S，-x
9、天后的试验培养瓶(6.3a)中或对照试验培养瓶(6.3b)中表面活性剂的浓度.mg/L，B，一寸天后的空白试验值.mg/L。8试验条件如果1甲基十一统基苯磺酸纳的生物降解度低于97.5%或聚乙氧基化正月桂醇的生物降解度低于95.0%.以及第七天和第八天的降解度之差大于2.0%时，贝tl试验无效。 311 A1 方法概要GB/T 15818-1995 附录A阴离子表面活性剂的定量补充件)用兰氯甲烧萃取阴离子表面活性剂与亚甲基蓝所形成的复合物，然后用分光光度法定量阴离子表团活性剂。A2试剂分析中只使用认可的分析纯试剂和蒸馆水或纯度相当的水。A2.1 阴离子表面活性剂标准溶液称取相当于1g阴离子表面
10、活性剂(100%)的参照物(4.7) ，准确至1mg，用水溶解并转移至1L容量瓶中，然后稀释至刻度混匀，该溶液1.0mL含1mg表面活性剂，移取此溶液10.0mL，用水稀释至1 L，该溶液阴离子表面活性剂浓度为0.01mg/mL。A2.2 亚甲基蓝溶液称取O.1 g亚甲基蓝，用水溶解并稀释至100mL，移取30mL溶液于lL容量瓶中，加入6.8mL 浓硫酸及50g磷酸二氢销水合物(NaH，PO. H，O)，溶解后用水稀释至1Lo A2.3 三氯甲烧(GB682) A2.4.磷酸二氢销洗涤液将6.8mL浓硫酸及50日磷酸二氢锅溶于水中，稀释至1Lo A3 仪器普通试验室仪器和下列仪器g分光光度计
11、，波长360-800nm，具有30mm比色池.A4 标准曲线的绘制取一系列含有0-150吨阴离子表面活性剂的整分份标准溶液(A2.1)作为试验溶液，于250mL 分液漏斗中加水至总量100mL，然后按A5规定的程序萃取和测定吸光度，绘制阴离子表面活性剂含量(mg/U与吸光度的标准曲线。A5 试样中阴离子寝面活性fill含量的测定准确移取适量体积的(6.7)试样浴液于250mL分液漏斗中，加水至总量100mL(应含阴离子表面活性flJ10-100g)，然后用0.05mol/L硫酸(H，SO.)或0.1mol/L氢氧化销溶液调节pH至7。加入25mL亚甲基蓝溶液(A2.2)，摇匀后加入20mL三氯
12、甲统(A2.3)，振荡30S，静置分层，若水层中蓝色退尽，则应再加入10mL亚甲基蓝溶液，再振荡，静置分层.将王氯甲烧层放入另一250mL分液漏斗中(注意勿将界面絮状物随同三氯甲烧层带出)，重复萃取三次。合并三氯甲烧萃取液于一分液漏斗中，加入50mL磷酸二氢销洗涤液(A2.4)振荡30s，静置分层将三氯甲烧层通过洁净的脱脂棉过滤至100mL容量瓶中，再加入10mL三氯甲惋于分液漏斗中，振荡30 S，静置分庭，将三氯甲炕层经脱脂棉过滤至容量瓶中，再以少许三氯甲统淋洗脱脂棉，然后用三氯甲烧稀释到刻度，混匀，同时做空自试验。312 GB/T 15818-1995 以30mm比色池，以空白试验的三氯甲
13、烧萃取液做参比，用分光光度计于波长650nm测定试祥三氯甲烧萃取液的吸光度。将测得试样吸光度与标准曲线比较，得到相应表面活性剂的量，以毫克每升(mg/L)表示。B1 硫氨酸钻分光光度法附录B非离子表面活性剂的定量(补充件)硫氟酸钻分光光度法适用于聚乙氧基化烧基酸、聚乙氧摹化脂肪醇、聚乙氧基化脂肪酸醋、山梨糖醇脂肪酸酶含量的测定。B1.1 方法概要非离子表面活性剂与硫氨酸钻所形成的络合物用苯萃取，然后用分光光度法定量非离子表面活性剂。B1.2 试剂分析中只使用认可的分析纯试剂和蒸馆水或纯度相当的水。B 1. 2. 1 硫氟酸钻镀溶液将620g硫氟酸镀(NH，CNS)和280g硝酸钻(CO(N3)
14、26H，)溶于少许水中，再稀释歪1L，然后用30mL苯萃取二次后备用。B1. 2. 2苯(GB690) B1. 2. 3 氯化销(G81266) B1. 2. 4 非离子表面活性剂标准溶液称取相当于1g非离子表面活性剂(100%)的参照物(4.8)，准确至1mg，用水溶解转移至1L容量瓶中，稀释至刻度，该溶液非离子表面活性剂浓度为1mg/mL。移取10.0mL上述溶液于1L容量瓶巾，用水稀释到刻度，混匀，所得稀择液非离子表面活性剂浓度为0.01mg/mLo B 3 仪器普通试验室仪器和F列仪器B1. 3. 1 紫外分光光度计，具有10mm石英比色池，波长322nm精确测量性能。B1. 3. 2
15、 离心机，转速10004 000 r /mino B1.4 标准曲线的绘制取一系列含有04000用非离子表面活性剂的整分份标准溶液(81.2. 4)作为试验溶液于250mL 分液漏斗中。加水至总量100mL，然后按81.5规定程序萃取和测定吸光度，绘制非离子表面活性剂含量(mg/L)与吸光度标准曲线。B1. 5 试样中非离子表面活性剂含量的测定准确移取适量体积的(6.7)试样溶液于250mL分液漏斗中，加水至总量100mL(应含:11离子麦丽活性剂。3000g)，再加入15mL硫氨酸钻镀溶液(81.2. 1)和35.5日氯化销，充分振荡1min，然后准确加入25mL苯，再振荡1min，静止15
16、min，弃掉水层，将苯放入试管，离心脱水10min (转速2000 r/mi时，尔后移入10mm石英比色池中，用空白试验的苯萃取液做参比，用紫外分光光度计r波长322nm测定试样苯萃取液的吸光度。将测得的试样吸光度与标准曲线比较，得到相应非离子表面活性剂的量，以毫克每升(mg/L)表水。注，()阴离于表面活性剂及聚乙二醇的存在，会影响分析结果的准确度，应于先分离除去.313 GB/T 15818-1995 阴离于表面活性剂的分离参见GB/T13173.3，非离子表面活性剂与聚乙二醉分离参见GB5560. B2 泡沫体积法本方法适用于脂肪航二乙醇胶类非离子表面活性剂含量的测定。B2.1 方法概要
17、本方法是将试样溶液，在一定条件下振荡，根据生成的泡沫体积定量非离子表面活性剂。B2.2 试剂基础培养基溶液(6.Z)。B2.3 仪器具塞量筒100mL，分度值1mL。B2.4 标准曲线绘制用培养基溶液将待试月栓院二乙蹲胶非离子表面活性剂配制成1，3，5.7，10mg/L标准溶液，然后各取50mL按BZ.5规定程序测定泡沫体积，同时做空白试验。标准溶液的泡沫体积减去空白试验的泡沫体积，得到净泡沫体积，绘制浓度(mg/L)与净泡沫体积的标准曲线。B2.5 非离子表面活性剂含量的定量将50mL试样溶液(6.7)放入100mL具塞最筒中，用力上下振摇50次每秒约2次).静宜308后，观测净泡沫体积，重复上述操作，取二次测定结果的平均值。将测得的净泡沫体积查标准曲线，得相应月桂院二乙醇胶表面活性剂样品溶液的浓度(mg/L)。注g本方法适用的测定浓度为10mg/L以内.实验时应注意操作的致性。附加说明:本标准由中国轻工业总会提出。本标准由全国表面活性剂洗涤用品标准化中心归口。本标准由天津市轻工业化学研究所负责起草.本标准主要起草入吴宝光、程馨、李熙云。本标准等效采用日本工业标准JISK33631990合成洗涤剂生物降解度试验方法)，采用时作了编辑性修改。314
