1、ICS 13.060 C 51 道2中华人民共和国国家标准GB/T 16125-2012 代替GBjT16125-1995 大型渥急性毒性实验方法Method for acute toxicity test of daphnia magna straus (ISO 6341-1996 Water quality-Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus(Cladocera，Crustacea)一Acu te toxici ty tes t ,NEQ) . 2012-11-20发布2013-05
2、-01实施阳/归中华人民共和国卫生部峪宁中国国家标准化管理委员会.020%，应以测试浓度结果为准。9.4 实验开始和结束时，对照和处理组的实验用液pH变化范围不超过1.5;实验前的培养温度应与实验温度一致，实验可在18.C-22 .C下进行，但同次实验温度的变化不超过:.i:1 .C。实验应在没有对大型搔有害的气体、粉尘的大气条件下进行。实验结束时，所有对照组和实验组溶解氧浓度应大于或等于2mg/L。实验在自然光照(避免阳光直射)或光照周期(光暗比)为16: 8，光照强度10001x。9.5 实验期间，应保持实验室条件正常，若出现停电、停水等情况而影响实验的，应及时停止实验，待实验室条件恢复正
3、常后重新进行实验。3 GB/T 16125-2012 10 数据与报告10. 1 数据10. 1. 1 结果的计算计算24h和48h对照组和各处理组实验搔活动受抑制数及百分率。以24h和48h抑制百分率与受试物浓度做剂量-效应曲线，选择合适的统计方法(如概率单位法或寇氏修正法)计算24h ECso和48 h ECso及其95%的置信区间。10. 1.2 结果的表示以24h ECso或48h ECso表示受试物质在相应时间内对大型渥运动能力抑制的程度。当浓度间距过近仍不能获得足够数据时，可采用使100%大型渥活动受抑制(包括死亡)的最低浓度和大型活活动不受抑制(包括死亡)的最高浓度来表示毒性影响
4、的结果。检测化学物质样品时，以mg/L表示，计算结果保留3位有效数字。检测废水样品、固体废弃物或水中沉积物浸出液时，以百分数或mL/L表示，计算结果保留3位有效数字。10.2 实验报告4 实验报告要求包括以下几个方面:一一实验用涯的种名、来源、数目、渥龄、饵料、重锚酸饵的24h ECso ; 对照组是否发生死亡;实验条件下大型洼的任何不正常行为、中毒症状;受试物的名称、化学性质、来源、样品的保存方法、保存时间及前处理方法;实验环境条件，实验用稀释水的性质，如水温、pH、溶解氧、电导率等情况;一一实验结果、数据处理、结论;一一方法依据及参考文献。GB/T 16125一2012附录A(资料性附录)
5、大型渣的培养繁殖方法A.1 实验洼的选育实验用大型渥(Dahniamagna Straus)可以从其他实验室己有的纯培养系中挑取引种，也可以从野外采集。野外采集的搔要经分离、纯化，在显微镜下鉴定确认为大型渥后，选择体大、健康的母体数个，用50mL小烧杯单个培养。选择繁殖量最大的一代为母涯，单克隆化，使之成为纯品系。A.2 饵料雌性的大型渥可以在20.C生存4个月之久。本方法推荐用实验室培养的斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)为大型洼的饵料。斜生栅藻的培养方法见附录B。A.3 窑器单个培养母涯可用50mL小烧杯，繁殖培养用2000 mL大烧杯，储备培养用30cmX30 cm圆玻璃
6、缸，或类似大小的水族箱。A.4 培养方法在1L2 L的圆玻璃缸或烧杯中，加入500mL 1 000 mL培育水，加入10个20个大型涯，投喂新鲜栅藻藻液，使藻浓度为6X 106个/mL8X106个/mL最佳，在室内自然光照条件下进行培养，避免阳光直射，培养温度15.C25 .C ，pH值为7.5士0.5，溶解氧2mg/L以上，每周全换培养液1次2次。A.5 实验渣的分离选择怀卵量高的母渥10个20个，投喂充足的饵料，在实验前24h用孔径为1mm的筛子将幼蚤滤去，在实验前6h12 h进行第二次过筛，得到出生6h24 h的幼蚤。5 GB/T 16125一2012附录B(资料性附录)斜生栅藻的培养技
7、术B.1 培养基斜生栅藻的培养可以采用各种适用的培养基，本标准推荐用水生4号培养基。培养基成分(配1000 mL)如下:硫酸镀(NH4)2S040.200g 过磷酸钙Ca(H2P04)2 H20饱和液1.000 mL 硫酸镜(MgS04 H20) 0.080 g 碳酸氢铀(NaHC03)O. 100 g 氯化饵(KCl)O. 025 g B.2 斜生栅藻的培养用1000mL锥形瓶，装300mL400 mL培养基，或者用3000mL锥形瓶装1000mL培养液，接种藻种使成淡绿色。瓶口加盖松软棉团或透气的瓶塞以防污染。在温度15.C25 .C、光照强度3 000 lx4 000 lx、光照时间6h
8、10 h的条件下连续静止培养，避免阳光直射。可采用40W日光灯进行人工光照，灯源离培养容器的距离约0.5m。培养好的深绿色的藻液可作为藻种进行扩大培养，也可经离心浓缩，或自然沉淀浓缩制成浓缩液，低温保藏备用。要经常对藻液进行镜检，检查是否受到其他杂藻类、纤毛虫和轮虫等动物的污染。藻液要经常转接，以防止老化。转接的时间视藻液生长的情况而定，一般每周1次2次，藻液变深绿色即要转接。老化的藻液在显微镜下可明显见到聚集成团的藻群、色素变黄，摇动振荡后，仍出现大量沉淀。B.3 斜生栅藻的扩大培养为获得培养大型涯的足够饵料，可在实验室内进行斜生栅藻的扩大培养。扩大培养采用30cmX 30 cm的圆玻璃缸，
9、或类似大小的水族箱。在玻璃缸中加入培养好的斜生栅藻液(B.2)，用经自然曝气的自来水稀释成淡绿色。扩大培养中不加任何营养盐。扩大培养的栅藻液可直接喂大型渣。6 -, 也.蜘. NFON-mNFUFH阁。国华人民共和国家标准大型渣急性毒性实验方法GB/T 16125-2012 中1 . a 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销句悔印张o.75 字数13千字2013年4月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2013年4月第一版* 16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价书号:155066. 1-46301 GB/T 16125-2012 打印日期:2013年4月24日F002
