1、ICS 67.050 X 04 中华人民:H工_;、和国国家标准GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酷丙曝、氯丙曝、服睫醇、丙酷二甲氨基丙盼日塞曝、甲苯日墨E秦、阿扎眼隆、阿扎眼醇、咔瞌心安残留量的测定液相色谱田串联质谱法Method for determination of acetopromaizine, chlorpromazi肢，haloperidol, propionylpromazine, xylazine , azaperone, azaperol and carazolol residues in porcine kidney and muscIe tissues
2、- LC-MS-MS method 2006-12-31发布中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2007圄03-01实施发布目。昌本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局归口。GBjT 20763-2006 本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、宋文斌、董振霖、李一尘、李军、赵守成、贾新。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围猪肾和肌肉组织中乙酷丙曝、氯丙曝、氟服睫醇、丙酷二甲氨基丙盼喔曝、甲苯唾曝、阿
3、扎眼隆、阿扎眼醇、咔略心安残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 20763-2006 本标准规定了猪肾和肌肉组织中乙酷丙嗦、氯丙嗦、氟服脆醇、丙酷二甲氨基丙吩I靡嗦、甲苯唾嗦、阿扎隆及其代谢物阿扎眼醇和-阻断剂咔瞠心安残留量的模相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肾和肌肉组织中乙眈丙嚓、氯丙嗦、氟昵睫醇、丙酷二甲氨基丙吩囔嗦、甲苯唾嗦、阿扎眼隆、阿扎喊醇、咔瞠心安残留量的测定。本标准的方法检出限:猪肾和肌肉组织中乙酷丙嗦、氯丙嗦、丙酷二甲氨基丙盼唾蝶、咔哇心安均为0.5g/烛，甲苯唾曝为O.25g/峙，阿扎赈隆为O.2g/kg，阿扎眼醇为O.15问/kg，氟喋院薛为O. 1g/kg.
4、2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379. 1 测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义CGB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT) GB/T 6379. 2 测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379. 2-2004 , ISO
5、 5725-2:1994 , IDT) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法CGB/T6682-1992 , neq ISO 3696: 1987) 3 原理试样中残留的六种镇定剂及其代谢产物在碱性条件下用特丁基甲酷提取，并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液(pH=3)，使镇定剂被提取到缓冲溶被中，并用特丁基甲酷净化缓冲溶液，改变缓冲榕搜为碱性，将镇定剂反提取到特丁基甲酷中，被缩，定容。供被相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 乙腊t色谱纯。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 元水乙醇:色谱纯。4.4
6、盐酸t优级纯。1 GB/T 20763-2006 4.5 特丁基甲醋。4.6 氢氧化铀。4. 7 氢氧化铀溶液:5mo1/L。称取50.0g氢氧化铀(4.6)用水槽解，定容到250mL 4.8 磷酸二氢御。4.9 磷酸二氢御榕液:1mol/L，pH=3，称取68.045g磷酸二氢梆(4.8)用水榕解，用盐酸(4.4)将梅攘的pH值调至3.0，定容到500mL。4. 10 甲酸钱。4. 11 甲酸:色谱纯。4. 12 甲酸锻缓冲液:0.1mol/L , 调到4.0，定容至1000 mL。4. 13 甲酸锻缓冲液:0.014. 14 流动相A:0.014. 15 流动相B:乙脯4. 16 流动相C
7、:甲4. 17 混合流动相z4. 18 六种镇定剂4. 18. 1 乙酷丙嗦4. 18. 2 阿扎眼隆4. 18. 3 咔瞠心安4. 18. 4 氯丙嗦4. 18. 5 氟瞧瞧醇4. 18. 6 丙酷二甲4. 18. 7 甲苯嚷嚷4. 18. 8 阿扎眼醇，4. 19 六种镇定剂及4. 19. 1 乙酷丙嗦、阿扎榕被:0.10mg/mL。称取0叫叫标准酬。地问OC_40C条件下4. 19. 2 阿扎眼醇标准储备踏破:1. 容量瓶中，用无水乙醇(4.的定容至刻度，40C条件下贮存。每年配制一次。4.20 六种镇定剂及其代谢物和自-阻断剂泪合标准储备梅液挥军解，用甲酸(4.11)将pH值、甲苯嚷嚷
8、标准储备自事标准液(4.18.8)于10mL 步标准储备掖。储备破避光在20C_吸取适量的标准储备溶液(4.19.1和4.19.2)，用乙腊配制成棍合标准储备溶蔽。在20C,._, 4 oC条件下贮存。4.21 六种镇定剂及其代谢物和严阻断剂棍合标准工作溶被根据每种镇定剂及其代谢物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同被度(ng/mL)的棍合标准工作榕醒。在20C40C条件下避光贮存。注:称取标准物的质量是按纯度和含盐量修正过的质量。2 5 仪器5. 1 液相色谱-串联四极杆质谱仪t配有电喷雾的离子源。5.2 电子天平:感量0.1mg和0.1g. 5.3 离心机:最大转速为10000
9、r/min. GB/T 20763-2006 5.4 离心管:锥形底玻璃离心管，15mL和10mL具塞;锥形底聚丙烯离心管，50mL，具螺旋盖。5.5 过滤器:聚四氟乙烯膜过滤器:O. 2mX13 mm; 尼龙膜过滤器:O. 2mX47 mm。5.6 液体分配器:1 mL- 10 mL 5. 7 微量移吸器:10L1005.8 流动相过滤装置。5.9 氮气浓缩仪。5. 10 高速涡流氓5. 11 振荡器。5. 12 食物调理机5. 13 一次性移5. 14 5. 15 超声波仪。5. 16 一次性注5. 17 试样瓶:2. D 猪肾要去除脂样，将制备好的试样6.2 试样保存将试样置于一18.C
10、7 测定步骤7. 1 提取0.5 kg作为试称取试样2.00g(精确到O.01 g)6)吼翻蜘断dJH人200L乙腊进行涡流混合，I昆合后加入400L5 mol/L氢氧化铀熔液，并进行涡流氓合30趴在(80士5).C水陆中放置1h。在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流氓合。1h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12mL特丁基甲膛，置于振荡器上高速振荡15min，离心15min(转速为4000 r/min).吸出上清被i定量将特定基甲酷转移到干净的15mL的玻璃离心管内，待净化。7.2.净化在上述15mL离心管中加入1mol/L磷酸二氢梆榕液(pH=3)3mL，振荡10min，离心10m
11、in (4 000 r/min)。将特丁基甲酷层吸出弃去。在磷酸盐榕液中加人2mL特丁基甲酶，振荡5min，离心5 minC4 000 r/min)，吸出特丁基甲脏层，弃去。然后再在磷酸盐缓冲播液中加入2mL特丁基甲酷重GBjT 20763一2006复上述步骤。加入1mL 5 mol/L氢氧化纳溶被摇匀后加入10mL特丁基甲酶，振荡15min，离心5 minC4 000 r/町的。定量吸取特丁基甲酷转移到一个干净的10mL的离心管中。在40C条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000L流动相梅液(4.17)，进行涡流、混合，超声处理10 min。用0.2mX13mm的聚四氟乙烯注
12、射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中，供被相色谱-串联质谱测定。7.3 色i营测定7. 3. 1 液相色谱条件a) 色谱柱:Inertsil ODS-3 , 5m，150 mmX 2.1 mm(内径)，或相当者;b) 柱温:35 C ; c) 进样量.20L;d) 色谱柱总流量.200L/mi町的流动相及梯度，见表10步骤运行时间/min。0.00 1 4.00 2 9.00 3 25.00 4 28.00 5 30.00 6 60.00 7.3.2 质i曹条件a) 离子惊:电喷雾离子掘;b) 扫描方式z正离子扫描;c) 检测方式t多反应检测(MRM); d) 电喷雾电压(I曰:5 000
13、 V; 的雾化气压力(CASl):482. 6 kPa; f) 气帘气压力(CUR):68.9 kPa; 表1流动相及梯度流动相A/C%)70 70 40 35 20 70 70 g) 辅助气压力(CAS2): 482. 6 kPa; h) 离子拥植度(TEM): 700C ; i) 接口加热:ON;流动相B/C%)15 15 15 15 15 30 15 流动相c/C%)15 15 45 50 50 15 15 j) 定性离子对、定量离子对、采集时间(Dwell)、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)、人同电压(EP)及碰撞室出口电压(CXP)，见表2，4 表2六种镇定荆及其代谢产物和萨阻断
14、剂的质谱参勤镇定剂以及定性离子对/代谢物名称a盯lU乙酌丙嗦327.40/58.20 acetopromalzme 327.40/86.20 氯丙嚓319.30/58.20 chlorpromazine 319;30/86.20 氟P呢蹲376.40/165.40 haloperidol 376.40/122.90 丙耽二甲氨341. 20/58. 20 propionylpromazin 341. 20/86. 30 甲苯唾嚓221. 30/90. 10 xylazine 22 1. 30/164. 40 阿于LIJ!R隆328. 40/121. 0。azaperone 328.4/147.
15、10 330. 30/121. 0。阿扎1J!Ri事330.30/149.10 azaperol 330.30/312.20 咔盹心安299.50/116.20 carazolol 299.50/222.40 7.3.3 液相色谐，串联质谱测定7. 3. 3. 1 定性测定定量离子对/采集时间/去簇电压/碰撞气amu 口lSV 能量IV327.40/58.20 200 61. 00 68.00 327.40/86.20 200 61. 00 68.00 319.30/58.20 200 60.00 66. 00 319.30/86.20 200 60.00 30. 00 376.40/165.
16、40 200 70.00 35. 00 376.40/122.90 200 70.00 57. 00 34 1. 20/58. 20 200 64.00 59. 80 341. 20/86. 30 200 64.00 30.00 221. 30/90. 10 200 85.00 33. 00 22 1. 30/164.40 200 85.00 38.00 328. 40/121. 00 200 60.00 30.00 328.40/147.10 200 60.00 30.00 330. 30/121. 00 200 60.00 35.00 330. 30;149. 10 200 60.00 4
17、0.00 330.30/312.20 200 60.00 25.00 299. 50/116. 20 200 83.00 30.00 299.50/222.40 200 83.00 30. 00 GBjT 20763-2006 人口电压/出口电压/V V 5.00 10.00 5.00 15.60 10.00 10.00 10.00 7.00 11. 00 11. 00 11. 00 11. 00 10.60 9.70 10.60 15.00 11. 00 8.00 11. 00 13.00 11.00 10.00 11. 00 10.00 11. 00 12.00 11.00 12.00 1
18、1. 00 10.00 11. 00 11. 00 11. 00 6.00 每种被测组分选择l个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质和内标物的保留时间之比，也就是相对保留时间，与棍合基质标准校准榕液中对应的相对保留时间偏差在士2.5%之内;且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与陆度接近的?昆合基质标准校准榕液谱圈中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子卒度的最大允许偏差% 相对离子丰度50 2050 1020 1O20 允许的最大偏差土20士25土30士507.3.3.2 定量测定用?昆合标准榕
19、愤(4.21)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作梅液放度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品榕掖中镇定剂及其代谢产物和冉阻断剂的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述的色谱条件和质谱条件下，六种镇定剂及其代谢产物和阻断剂的参考保留时间见表40六种慎定剂及其代谢产物和阻断剂的标准总离子流图见图A.l.六种镇定剂及其代谢产物和萨阻断剂的陈加陆度及其平均回收率的试验数据参见表B.1o5 GBjT 20763-2006 表4六种镇定荆及其代谢物和萨阻断剂参考保留时间川一川-M镇定剂及其代谢产物保留时间/min和萨阻断剂氟q股暖蹲15.87 乙酷丙嚓16.55 丙除二印氨基丙吩
20、喔嚓18.82 氯丙嚓19.72 镇定剂及其代谢产物和-阻断剂甲苯嚷嚷阿扎牒醇咔略心安阿扎眼隆7.4 平行试验按照以上步骤，对同一试样7.5 回收率试验空白样品中添加标准8 结果计算保留时间/min5.09 V一一样品榕m一一样注:1)计算:式中:Cng/mL) ; 9 精密度本标准的精密值是以95%的可信9. 1 重复性在重复性条件下，及其代谢物的含量范围及表5猪肾组织中六性和再现性的镇定剂及其代谢含量范围/物和萨阻断剂乙酷丙嚓O. 7504. 800 氯两嗦O. 7504. 800 氟q辰破醇O. 1500. 960 丙雕二甲氨基丙盼瑾嚓|O. 7504. 800 甲苯嚓嚓O. 3752.
21、 400 阿扎眼隆O. 300 1. 920 阿扎ul醇O. 2251. 440 咔腔心安O. 750-4. 800 注.m为两次测定结果的算术平均值。6 表50代谢物和萨阻断荆的再现性限R O. 245 6 IgR=O. 954 91gm十0.0396 R=O. 438 4m+0. 122 4 IgR=O. 970 21gm-0. 213 7 R=0.482 1m+0. 004 8 R= 0.4150刑0.0020 R=O. 454 7m-0. 075 6 19R=O. 946 71g;恨一0.4845 IgR= 1. 133 21gm一0.4501 nUAU Fb-nu009bqtou4
22、7-M560比0。，-Ado。同U哼ttFa-00000.o nL一一队一队一队一一队一一加一十一-一一-m+m-K-m-m-m-km au】Qd-口UF。bE4&-Ruqa穹u-9b-nu-quF14-1iqu叮J4-au4-qd-nOA吐4-qd-qu-qu-A咬一qu-句，Qn-n卢nnnu-寸I-nu-一一一一一一一一一一-一一一一r-rTT-r俨-K-f GB/T 20763-2006 如果差值超过重复性r，应舍弃试验结果井重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在线性条件下，获得的两次拍立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，猪肾组织中六种镇定剂及其代谢物的含量范围及再现性方程见表
23、L7 GB/T 20763-2006 附景A(资料性附录)标准物质总离子流圄六种镇定剂及其代谢物和严阻断剂标准物质总离子流圈，见图A.10 1. 24e6 1. 20e6 1. 15e6 1. 10e6 1. 05e6 l. 00e6 9.50e5 9.00e5 8.50e5, 8.00e5 7.50e5 7.00e5 6.50e5 6.00e5 5.50e5 5.。但54.50e5 4.00e5 3.50e5 3.00e5 2.50e5 2.00e5 1. 50e5 1. OOe5 5.00e4 O. OO 1-一甲苯囔嚓5.09min; 2-阿扎吸醇9.17min; 3-一-咔随心安1l.
24、33 min; 4-一阿扎哝隆12.99 rnin; 1 5.09 2 9.17 3 11.33 15.87 4 12.99 5 6 16.55. _1 18.82 8 19.12 飞kl飞H._I飞飞5 5一一氟赈院醇15.87min; 6一乙散丙嗦16.55min; 20 7一一丙酷二甲氨基丙吩嚷嚷18.82min; E一一氯丙嚓19.72min. 25 t!mn 圄A.1 六种镇定荆及其代谢物和萨阻断荆标准物质总离子流固8 附录B(资料性附录)回收率GB/T 20763-2006 六种镇定剂及其代谢物和-阻断剂添加被度和平均回收率数据，见表B.l。表B.1 六种镇定荆及其代谢物和萨阻断荆
25、添加激度和平均回收率数据镇定剂以及添加浓度/猪肾中镇定剂和萨阻断剂猪肉中镇定剂和萨阻断剂代谢物名称(g/kg) 平均回收率1(%)平均阻收率/(%). 0.750 101. 0 97.2 1. 500 78.7 94. 9 乙殷商嚓3.000 85.2 84. 9 4.800 86. 7 92.6 O. 750 99.9 99. 5 1. 500 80.6 96.9 氯丙喋3.000 93.2 94. 1 4.800 91. 7 97.5 O. 150 81. 9 100.0 。.30083. 7 99.4 氟用E院醇0.600 98.9 101. 7 0.960 91. 9 88.4 O.
26、750 101. 2 102. 4 丙酷二甲氨1. 500 81. 5 96.8 基丙盼囔嚓3.000 88.0 83.4 4.800 85. 1 92. 7 O. 375 87.0 94. 8 O. 750 95.5 89.4 甲苯唾嚓1. 500 98.0 98. 2 2.400 85. 7 102.3 0.300 82.2 97.0 O. 600 93.6 101. 1 阿扎P)民隆1. 200 103.2 10.0 1. 920 99.6 91. 6 0.225 88.5 98. 7 0.450 91. 9 98.2 阿扎喋醇95.8 96. 7 O. 900 1. 440 102.4
27、 93. 7 O. 750 95.5 105.8 1. 500 83.3 70. 1 咔随心安3.000 102. 1 101. 6 4.800 97.7 99.2 9 CON-的hONVMh阁。华人民共和国家标准猪肾和肌肉组织中Z酷芮障、氯丙障、氟眼眶醇、丙酷二甲氨基丙盼嚷嚷、甲苯唾睡、阿扎眼睡、阿扎眼醇、咔瞌心安残留置的测定液相色i曾串联质谱法GB/T 20763-2006 国白於中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销4峰印张1字数18千字2007年3月第一次印刷开本880X12301/16 2007年3月第一版定价16.00元4峰书号，155066 1-28929 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533
