1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20764-2006 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱紫外检测法Method for the determination of oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline, and doxycycline residues in edible animal muscles LC-UV detection method 2006回12-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局也古中国国家标准化管理委员会也叩GB/T
2、20764-2006 目。自本标准修改采用AOAC标准995.09(可食动物组织中土毒素、四环素、金霉素残留量测定一二擅相色谱法)，修订的主要内容是=一-C18固相萃取柱改为OassHLB固相萃取柱;一一淋洗、破由甲醇改为乙酸乙醋;一一-增加了提酸型阳离子交换桂净化;一一一增加了测定品种。本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、曹彦忠、石玉秋、张进杰、范春林、李学民、刘永明、贾光群。本标准系首次发布的国家标准。I 1
3、范围可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定夜相色谱m紫外检测法GB/T 20764一2006本标准规定了牛肉、羊肉、猪、金毒素、强力霉素残留量液相色i普-紫外检测法。本标准适用于牛肉、本标准的方法检出2 规范性引用文件下列文件中的修改单(不包是否可使用这(GB/T 6379. GB/T 63 性与再现性的3 原理用O.1 素残留，色谱紫外检测器4 试剂和材料除另有说明外，所4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 乙腊:色谱纯。4. 3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 磷酸氢二铀:优级纯。4.5 拧攘酸(C6Hs 07 H20)。析纯，水为GB/T6682规定4.6 乙二股四乙酸二铀(Na
4、2EDTA.2H20)。4. 7 草酸。、强力毒素残留量的测定。!用文件，其随后所有成协议的各方研究准。分=总则与定义准测量方法重复: 1987) 物肌肉中囚环素族抗生阳蔚子交换柱净化，液相4.8 磷酸氯二铀潜液:0.2 mol/L称取28.41g磷酸氧工铀(4.4) ，用水榕解，定容至1000 mL。4.9 拧攘酸溶被:O. 1 mol/L。称取21.01 g拧模酸(4.5) ，用水梅解，定容至1000 mL 4. 10 Mcllvaine缓冲梅液:将1000 mL O. 1 mol/L拧撵酸溶液(4.9)与625mL O. 2 mol!L磷酸氢二铀梅液(4.8)混合，必要时用NaOH或HC
5、l调pH=4.0士0.0504.11 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶被:0.1 mol!L。称取60.5 g乙二胶囚乙酸二铀(4.6)放人1625 mL G/T 20764-2006 Mcllvaine缓冲榕液(4.10)中，使其、溶解，摇匀。4. 12 甲醇+水0+19):量取5mL甲醇(4.1)与95mL水?昆合。4. 13 流动相:乙腊+甲醇十0.01mol/L草酸榕液(2+1十7)。4. 14 土毒素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质:纯度二三95%。4. 15 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备梅液:0.1mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环索、金霉素、强力霉素标准
6、物质(4.14)，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备蔽。储备被于一18.C贮存。4. 16 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素棍合标准工作溶液:根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素稀释成5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL不同浓度的氓合标准工作潜液，昆合标准工作梅液当天配制。4. 17 Oass HLB回相革取柱或相当者:500mg , 6 mL.使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。4. 18 阳离子交换柱:援酸型，500mg ,3 mL。使用前用5mL乙酸乙醋预处理，保持柱体湿润。5 仪器5. 1 液相色谱仪:
7、配有紫外检测器。5.2 分析天平:感量0.1mg , O. 01 g。5.3 液体混匀器。5. 4 回相萃取装置。5.5 贮破器:50mL。5.6 高速冷冻离心机:最大转速13000 r/mino 5. 7 刻度样品管:5mL，精度为0.1mL。5.8 真空泵:真空度应达到80kPa。5.9 振蔼器。5. 10 平底烧瓶:100 mL。5. 11 pH计:测量精度士0.0206 试样的制备与保存6. 1 试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，t昆匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6
8、.2 试样保存将试样于一180C冷冻保存。7 测定步骤7. 1 提取称取6g试样，精确到O.01 g，置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入30mL O. 1 mol/L Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲暗液(pH=4)(4.11)，于液体棍匀器上快速由合1min，再用振荡器振荡10 min，以10000 r/min离心10min，上清液倒入另一离心管中，残渣中再加入20mL缓冲梅液，重复提取一次，合井上清液。7.2 净化将上清液(7.1)倒入下接OasisHLB固相萃取柱(4.17)的贮蔽器中，上清被以:;3mL/mn的流速通过固相萃取柱，待上清液完全流出后，用5mL甲醇十水(4.12
9、)洗柱，弃去全部流出准。在65kPa的GBjT 20764-2006 负压下，础压抽干40min，最后用15mL乙酸乙酣(4.3)洗脱，收集洗脱蔽于100mL平底烧瓶中。将上述洗脱掖在减压情况下以3mL/min的流速通过殷酸型隔离子交换柱(4.18)，待改脱液全部流出后，用5mL甲醇(4.1)搅柱，弃去全部流出班。在65kPa负压下，跟压抽干5min，再用4mL流动相(4.13)洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，定容至4mL，供液相色谱-紫外检测器测定。7.3 测定7. 3. 1 在相色i曹条件a) 色i普柱:Mightsil RP-18 GP, 3m，150 mmX4. 6 mm或相当者;b
10、) 流动相:乙腊十甲醇+0.01mollL草酸恪液(2+1十7); c) 流速:0.5mL/min; d) 柱温:25C ; e) 幢测披长:350且m;f) 进样量:60f-LLo7.3.2 液相色谱测定将混合标准工作带液(4.16)分别进样，以被度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品陪被中土毒素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时闻见表L土毒素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质掖相色谱图参见图A.10 表1土葛素、四环素、金霉素、强力霉素参考保留时间药物名称保留
11、时间/min土霉素4.82 四环素5.42 金霉素10.32 强力霉素15.45 7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除不称取试样外，均撞上述步骤同时完成空白试验E8 结果计算结果按式(1)计算:nu-nu nu-nU AU-anu -4寸llh v-m plu -X . ( 1 ) 式中:X一一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg); c一一从标准工作曲或得到的被测组分榕1夜被度，单位为撒克每毫升(g/mL);V一一试样榕被定容体积，单位为毫升(mL); m一-i式样梅被所代表试样的质量，单位为克(目。注:计算结果应扣除空白值E9 精密度本标
12、准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379. 2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。3 GB/T 20764-2006 9. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，动物肌肉中土霉素、四环索、金霉素、强力霉素含量施围及重复性方程且表20表2含量范围及重复性和再现性方程含量范围/(mg/kg)重复性限r再现性限R0.005-0. 100 nLnd 06 qono nunD AUnu - mm pbgb oo-RU 句d-nLf甲哼，。oonUHU =一v-v bb lgR=O. 932 21gm-0.761 3 19R=O
13、. 950 41gm-O. 8435 lgR=0.891 1lgm-O. 371 2 IgR=O. 876 llgm-O. 3350 0.005-0. 100 O. 005-0. 100 ，而F结果并重新完成两切动物肌肉中土霉素、四 4 附录A(资料性附录)标准物质色i普固土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质被相色谱图，见图A.1 c 0.0050 0.0045 0.0040 0.003 5 0.0030 0.0025 D 0.0020 0.0015 0.0010 0.000 0.000 -0.000 创 2.00 4.00 G/T 20764-2006 14.00 leJJOO 6ft日
14、.005 GBjT 20764一20066 附录B(资料性附录)回收率本方法中土霉素、四环素、金毒素、强力霉素添加放度及其回收率的试验数据，见表B.L表队1土豆毒素、四环素、金霉素、强力.素添加浓度及其回收率的试验数据药物名称添加浓度/Cmg/kg)回收率/C%)0.005 84. 6 0.010 95. 3 土霉素0.050 94.5 O. 100 96. 8 O. 005 75. 1 四环素O. 010 75. 6 0.050 83. 5 o. 106 89. 3 0.005 77.2 金霉素0.010 77.0 O. 050 86. 6 O. 100 90.8 O. 005 82. 2
15、强力霉素O. 010 82. 3 0.050 81. 8 O. 100 84. 9 CON-叮hONFM筒。华人民共和国家标准可食动物肌肉中土霉素、四环素、金.素、强力.素残留噩的测定液相色i蕾紫外检测法GB/T 20764-2006 国白峰中国标准出版社出版发行北京复兴门外主里河北衔16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.75 字数12千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价14.00元* 书号:155066 1-28938 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)6853353320764-2006
