1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20768-2006 鱼和虾中有毒生物肢的测定液相色谱紫外检测法Method for the determination of biogenic amines in fish and shrimp一LC-UV detection method 2006-12-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局也士中国国家标准化管理委员会品叩目。吕本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。GB/T 20768-2006
2、 本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、方晓明、唐毅锋、王传现、陈迪、姜维。本标准系首次发布的国家标准。I G/T 20768-2006 鱼和虾中有毒生物服的测定夜相色谱曲紫外检测法1 范围本标准规定了鱼和虾中苯乙腊、腐腊、本标准适用于鱼和虾中苯乙本标准的方法检出限:腐2 规范性引用文件下列文件中的的修改单(不包括是否可使用这些(GB/T 6379. 1 GB/T 63 性与再现性的GB/T 66 3 原理试样中的定量。4. 1 甲醇:包4.2 乙脯:色谱纯。4. 3 丙酣:色谱纯。/ 法CGB/T析实验室4.4 丹
3、酷氯(dansylchlo 4.5 碳酸氧铀。4.6 高氯酸。4. 7 氢氧化销。4. 8 氢氧化镀:25%28%。4.9 乙酸锻。、酷脏和亚精肢的液相色i普-紫外检测法。和亚精腔的测定。乙胶均为50mg/kgo 的引用文件，其随后所有准测量方法重复相色谱-紫外墟测器检测，外标法4. 10 高氯酸榕液:0.4 mol/L。量取24mL高氯酸(4.肘，用水稀释到1Lo 4. 11 氢氧化铀梅破:2mol/L。称取4.0g氢氧化铀(4.7) ，用水榕解并定容至50mL 4. 12 饱和碳酸氧铀榕蔽。4. 13 丹酷氯溶液:10 mg/mL。称取0.20g丹酷氯(4.4)，用丙酣榕解并定容至20mL
4、a 4. 14标准物质:盐酸苯乙胶CC6 H5 CHz CHz NHz HC1，分子量为157.64，纯度注98%)，盐酸腐腊NH2CCHz)4NHz .2HCl，分子量为161.07，纯度注98%J，盐酸尸股NHz(CHz )sNH2 2日C1，分子G/T 20768-2006 量为175.10，纯度98.0%J，盐酸组胶(C5HgN3.2HCl，分子量为184.07，纯度二三99.0%)，盐酸章鱼脏HOC6H4CH(CH2NHz)OH.HCl，分子量为189.64，纯度二三95% J , 盐酸酣睡(HOCH4CH2CH2NH2 HCl，分子量为173.64，纯度呈99.0%)，盐酸亚精股N
5、H2 CCH2 )JNHCCH2 NI-Iz 3HCl，分子量为254.63，纯度注99.5%J。4. 15 1昆合标准储备梅液:1. 0 mg/mLo分别称取盐酸苯乙腊、盐酸腐腊、盐酸尸腊、盐酸组腊、盐酸章鱼胶、盐酸酷服和盐酸亚精腊(4.14)标准物质13.01 mg、18.29mg、17.15mg、16.57mg、12.38mg、12.66 mg和17.55mg于10mL容量瓶中，用水陪解并定容至刻度，得到游离型泪合标准储备榕掖1. 0 mg/mLo混合标准储备摇撞于4C保存，可使用3个月。4. 16 泪合标准工作梅液:根据需要，取适量撞合标准储备榕液(4.1日，用水稀释至所需放度。4.
6、17 掳膜:O. 45mo 5 仪器5. 1 搜相色谱仪:配有紫外检测器。5.2 液体?昆匀器。5.3 均质机05丘.4 离心机1最高转速50Oo r旷/min5.5 移攘器:1刊OL10OL和10OLl0OOL。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备取样品约500g用组织粉碎机粉碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。6.2 试样的保存将试样于一180C冰箱中保存。7 测定步黯7. 1 提取称取2g试样，精确至O.01 g，置于50mL离心管中，加入10mL 0.4 mol!L高氯酸榕擅(4.10)，均质1min，于3000r/min离心10min，上请被移入25mL棕色容量瓶中。沉淀
7、物用10mL O. 4 mol!L 高氯酸榕液重复提取-次，于3000 r/min离心10min，合并上清液于上述容量瓶中，用0.4mol/L高氯酸播被定容至刻度。7.2 1厅生穆取上述提取被(7. 1) l. 0 mL，放入5mL容量瓶中，依次加入100L2 mol/L氢氧化铀洛被(4.11)、300L饱和碳酸氢铀榕擅(4.12)和2mL 10 mg/mL丹田先氯榕液(4.13)，盖塞，于400C避光反应45mino反应完毕后，加入100L氢氧化锥(4.的，静置30min，用乙腊(4.2)定容至刻度，振荡?昆匀，取适量的梅被通过滤膜(4.17)后，供被相色i普测定。?昆合标准工作榕被衍生1取
8、适量由合标准工作溶液于5mL容量瓶中，加人300L饱和碳酸氧饷瞎掖和2mL 10 mg/mL丹酷氯榕蔽，盖塞，于400C避光反应45min.反应完毕后，加入100L氢氧化镜，静置30min，用乙睛定容到5.00mL，振荡?昆匀，取适量的榕被通过滤膜回7.3 测定7. 3. 1 灌相色i普条件2 a) 色谱柱:Kromasil C18 ，5m，250 mmX4. 6 mm(内径)或相当者cb) 桂温:35 C 0 c) 流动相:A:0.01mol/L乙酸镜;B:水+乙腊(10十90)含0.01mol/L乙酸镜。梯度t脱条件见表10G/T 20768-2006 表1梯度洗脱条件时间/min流速/C
9、mL/min) A:O. 01 mol/L B:水十乙腊(10十90)含0.01mol/L 乙酸镀/C%) 乙酸钱/C%)0.00 1. 0 45 55 25.00 1. 0 5 95 35.00 1. 0 5 95 43.00 1. 0 45 55 45.00 1. 0 45 55 d) 检测波长:254旦moe) 进样量.10L7.3.2 色谱测定用混合标准工作溶液(7.2)分别进样，以标准工作洛液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品榕被中七种生物腊的响应值均应在仪器测定的线性商围内。在上述色谱条件下，七种生物胶标准物质的被相色谱图参见图A.
10、L7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 回收率试验阴性样品中添加标准溶眩，按7.17. 2操作，测定后计算样品添加的回收率。8 结果计算结果按式(1)计算:UXUnu-nU AU-nu v-m FL 一-X . ( 1 ) 式中zX一一试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg); C一一从标准工作曲线得到的试样榕液中被测组分的放度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一试样溶液定容体积，单位为毫升(mL); m一一最终试样榕液所代表的试样质量，单位为克(g)。9 精密度本标准的精密度数据是按照GB/T6379. 1和GB/T6379. 2的规定确定的，重复性和
11、再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 震复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中被测物的含量范围及重复性方程见表2表40表2虾中七种生物膜的含量范围及重复性和再现性方程化合物名称含量范围/Cmg/kg)重复性限f再现性限R苯乙胶50500 r=O. 290 7m R=0.323m 腐胶50500 r=O. 052 9m十8.23 R=O. 181m+0. 954 尸胶50500 r=O. 112 5m十O.802 R=O. 245 8m 3 GB/T 20768-2006 表2C续)化合物名称含量范围!(mg此g)重复性限r再现性限R, 组胶505
12、00 r=O. 148 3m十4.184 R=O. 249 87且意鱼脑50500 r口O.126刑十3.232 R=O. 319 2m 路胶50500 r=O. 222 2m R=O. 373 4m 亚精胶50500 r=O. 152 4m十1.389 R=O. 327 8m 注:m为两次测定结果的算术平均值。一一一一一一化合物名称苯乙胶腐胶尸胶组脐章鱼胶酶胶亚精胶注，m为七抖中一-d鱼一菇一(黄一/-围一范可u.-表含重复性和再现性方程再现性限R化合物名称苯乙胶腐胶尸胶组胶章鱼胶醋胶亚精胶性限RR=O. R=O. 两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性试验条件下，获得的量范围及再现性方
13、程见表2表4，4 超过再现性限R，试样中被测物的含GB/T 20768-2006 附录A(资料性附录)七种生物肢标准物质衍生物色谱图七种生物腊标准物质衍生物的色谱图，见图A.10 0.20 O. 18 O. 16 0.14 0.12 D O. 10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 -0.02 0.00 2. 1一一苯乙胶32一一腐胶;3一一尸胶;4一一组胶;5一一章鱼膀:6一一酶胶;7一一亚精股。7 州WM剧阳地刷刷I/min 5 GB/T 20768-2006 附录B(资料性附录)回收率本方法中七种生物脏器加战度及其平均回收率的试验数据，见表B.l.表B.1 七种生物股添加
14、浓度及其平均困收率的试验数据化合物名称添加浓度/(mg/kg)平均回收率1%)50 91. 4 苯乙胶100 90.5 500 93. 1 50 96.9 腐胶100 93.0 500 94.5 50 92. 9 尸胶100 92.0 500 93.4 50 94. 3 组胶100 92. 6 500 95. 1 50 94. 7 章鱼胶100 93. 7 500 91. 8 50 92. 6 酶胶100 93.8 500 91. 6 50 92.5 亚精胶100 92.4 500 90.9 一一6 CON-hONH筒。华人民共和国家标准鱼和虾中有毒生物脏的测定班相色谐紫外检测法GB/T 20768-2006 国中司k中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销司k印张O.75 字数13千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价14.00元* 书号，155066 1-28939 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)6853353320768-2006
