1、ICS 65120B 46 蝠雷中华人民共和国国家标准GBT 2 1 036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法Determination of dopamine hydrochloride in feedsHigh performance liquid chromatography2007-06-21发布 2007-09-0 1实施丰瞀嬲鬻瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅111前 言CBT 21036-2007本标准是在查阅了国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相色谱法检测饲料中盐酸多巴胺的含量。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工
2、业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：中国农业大学、农业部兽药安全监督检验测试中心(北京)。本标准主要起草人：张素霞、沈建忠、丁双阳、程林丽、江海洋。I饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法GBT 21036-20071范围本标准规定了测定饲料中盐酸多巴胺含量的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。本方法的最低检测限为05 mgkg，最低定量限为17 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方
3、研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法GBT 146991饲料采样3方法原理用盐酸溶液甲醇提取饲料中的盐酸多巴胺，经离心除去固体物及部分杂质后，用酸性氧化铝固相萃取柱净化，洗脱液经滤膜过滤后用高效液相色谱荧光检测器检测。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GBT 6682二级用水规定。41甲醇：色谱纯。42乙酸乙酯：色谱纯。43硫化钠溶液：浓度为325 mgL，称取01 g硫化钠(NazS9HzO)用水溶解，并定容至100 mL。44盐酸溶液：浓度为01 molL，取86
4、mL浓盐酸于l L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。45提取液：取50 mL盐酸溶液(44)与450 mL甲醇混匀。46固相萃取柱活化液：称取45 g氯化钠溶于90 mL水中，再加入10 mL甲醇混匀。47洗脱液：取450 mL盐酸溶液(44)与50 mL甲醇混匀。48酸性甲醇溶液：取250 pL甲酸溶于500 mL甲醇中，混匀。49 002甲酸溶液：取200”L甲酸溶于1 000 mL水中，混匀。410盐酸多巴胺标准贮备液：准确称取盐酸多巴胺标准品(含量大于98)o100 0 g于100 mL容量瓶中，用酸性甲醇溶液(48)溶解定容，配制成浓度为1mgmL的盐酸多巴胺贮备液。412条件下贮藏，
5、有效期三个月。411盐酸多巴胺标准中间液：移取10 mL标准贮备液(410)置于100 mL容量瓶中，用酸性甲醇稀释并定容，配制成浓度为100-gmL的盐酸多巴胺标准中间液。412条件下贮藏，有效期一个月。412盐酸多巴胺标准工作液：分别移取盐酸多巴胺标准中间液(411)0025 mL、0050 mL、0125 mL、0250 mL、125 mL和250 mL于25 mL容量瓶中，用水稀释定容配制成01 pgmL、02 pgmL、0519mL、10 pgmL、50,gmL和100,gmL标准工作液。】GBT 2103620075仪器和设备51实验室常用仪器、设备。52高效液相色谱仪(配有荧光检
6、测器)。53分析天平。54旋涡混合器。55离心机。56酸性氧化铝固相萃取柱500 rag根。6试样制备按GBT 146991规定，取有代表性的样品1 kg，四分法缩减取约200 g，经粉碎，全部过045 Film孔筛，混匀装人磨口瓶中备用。7分析步骤71提取称取一定量的试样(配合饲料2 g，浓缩饲料1 g，预混合饲料1 g，准确至0001 g)置于50 mL离心管中，加入10 mL试样提取液(45)，涡动1 rain，3 500 rmin离心5 min。将上清液转入另一个50 mL离心管中，再分别用5 mL试样提取液重复提取两次，合并三次试样提取液。72配合饲料和浓缩饲料的净化提取后立即将试样
7、提取液置4冰箱中冷却。将酸性氧化铝固相萃取柱用5 mL固相萃取柱活化液(46)活化。从4冰箱中取出试样提取液，全部加于固相萃取柱上，自然流过小柱。用10 mL乙酸乙酯洗涤小柱，吹干。最后用20 mL洗脱液(47)洗脱，保持流速不超过1 mLmin，收集洗脱液，并尽可能吹干小柱。洗脱液经045 pm滤膜过滤后用高效液相色谱分析。73预混台饲料的净化立即向试样提取液中加入硫化钠溶液(43)2 mL，涡动10 s，3 500 rmin离心5 rain。上清液转移至另一离心管中。固相萃取柱净化方法同72。74测定741液相色谱条件色谱柱：cl。柱，长250 mm，内径46 mm，粒径5 ym，或相当者
8、。柱温：室温。流动相：002甲酸溶液(49)与甲醇(41)进行梯度洗脱，梯度洗脱条件详见表1。激发波长：290 nm。发射波长：330 nm。进样体积：10 pL。袭1梯度洗脱条件时间 流速 002甲酸 甲醇mln (mLmin) 0 06 95 59 06 95 511 1 10 9022 1 lO 9025 06 95 530 06 95 5GBr 21036-2007742液相色谱测定分别取适量的标准工作液和试样溶液，按741列出的条件进行液相色谱分析测定。以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应注意调整试样溶液的浓度，使盐酸多巴胺的积分值落在标准曲线的相应范围内，并在试样溶液分析间适当穿插标准工作液，以确保定量的准确性。所得盐酸多巴胺的色谱图见图1。图1 5斗gnil标准溶液色谱图(保留时间35 rain)8结果计算与表述饲料中盐酸多巴胺的含量x，以质量分数(mgkg)表示，按式(1)计算：x一生二! (1)m式中：c试样液中对应的盐酸多巴胺的浓度，单位为微克每毫升(tgmL)；v试样液总体积，单位为毫升(mL)；稀释倍数；m饲料样品质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度同一实验室由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15。
