1、1 CS 7 1. 1 00, 70 Y 42 中华人民共和国国家标准GB/T 24800.1-2009 化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法2009-11-30发布Determination of 9 tetracyclines in cosmetics by high performance 1iquid chromatography method J究飞ki达五iJJ院4i斗冬钊圳巾j只川1二2010-05-01实施中华人民共和和咽国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布GBjT 24800.1-2009 本标准的附录A为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。
2、剧吕本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。本标准负责起草单位:中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。本标准主要起草人:武婷、王超、马强、张庆、席广成、肖海清、李琼、崔俭杰。I G/T 24800.1-2009 寻|本标准中的被测物质是我国化妆品卫生规范规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品应符合化妆品卫生规范对化妆品的一般要求，即在正常及合理且豆豆见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。目前我国尚未规定这些物质的限量越吁苯耘准的制定丁布贺食也妆品中测定这
3、些物质提供检测方法。日1 范围化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法本标准规定了化妆品中九种四本标准适用于皮肤护理类企霉素、美他环素、多2 原理3 试剂和材、环素，纯度不小于为1000 mg/L的标准、丸种四环素类抗生素吼一日1 mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20由EGB/T 24800.1-2009 3.6 0.01 mol/L草酸溶液:称取草酸(CZHZ04 2H2 0) 1. 26 g，精确至0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解后，移入1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得0.01mol/L的草酸溶液。4 仪器4. 1 液相色谱仪，配有二极管阵列
4、检测器。4.2 微量进样器，10L。4.3 超声波清洗器。4.4 离心机，大于5000 r/min o 4. 5 溶剂过滤器和O.45m有机过洁、膜。GB/T 24800.1-2009 4.6 具塞比色管，10mLo 5 测定步骤5. 1 样品处理称取化妆品试样约0.2g，精确flJO. 001 g，于10mL具塞比色管中，加入约8mL甲醇，在超声波清洗器中超声振荡30min，冷却至室温后，加甲醇定容至刻度。取部分溶液放人离心管中，在离心机上于5 000 r/mn离心20min，离心后的上清液经0.45m有机滤膜过滤，滤液供测定用。5.2 测定5.2. 1 色谱条件5.2. 1. 1 色谱柱:
5、Kromasil Cl8柱(250mmX 4.6 mm(内径)，5m，或相当者。5.2.1.2 流动相:A:甲醇与乙腊的混合溶液。十3，V /V) , B:O. 01 mol/L的草酸溶液(3.7)，梯度洗脱条件见表1。表1方法的梯度洗脱条件时间/minA/% B/% 。22 78 3 42 58 6 42 58 12 60 t1 0 5.2. 1.3 流速:1.0mL/ min。5.2.1.4 检测波长:程序可变波长:0-.4.00min为350nm , 4.01 min-.12.00 min为270nm。5.2. 1. 5 柱温:25oc。5. 2. 1. 6 进样量:10Lo 5.2.2
6、 标准工作曲线绘制分别移取一系列浓度为1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L的标准工作溶液，按色谱条件(5.2. 1)进行测定，记录色谱峰面积，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。九种四环素的标准液相色谱图参见附录A的图A.1。5.2.3 试样测定用微量注射器吸取试样溶液(5.1)注入液相色谱仪，按色谱条件(5.2. 1)进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的浓度。样品溶液中的被测物响应值均应在仪器测定的线性范围之内。含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定
7、。5.2.4 定性确认液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出四环素类抗生素的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一致，则可初步确认样品中存在被测四环素类抗生素。必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验。5.3 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。5.4 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。6 结果计算结果按式(1)计算(计算结果应扣除空白值): 2 式中:X，一旦二v-m X。一一样品中被测四环素的质量浓度，单位为毫克每千克(mg/kg);Cj一一标准曲线查得被测阻环素的浓度，单位为毫克每
8、升(mg/L)j V一-一样品稀释后的总体积，单位为毫升(mL); m-一样品质量，单位为克(g)。7 方法检出限与定量限GB/T 24800. 1-2009 . ( 1 ) 甲肢四环素的检出限为25mg/kg，土霉素、四环素、去甲基金霉素的检出限为10mg/kg，金霉素、美他环素、多西环素的检出限为5mg/kg，差向脱水四环素和脱水四环素的检出限为2.5mg/kg。二甲肢四环素的定量限为50mg/kg，士霉索、四环素、去甲基金霉素的定量限为25mg/烛，金霉素、美他环素、多西环素的定量限为10mg/埠，差向脱水四环素和脱水四环素的定量限为5mg/l哩。8 回收率与精宙度在添加浓度5mg/kg
9、-. 500 mg/kg浓度范固内，回收率在85%-110%之间，相对标准偏差小于10%D 9 允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。CON-二。寸NH筒。GB/T 24800. 1-2009 附录(资料性附录)标准物质的液相色谱图A 8mg10-v白mAU 400 。200 600 800 10 8 6 2 1一一二甲胶四环素(3.489min) ; 2一一土霉素(5.450min) ; 3一-四环京(5.805min); 4一一去甲基金霉素(.340 min) j 5一一金霉素(7.047min); 6一一啕美他环素(7.290 rnin); 7一一多西环素(7.712 min) j 8一一差向脱水四环素(7.945min); 9一一一脱水四环素(9.159min)。图A.1。侵权必究* 版权专有九种四环素的标准液相色谱图书号;155066 )-39670 14.00元足价:GB/T 24800. 1-2009 打印日期:2010年2月2F-I F007
