1、ICS 7 1. 100.70 Y 42 中华人民圭七和国国家标准G/T 24800.7-2009 化妆品中马钱子碱和士的宁的测定高效液相色谱法Determination of brucine and strychnine in cosmetics by high perrormance liquid chromatography method 2009-11-30发布中华人民共和国国家质量监督检验检查总局中国国家标准化管理委员会2010-05-01实施发布GB/T 24800.7-2009 本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。目U吕本标准由全国香料香精化妆品标准
2、化技术委员会(SAC/TC257)归口。本标准负责起草单位:中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。本标准主要起草人:马强、肖海清、王超、王星、范敏、朱丽、崔俭杰、李琼。I GB/T 24800.7-2009 51 本标准中的被测物质是我国化妆品卫生规范规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中。如果技术上元法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品应符合化妆品卫生规范对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。H 1 范围化
3、妆品中马钱子碱和士的宁的测定高效液相色谱法本标准规定了化妆品中马钱子碱和士的宁的高效液相色谱测定方法。本标准适用于化妆品中马钱子碱和士的宁的测定。G/T 24800.7-2009 本标准的检出限和定量限t马钱子碱和士的宁的检出限为2.5mg/kg，定量限为8mg/kg 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法CGB/T66
4、82-2008 , ISO 3696: 1987 , MOD) 3 原理试样经溶剂提取，离心过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。4 试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 四氢映喃:色谱纯。4.3 甲酸镀溶液O.0川1mol/L.) :准确称取O.630 6 g甲酸镀于1L容量瓶用甲酸调节pH至3.0后，定容至1L备用。4. 4 甲醇水溶液:准确量取64mL甲醇和36mL水，混匀后备用。4.5 马钱子碱和士的宁标准品:纯度不小于97%。4.6 马钱子碱和士的宁的标准储备液:准确称取马钱子碱和士的宁标准
5、物质各100mg.分别置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度分别为1000g/mL的标准储备液，于1-oc避光保存，可使用三个月。4.7 马钱子碱和士的宁的混合标准储备液:分别准确移取马钱子碱和士的宁的标准储备液各25mL 于50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该溶液中马钱子碱和士的宁的浓度均为500g/mLo5 仪器和设备5. 1 高效液相色谱CHPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5. 2 高效液相色谱-质谱联用CLC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI)。5. 3 分析天平:感量o.000 1 g和0.001g。5. 4 离心机:转速不
6、低于5000 r/min。5. 5 超声波水浴。5.6 具塞比色管:10 mLa 5. 7 具塞塑料离心管:10mL . GB/T 24800.7-2009 5.8 微孔滤膜:0.45m，有机相。5.9 pH 十。6 分析步骤6. 1 样品处理6. 1. 1 膏霜、水剂、香波类样品称取1g(精确至0.001g)试样于10mL具塞比色管中，加甲醇水溶液(4.1-)至刻度，超声提取20 mino取部分溶液转移至10mL具塞如O. 45m微孔滤膜过滤，滤液作为待、懈液。6. 1.2 散粉类样品称取1g(精确至0.0溶液转移至10mL具F1 mL甲醇，超声q心管中，以不低6.2 测定条件高效液相色ta
7、) 色谱柱:b) 流动相20 流速:1.d) 柱温:25lg/mL、5g/mL、10g件浓度由低到高进样测定，g/mL、O.5 fJ.g/mL、作液，按6.2的测定条6.4 测定按6.2的测定条件对待测样液进行测定，:&0待测样液中马钱子碱和士的宁的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。必要时，阳性样品需用液相色谱质谱进行确认试验(参见附录B)。6. 5 空白试验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。7 结果计算结果按式(1)计算，计算结果保留两位小数:(计算结果应扣除空白值)。fJ vxflv- m AU nun-1i-W ( 1 ) 2 GB/T 2480
8、0.7-2009 式中:W一一试样中马钱子碱和士的宁的含量，单位为毫克每千克Cmg/kg); c一-从标准工作曲线上查出的样液中马钱子碱和士的宁的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一样液最终定容体积，单位为升(L); m一二试样的质量，单位为克(g); f一稀释倍数。8 检出限和定量限本标准的检出限和定量限:马，.9 回收率5%之间，相对标准偏差小10 允许差3 G/T 24800.7-2009 mA U 70 60 50 40 30 20 10 。l一一-士的宁;2一二马钱子碱。4 2 3 附录A(资料性附录)标准晶色谱图4 2 5 图A.l士的宁和马钱子幅标准晶色谱图6 7 lHl
9、 GB/T 24800.7-2009 B.l 液相色谱条件附录B(资料性附录)确认试验a) 色谱柱:SunFire Cl8 ，5m， 150 mmX 2.1 mm(i. d. )，或相当者。b) 流动相:甲酸镀溶液(0.01mol/L) (4.3)-甲醇(64十36，体积比。c) 流速:0.2mL/min o d) 柱温:30 oc 0 e) 进样量:20LoB.2 质i普条件8) 电离方式:电喷雾电离，正离子。b) 毛细管电压:3.0kVcc) 萃取电压:3.0V 0 d) 射频透镜电压:0.3V。e) 离子源温度:120 oc。() 脱溶剂气:氮气，流速600L/hr.温度350oc。g)
10、 锥孔气:氮气，流速50L/hr 0 h) 碰撞气:氢气。i) 扫描模式:多反应监测CMRM)，定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量见表B.10 表B.l马钱子碱和士的宁的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量中文名称英文名称定性离子对/定量离子对/锥孔电压/碰撞气能量/相对丰度允许偏差/(m/z) (m/z) V V % 335/184 35 100 士的宁strychni ne 335/184 55 土20335/156 43 76 395/324 30 100 马钱子碱brucine 395/324 55 士20395/244 35 87 B.3 定性判定按照上述条件测定试
11、样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(变化范围在:i2.5%之内);样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表B.l的规定，则可判断样品中存在马钱子碱或士的宁。士的宁和马钱子碱的选择离子质量色谱图见图B.1。5 GB/T 24800.7-2009 汉1. 00 X 1. 00 二支。1. 00 三支。1. 00 6 2. 00 3.00 4. 00 2.00 3. 00 4. 00 2. 00 3.00 4.00 2. 00 3.00 4. 00 6.06 5.00 6.00 7.00 6. 05 5.00 6.0
12、0 7.00 a)士的宁5.29 S. 00 6. 00 7.00 5. 29 5.00 6.00 7. 00 b)马钱子碱1 : MRM or 2 Channels ES+ 395.2324.2 186 c4 8.00 9.00 10.00 8.00 1: MRJV1 of 2 Channels ES+ 395.2 244.3 188 e4 Timc 9.00 10. 00 2: MRM of 2 Channels ES 1-335. 2 184. 2 5. 24 c4 8.00 .OO 10.00 8. 00 2 : MRM of 2 Channels ES+ 33.5.2 156.2 4
13、.12 e4 Time 9.00 10. 00 图B.l士的宁和马钱子醋的选择离子质量色谱图goN-20寸NH筒。人民共和国家标准化妆品中马钱子暗和士的宁的测定高效液相色谱法GB/丁24800.7.-2009 国华中法中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话;6852394668517548 巾国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数12千字200年I月第一次印刷开本880X12301/16 2010年1月第-版4峰定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号;155066 1-39675 GB/T 24800. 7-2009 打印H期:2010年1月27日F007
