1、ICS 7 1. 100.70 Y 42 和国国家标准11: ./、中华人民GB/T 24800.8-2009 化妆品中甲氨瞟岭的测定高效液相色谱法Determination of methotrexate in cosmetics by high performance liquid chromatography method 2009-11-30发布2010-05-01实施 52 . 中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国国家标准化妆品中甲氨瞟岭的测定高效液相色谱法GB/T 24800.8-2009 * 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街
2、16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X12301/16 印张0.5字数9千字2010年1月第一版2010年1月第一次印刷* 书号:155066 1-39676 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 24800.8-2009 本标准的附录A为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。目。吕本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。本标准负责起草单位:中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香
3、料研究所。本标准主要起草人:王星、武婷、张庆、肖海清、席广成、马强、沈敏、康薇。I GB/T 24800.8-2009 sl 本标准中的被测物质是我国化妆品卫生规范规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品应符合化妆品卫生规范对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。目前我国尚未规定该物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定该物质提供检测方法。JJ 1 范围化妆品中甲氢瞟岭的测定高效液相色谱法本标准规定了化妆品中甲氨瞟岭的测定方法。本标准适用于化妆品中甲氨瞟岭的测定。本标准对
4、于甲氨瞟岭的检出限为1mg/峙，定量限为2.5mg/峙。2 原理GB/T 24800.8-2009 以流动相-甲醇与0.025mol/L磷酸二氢纳(pH5.0) (30+70，v/v)为溶剂，超声提取、离心，0.45m的有机滤膜过滤，溶液注入配有二极管阵列检测器(DAD)的液相色谱仪检测，外标法定量。3 试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯。水为超纯水。3. 1 甲醇:色谱纯。3.2 四氢吱喃:色谱纯。3.3 甲氨瞟岭，纯度不小于97%，CAS编号为:59-05-2 0 3.4 甲氨瞟岭标准储备液:准确称取甲氨瞟岭0.05g，精确到0.0001 g，于50mL烧杯中，加1mL 0.1 mol
5、/L氢氧化铀溶液溶解后移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，即得甲氨瞟岭溶液浓度为500mg/L的标准储备液。储备液在冰箱冷藏保存，可使用两个月。3.5 标准工作溶液:用水将上述标准储备液(3.4)分别配成一系列浓度0.05mg/L、0.1mg/L、1 mg/L、2mg/L、5mg/L, 10 mg/L、20mg/L的标准工作溶液，冰箱冷藏保存，可使用一周。3. 6 O. 1 mol/L的氢氧化销溶液=称取氢氧化铀0.4g，精确到0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解后转移至100mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.1mol/L的氢氧化纳溶液。3.7 O. 025 mol/L的磷酸二
6、氢铀(pH5.0):称取磷酸二氢铀(NaH2P04 2H20) 3. 9 g，精确到0.001 g，于100mL烧杯中，加水溶解转移至1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.025mol/L 的磷酸二氢铀溶液，用。.1mol/L的氢氧化销溶液(3.6)调节pH至5.0。4 仪器4. 1 液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。4.2 微量进样器，10L。4.3 超声波清洗器。4.4 离心机，大于5000 r/min。4.5 溶剂过滤器和0.45m有机过滤膜。4.6 具塞比色管，10rnLo 5 测定步骤5. 1 样品处理称取化妆品试样约0.2g，精确到0.001g，于10mL具塞比色管中，加
7、入8mL流动相(甲醇:GB/T 24800.8-2009 0.025 mol/L磷酸二氢铀(pH5.0)二30十70，v/吵，在超声波清洗器中超声振荡20min，冷却后用流动相稀释至刻度，混匀。取部分溶液放入离心管中，在离心机上于5000 r/min离心20min，离心后的上清液经0.45m有机滤膜过滤，滤液待测定用。对于口红等含蜡质较多的化妆品样品，提取溶剂为四氢吠喃-磷酸二氢铀(0.025mol/L , pH5. 0) (1+l,v/v) ，其他步骤同上。5.2 测定5.2. 1 色谱条件5. 2. 1. 1 色谱柱:C18柱(250mmX4. 6 mm内径，5m)，或相当者;5. 2.
8、1. 2 流动相:甲醇:O. 025 mol/L磷酸二氢锅溶液(pH5.0)，30十70(v/v);5.2. 1. 3 流速:1.0mL/min; 5.2. 1. 4 柱温:25oC; 5.2. 1. 5 检测波长:302nm; 5.2. 1. 6 进样量:10L。5.2.2 标准工作曲线绘制分别移取10L浓度为一系列0.05mg/L、O.1 mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20 mg/L的标准工作溶液，按色谱条件(5.2.1)进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。标准物质色谱图参见附录A的图A.1o5.2.3 试样测定用
9、微量注射器准确吸取10L试样溶液(5.1)注入液相色谱仪，按色谱条件(5.2. 1)进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的甲氨瞟岭的浓度。试样溶液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定。5.2.4 定性确认液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出甲氨瞟岭的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一致，则可初步确认样品中存在甲氨瞟岭。必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验。5.3 平行试验按以上步骤，对同一
10、试样进行平行试验测定。5.4 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。6 结果计算结果按式(1)计算(计算结果应扣除空白值): 式中:X;一旦二Z一z X;一一样品中甲氨瞟岭的质量浓度，单位为毫克每千克(mg/kg); ci 标准曲线查得甲氨瞟岭的浓度，单位为毫克每升(mg/L); Vi 样品稀释后的总体积，单位为毫升(mL);m二一样品质量，单位为克(g)。7 方法检出限与定量限甲氨瞟岭的检出限为1mg/峙，定量限为2.5mg/kg。2 . ( 1 ) 4 GB/T 24800.8-2009 8 回收率与精密度在添加浓度1mg/kg 2. 5 mg/kg浓度范围内，回收率在85% 110%之间，相对标准偏差小于10%。9 允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。G/T 24800.8-2009 附录A(资料性附录)标准物质的液相色谱图mAU oh户。甘1. 5 0.5 。一0.5-1 一1.52 3 1 二甲氨瞟岭(4.37min)。4 5 mm 6 图A.l甲氨瞟岭的标准液相色谱图GB/T 24800.8-2009 打印忖WJ:2010年2月10H版权专有侵权必究* 书号:155066 1-39676 定价:14.00元
