1、ICS 65.020.30 B 43 中华人民主t./飞、道2和国国家标准GB/T 25172-2010 猪常温精液生产与保存技术规范Technical specification for production and preservation of fresh boar semen 2010-09-26发布数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2011-01-01实施发布目。吕本标准的附录B、附录D为规范性附录，附录A、附录C为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。GB/T 25172-2010 本标准起草单位:
2、青岛市畜牧兽医研究所、华南农业大学、北京养猪育种中心、胶南市家畜改良站。本标准主要起草人:戈新、张守全、王建华、马振强、刘长宏、程明、孟庆利。I GB/T 25172-2010 猪常温精液生产与保存技术规范1 范围本标准规定了猪常温精液生产与保存技术规范的精液采集、检查、稀释、分装、保存和运输。本标准适用于猪的常温精液生产与保存。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标
3、准。GB 4789. 2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定NY/T 65 猪饲养标准3 术语和定义3. 1 3.2 3.3 3.4 3.5 下列术语和定义适用于本标准。原精液raw semen 采集后未经稀释的精液。常温精液fresh semen 经稀释后在16.C18 .C下短期保存，仍具有受精能力的精液。精子活力sperm motility 在37.C下呈直线前进运动的精子占总精子数的百分率。精子密度sperm concentration 单位体积精液中的精子数，单位为108个每毫升。精子畸形率abnormal sperm percentage 畸形精子占总精子数的百分率。4 精
4、遭采集4. 1 公猪应具有种用性能，符合国家有关规定。饲养应符合NY/T65的要求。4.2 采精室应设置采精区和安全区。采精区设置假台猪，地面防滑，并保持清洁、安静。4.3 采精前准备4.3. 1 采精员应着洁净工作衣、帽，穿长胶鞋。4.3.2 集精杯(内置元毒塑料袋并覆盖四层纱布或一层精液过滤纸)、载玻片、盖玻片、精液处理器皿和稀释液应预热至37.C。1 GB/T 25172-2010 4.3.3 显微镜载物台恒温板应预热至37.C。精子密度仪使用前应预热。4.4 采精步骤4.4.1 剪去包皮部长毛，清洁体表，擦干水渍。4.4.2 挤净包皮积液，先用0.1%高锚酸饵溶液清洗腹部和包皮，再用温
5、水清洗后擦干。4.4.3 手握法采精时，应一只手戴双层元毒塑料手套，按摩公猪包皮部，待公猪爬跨假台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，握紧龟头，使其不能旋转，顺势将阴茎的S状弯曲延直。另一只手持集精杯，弃去最初射出的少量精液(约5mL)，收集精液至射精完毕。4.5 采精频率成年公猪每周采精两次至三次，青年公猪每周一次至两次。5 精渣检查5.1 精渣处理室应设精液检查、稀释和分装区，温度宜控制在22.C 25 .C，不应太阳光直射或紫外灯照射。配置仪器和用品参见附录A。5.2 原精液晶质原精液品质应符合表1的规定。项外观气味采精量/mL精子活力/%精子密度/(108个/mL)精子畸形率/%细茵茵落数/(
6、CFU/mL)5.3 检测方法5.3.1 外观、气昧目测、鼻嗅。5.3.2 采精量目-表1原精液晶质采用称量法计算采精量(lg相当于1mL)。5.3.3 精子活力指标呈乳白色，均匀一致略带腥味，元异味二三100注70二主118 主三1X 103 取中层精液15L25L，在200倍400倍显微镜下检查。每份精液取样两次，每个样观察三个视野，计算平均值。5.3.4 精子密度采用精子密度仪或可见光分光光度计法测定。应定期用血细胞计数板法校正。5.3.5 精子畸形率采用伊红或姬姆萨染色法检查时，在400倍600倍显微镜下观察左、中、右三个视野中不少于200个精子。也可采用相差显微镜直接观察。每两个月抽
7、检一次。5.3.6 细菌菌落数按GB4789.2规定执行。每两个月抽检一次。2 G/T 25172-2010 5.4 记录填写公猪精液晶质检测登记表，登记表见附录B。6 精液稀释6.1 稀释液配制6.1.1 所用试剂均为分析纯，用双重蒸锢水溶解。配方参见附录Co6. 1. 2 商品稀释剂按说明书使用。不得使用过期或吸潮变色的稀释剂。6. 1. 3 自配稀释液配制后应及时加入抗生素，稀释液的pH为6.47. 2。6.1.4 使用前1h配制，配制后应及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人。6.1.5 剩余稀释液应密封后置于冰箱中冷藏，时间不超过24h。6.2 稀释步骤6.2.1 精液采集后
8、应尽快稀释，放置时间不宜超过15min。6.2.2 采用等温稀释。精液与稀释液温差不得超过1oC，根据精液温度调节稀释液温度，不得反向操作。6.2.3 将稀释液沿杯壁缓慢加入到精液中，轻轻摇动或沿一个方向搅拌，混合均匀。高倍稀释时，先低倍稀释(1: 1)(1 : 2) ,30 s后再加入余下的稀释液。6.2.4 精液稀释后应静置5min再作精子活力检查，活力不低于70%进行分装。6.2.5 稀释后精液每头份剂量80mL 100 mL，精子活力70%以上，含总精子数30X 108个35 X 108个。6.2.6 稀释液总量以体积V计，数值以毫升(mL)表示，按式(1)计算:式中:V j 采精量，
9、单位为毫升(mL);C一一精子密度，单位为108个每毫升(108个/mL);5一一每头份含总精子数，单位为108个;V2一一每头份剂量，单位为毫升(mL)。7 精波分装7. 1 精液分装采用袋装、瓶装或管装。7.2 装精液用的袋、瓶或管应选用对精子元毒害作用且灭菌的一次性塑料制品。7.3 以每80mL100 mL为单位，将精液分装至精液袋、瓶或管中，排出空气后密封。7.4 精液包装应标明产品名称、生产单位、生产日期、批号、品种、耳号和保质期。8 精渣保存. ( 1 ) 8. 1 精液应置于22oC 25 oC下1h2 h后，平放入17oC恒温箱内避光保存;也可用12层15层纱布(或干毛巾)包严
10、直接放人17oC恒温箱内。8.2 保存的精液每隔4h8 h摇动一次并记录，摇动时应轻缓均匀。8.3 稀释液保存的精液应尽快用完，超过保质期的精液不应使用。8.4 每批精液应留样备查。同批号的精液在保质期内应抽样检查并记录，公猪常温精液保存登记表见附录D。精液产品质量见表2。3 GB/T 25172-2010 表2精渡产品质量项目指标精子活力/Yo二三70总精子数/108个30-35 精子畸形率/%18 剂量/mL80-100 一一-一一一一一一9 精液运输9.1 精液应置于16.C18 .C的专用运输箱内避光运输。9.2 运输过程中避免强烈震动和碰撞。4 GB/T 25172-2010 附录A
11、(资料性附录)精液处理室配置仪器和用品表A.1精液处理室配置仪器和用品名称规格(技术参数)用途电子秤3 000 g/l g , 6 000 g/2 g 称量精液、稀释液显微镜40 Xl 600 X 观测精子数、活力和畸形率显微镜恒温板室温至50c (可谓)，工作面温差:o.5 c 载玻片、盖玻片恒温预热精子密度仪50 mill/mLl 400 mill/mL 测定精子密度(任选)可见光分光光度计波长范围350nm820 nm，带宽土5nm 测定精子密度(任选)pH计测量范围0.014.0，精度土0.1测定精液、稀释液的pH精液保存箱17 c士1C 保存精液干燥箱室温+5C250C，波动度土2C
12、 预热器皿和消毒用品培养箱室温十5C60 c 细菌培养电子天平200 g/O. 01 g 称量化学试1f!J(选用)恒温水浴锅双孔或囚孔等温精液与稀释液恒温磁力搅拌器。C99C，容量500皿L稀释液搅拌、加热双重蒸馆水器2 000 mL 2 500 mL 制作双重蒸馆水血球计数板25X16 测定精子密度计数器0999 精子计数微量移液器100L200L 精液取样或稀释微量移液器100Ll 000L 精液取样或稀释量筒1 000 mL士5mL 量取液体三角瓶1000 mL 配制稀释液放水瓶5L 盛放双重蒸馆水烧杯1000 mL、2000mL 精液稀释热封口机袋装精液封口分装架分装精液分装管分装精
13、液培养皿细菌培养载玻片精子活力的测定盖玻片精子活力的测定5 GB/T 25172-2010 表A.1 (续)名称规格(技术参数)用途擦镜纸擦拭显微镜镜头移液枪吸嘴200L 精液取样或稀释稀释粉配制精液稀释液精液袋、瓶或管分装及保存精液温度计。C60c 测量精液、稀释液等温度玻璃棒稀释液配制或精液稀释标签纸精液、稀释液标签6 附录(规范性附录)公猪精液晶质检测登记表B 。因时Nm-JYNllMO-o公猪精渡品质检测登记表精子精子细茵茵稀释液稀释后采精采精品种耳号采精员外观气味采精盐/活力/精子密度/畸形率/落数/精子活力/头份数质检员备注日期时间mL (108个/mL)品名总量/% % (CFU
14、/mL) mL % 表B.l电、3GB/T 25172一2010附录C(资料性附录)常见几种公猪精液稀程液配方表C.1常见几种公猪精液稀释液配方单位为克每升成分配方一配方二配方三配方四保存时间/d3 3 5 5 D-葡萄糖37.15 60. 00 11. 50 11. 50 拧橡酸三纳6.00 3. 70 11. 65 11. 65 EDTA销盐1. 25 3.70 2.35 2.35 碳酸氢纳1. 25 1. 20 1. 75 1. 75 氯化饵0.75 o. 75 青霉素纳0.60 0.50 0.60 硫酸链霉素1. 00 o. 50 1. 00 0.50 聚乙烯醇CPVp，Type II
15、) 1. 00 1. 00 三竣甲基氨基甲;皖CTris)5.50 5.50 拧攘酸4.10 4. 10 半眈氨酸0.07 0.07 海藻糖1. 00 林肯霉素1. 00 8 附录(规范性附录)公猪常温精液保存登记表D 。目HNE斗阳|MOE公猪常温精渡保存登记表每头份保存第1天保存第2天保存第天出厂前产品生产生产头份数总精柿子保质期/精子精子精子摇动精子活力/质检员备注批号品种耳号剂量/摇动摇动名称单位日期子数/畸形率/d 活力/活力/活力/时间时间时间% mL % % % 108个% 一一一一寸表D.l也DEON-NhFmNH函。华人民共和国家标准猪常温精液生产与保存技术规范GB/T 25172-2010 国中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1字数16千字2010年11月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2010年11月第一版导定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-40634 GB/T 25172-2010 打印日期:2010年12月3日F002
