1、ICS 65.020.01 B 16 中华人民11: -、道B和国国家标准GB/T 28093-2011 马铃薯银屑病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Helminthosp01切msolani Dur. & Mont. 2011-12-30发布数饲防伪中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2012-06-01实施发布G/T 28093-20门目UJ=I 本标准按照GBjT1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SACjTC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、
2、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人z刘伟、严进、王秀芬、董薇、姜丽、王有福、丘驰、陈蝶、赵文军、朱水芳、张秋娥。I 马铃薯银屑病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了马铃薯银屑病菌的检疫和鉴定方法。本标准适用于马铃薯块茎上马铃薯银屑病菌的检疫和鉴定。2 马铃薯银屑病菌基本信息学名:Helminthosporium solani Dur. &. Mont. 中文名:马铃薯银屑病菌(茄长蠕抱菌)。英文名:potato silver scurf。GB/T 28093-2011 根据(Dictionary of Fungi)第9版，马铃薯银屑病菌CHelminthosporiumsolani Dur
3、. &. Mont. )的分类地位为:真菌界CFungi)，有丝分裂抱子真菌CMitosporicfungi)的长蠕抱属，茄长蠕抱菌。3 方法原理马铃薯银屑病菌在马铃薯块茎上具有银色光泽的病斑及经过保湿培养后形成独有的圣诞树状抱子梗和分生抱子是马铃薯银屑病菌鉴定的依据。4 主要仪器设备、用具和试剂4. 1 仪器设备:体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、光照培养箱、电子天平、高压灭菌锅等。4.2 用具:培养皿、烧杯、自瓷盘、尖头慑子、载玻片、盖玻片、量筒、酒精灯等。4.3 试剂:PDA培养基(可选用市售PDA培养基)、次氯酸纳、元水乙醇等。5 现场检瘟5. 1 抽样5. 1. 1 抽
4、样方法以批号为抽样单位，无批号的以品种为抽样单位随机抽取。每份样品的抽样点不少于5个(对于散装的马铃薯，应在表层以下0.3m取样更为适宜)。单位包装只能有一个抽样点。5. 1. 2 抽样数量500粒以下取1份;501粒2000粒取2份;2 001粒5000粒取3份;5 001粒10000粒取4份;10 001粒以上，每增加10000粒增取1份，不足10000粒的余量，计取1份。每份样品20粒块茎。1 GB/T 28093-2011 5.2 现场查验按进出境马铃薯种薯总件数的5%20%随机抽栓，最低抽检数量不少于10件，且不少于1000粒。现场检查马铃薯块茎是否有马铃薯银屑病菌侵染后的典型症状(
5、见7.1)。将现场查验发现的有马铃薯银屑病菌的典型症状块茎用塑料袋装好，连同现场抽取的样品分别加贴标识后送实验室进行进一步的分离和病原鉴定，并做好现场查验记录。6 实验室检验6. 1 马铃薯块茎症状检验将现场抽取的马铃薯块茎样品混匀，从中随机抽取100个块茎进行检查。检查是否有马铃薯银屑病菌侵染的症状，如果发现可疑症状连同现场查验的可疑块茎按6.2和6.3进行分离培养。6.2 马铃薯块茎保湿培养取25个50个典型症状的块茎样品，先用自来水冲洗，再用灭菌水冲洗后放入装有湿纸巾的塑料袋中，封口后，在塑料袋上打几个0.16cm直径的小孔，在黑暗中保持在22oc士2OC，培养2周3周。周期性地湿润纸巾
6、，避免马铃薯块茎干燥。6.3 PDA培养在马铃薯块茎表面的病斑处，切取7mm直径的小块，用1.0%次氯酸铀消毒30s，用灭菌的蒸馆水冲洗两次，灭菌滤纸吸干水分，放置在PDA培养基(见附录A)上，在22oc土2oc条件下培养2周3周。7 鉴定特征7. 1 马铃薯块茎症状特征7. 1. 1 块茎上病斑症状马铃薯银屑病菌主要侵染马铃薯块茎，在马铃薯周皮上形成圆形的病斑，病斑褐色至灰色。病斑深度多局限在周皮，不扩展到块茎内部，病斑最终表现为银色(参见图B.1、图B.2)。在储藏期，被侵染的薯块表皮最终表现为皱缩的特征，由于受伤表皮过度水分蒸发，使病斑最终表现为褐色，部分周皮可能脱落。7. 1.2 块茎
7、上病原菌特征病斑上子实体(分生抱子梗和分生抱子)多发生在病斑的边缘，新侵染的病斑更为明显，可见黑色的霉层(分生抱子。在病斑上并不总产生分生抱子，这主要取决于湿度条件。7.2 保温培养后病原菌特征马铃薯银屑病菌产生透明的菌丝，菌丝分隔并分枝;分生抱子元分枝，具分隔。分生抱子轮生在分生抱子梗末梢，状似圣诞树(参见图B.3)。分生抱子梗直立，两壁平行生长。分生抱子宽(7m8m、长18m64m。分生抱子最多8个分隔、暗褐色、基部圆、尾端细(参见图B.4)。GB/T 28093-2011 7.3 PDA培养病原菌特征分离物在PDA培养基上形成暗褐色至黑色菌落，浅棕色的分生抱子群分布在培养基表面。菌丝在P
8、DA上的生长速度为1.15mm/d-1. 78 mm/do 20.C下光照培养比黑暗培养的生长速度快。分生抱子梗随培养时间的增加，颜色从浅灰色变为褐色，元分枝，1根6根丛状生长，基部球形，7个-19个隔膜，(150m-550m) X (7. 0m10. 0m)。分生抱子近元色至褐色，单个或成簇地自分生抱子梗基端往上呈轮状排列，直或稍弯，顶端渐尖，略呈锥形，3个8个隔膜，(20m-80m)X (7.5m-10m)，与自然薯块上产生的分生抱子大小基本相同。8 结果判断马铃薯块茎症状符合7.1，且经保湿培养和PDA培养后，符合7.2、7.3的鉴定特征可以判断为马铃薯银屑病菌。9 样品、菌种保藏分离并
9、鉴定为马铃薯银屑病菌的菌株要转移到斜面培养基上，于4.C冰箱中保存至少6个月。带有马铃薯银屑病菌的块茎也于4.C冰箱中保存，其时间视薯块的情况，尽量保存。以备复检、谈判和仲裁，保存期满后进行灭活处理。3 GB/T 28093-2011 附录A(规范性附录)PDA培养基的制作方法PDA培养基的制作(或选用市售PDA):马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20go马铃薯切块煮沸10 min，纱布过滤，加入葡萄糖，琼脂，加水定容至1000 mL, 121 oC，高压灭菌20min，分装备用。4 ，乡气附录B(资料性附录)马铃薯银屑病菌症状及形态特征图B.1 马铃薯银屑病菌在马铃薯块茎上的症状GB/T
10、28093-2011 图B.2马铃薯银屑病菌在块茎上发展以后形成的圆形、从褐色到暗灰色的病斑，最后发展为银灰色5 GB/T 28093-2011 圄B.3马铃薯银屑病菌保湿培养的微型圣诞树一样的分生抱子擅及分生于包子图B.4马铃薯银屑病的分生于包子6 =ON-80NH阁。华人民共和国家标准马铃薯银屑病菌检瘟鉴定方法GB/T 28093-2011 国由l峰中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销唔印张0.75字数11千字2012年3月第一次印刷开本880X12301/16 2012年3月第一版晤16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价书号:155066. 1-44647 GB/T 28093-2011 打印H期:2012年4月19HF002A
