1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1920-2007 进出口动物源性食品中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of trichlorfor,dichlorvos and coumaphos residues in foodstuffs of animal origin for import and export-LC-MS/MS method 2007-05-23发布原雪2是气f i:垂2:1-，2007斗2-01实施古器具中华人民共和国发布飞二:;二j国家质量监督检验检夜总局SN/T 1920一2007前本标准的附录A、附录B和
2、附录C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局和中华人民共和国浙江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人2王国民、戴华、谢文、朱阴、王美玲、李贤良、李应国、张雷、周启明、王象贤。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I 1 范围进出口动物源性食品中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的检测方法液相色i苦质i昔/质谱法SN/T 1920-2007 本标准规定了畜、禽分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的制样和液相色谱质谱/J91:r普检验方法。 试样中的敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷庐苟甲
3、炕或严乙黯胁，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定最号子离于丰度比定性。4 试剂和材料I j I / I / 所有试剂除特殊注明外，均为如析纯J水为二1次蒸馆1(。4. 1 乙脆:高效液相色谱级。I飞1 ! 4.2 甲醇:高效液相色谱级。1 l 4.3 乙酸乙醋。飞/ 4.4 二氯甲烧。/ 飞.- 飞/4.5 环己烧。飞、4.6 硫酸纳:650C灼烧4h.在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。4. 7 乙酸馁z优级纯或相当者。4. 8 50 mmol/L乙酸饺溶液z称取0.385g乙酸钱溶于1000 mL水中。4.9 敌百虫(Trichlorlor，CAS号:52
4、-68-6，分子式:C, H, Cl 13 O，P)标准品=纯度大于或等于98.0%。4. 10 敌敌畏(Oichlorvos，CAS号62-73-7，分子式:C. H, Cl, 0 , P)标准品z纯度大于或等于97.6%。4. 11 蝇毒磷(Coumaphos，CAS号:56-72-4.分子式:C14H16C10;PSl标准品z纯度大于或等于99.9%。4. 12 标准储备液z分别准确称取适量敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷标准品，用甲醇配制成浓度为100问ImL浓度的混合标准储备液。此溶液在0C4C冰箱中避光保存，可使用3个月。4. 13 空白样品提取液2用不含敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留的样品，按
5、照6.1制备空白样品提取液。4. 14标准工作溶液:根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成50ng/mL、100ng/mL、SN/T 1920-2007 200 ng/mL、500ng/mL的混合标准工作溶液。置于OL:4 L:冰箱中避光保存，可使用3d。5 仪器和设备5. 1 高效液相色i普质谱/质谱仪g三重四极杆质i昔检测器，配电喷雾离子源(ESD或相当者。5.2 超声波清洗器。5.3 旋涡混匀器。5.4 旋转蒸发仪。5.5 离心机，5000 r/min, 5.6 均质器。5.7 0.45m微孔滤膜。6 测定步骤6. 1 提取与净化6. 1. 1 分割肉a) 准确称取5g均匀试样精确到
6、0.01g)于50mL具塞试管中，加人5g元水硫酸锅混匀，再加入15mL二氯甲烧，用均质器(10000 r/min)均质2min ,4 000 r/min离心3mn，将有机相转移至100mL梨形蒸馆瓶中，残渣再用2X10mL二氯甲烧均质提取两次。b) 离心合并有机相，于40C旋转蒸发至2mL，将样液转移至5mL刻度试管中，并用少量二氯甲院洗涤梨形蒸饱瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙脐溶解残渣，加入2mL环己烧旋涡混匀2min后，2500 r/min离心3min，将下层乙脂相过0.45户m微孔滤膜后，供液相色i晋质谱/质谱仪测定。6. 1. 2 肠衣准确称取5
7、g试样(精确到0.01g)于50mL具塞离心瓶中，加入2g无水硫酸例混匀，再加入15 mL二氯甲烧，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声30min，冷却后将有机相过滤转移至100mL梨形蒸馆瓶中，残渣再用2X10mL用二氯甲炕混匀超声提取两次，离心合并有机相。接下来按照6.1. 1中b)的步骤进行。6. 1. 3蜂蜜称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管巾，加10mL水，加25mL乙酸乙酶，于旋涡混合器上混匀1min，以3000 r/min离心5min，将上层乙酸乙醋提取液收集于浓缩瓶中，残渣再加入20 mL乙酸乙酶，重复上述操作，合并乙酸乙酣提取溶液。在50C以下减压浓缩至约3
8、rnL后转移至离心管，用5mL乙酸乙醋分两次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于离心管中，用氮气吹干干。加1.0 mL乙腊溶解残渣，并过0.45m微孔滤膜后，供液相色谱-质i普/质谱仪测定。6.2 测定6.2. 1 液相色i昔-质谱/质谱条件2 a) 包i吉柱z桂填料为十八烧基硅炕键合相的色谱柱，4.6X 150 rnm，5m或相当者gb) 流动相z甲醇，50mmol!L乙酸饺，梯度洗脱程序参见附录A，c) 流速，0.50mL/min或根据仪器条件优化;d) 柱温，40C，e) 进样量，10L，f) 离子源z电喷雾离子源;g) 扫描方式.iE离子ph) 检测方式=多反应监测(MRM), O 质谱/质谱参考
9、条件参见附录B，SN/T 1920-2007 6.2.2 定性、定量测定按照6.2.1液相色谱-质i吉/质i苗条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液(4.13)进行适当稀释。在上述色i吉条件下，敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷的质量色谱峰保留时间约为13.2min.14. 1 min. 15.9 min，标准品的多反应监测色谱图参见附录C中的图C.1，在相同的实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱曲章相对保留时间在2.5%以内，并且在扣除背景后的样品质量包i吉图中
10、，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1使用定性液相色谱嘈质i普/质i曹时相对寓子卒度最大容许误差相对丰度(基吨)/(%)液相色谱质谱/质1I时相对离子丰度最大允许误差/(%) 50 土20大于20至小于等于50土25大于10至小于等于20:t30 小于等于10土507 结果计算和表述用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式(1)计算样品中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量。式中zx= cXV 一m X 1 000 X一一试样中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg), .( 1 ) c 由标准曲线
11、而得的样液中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL);m 最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。8 测定低限、回收率8. 1 测定低限本方法敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷的测定低限均为0.010mg/险。8.2 回收率8.2. 1 肠衣巾敌百虫添加浓度及其回收率数据.添加浓度在0.010mg/kg时，回收率在73.0%94. 0%之间;添加浓度在0.020mg/kg时，回收率在78.0%95. 0%之间号添加浓度在0.040mg/kg时，回收率在78.0%95.0%之间。8.2.2 肠衣中敌敌畏添加浓度及其回收率数据z添加浓度在0.0
12、10mg/kg时，回收率在76.0%98. 0%之间z添加浓度在0.020mg/kg时，回收率在78.0%98. 0%之间g添加浓度在0.040mg/kg时，回收率在86.0%95.0%之间。8.2.3 肠衣中蝇毒磷添加浓度及其回收率数据z添加浓度在0.010mg/kg时，回收率在75.0%95.0%之间s添加浓度在0.020mg/kg 时，回收率在80.0%96.0%之间;3 SN/T 1920-2007 添加浓度在0.040mg/kg时，囚收率在77.0%-92.0%之间。8.2.4 分割肉中敌百虫添加浓度及其回收率数据=添加浓度在0.010mg/kg时，囚收率在92.0%-115%之间;
13、添加浓度在0.020mg/kg时，回收率在86.5%-113%之间$添加浓度在0.040mg/kg时，回收率在80.8%-101%之间-8.2.5 分割肉中敌敌畏添加浓度及其回收率数据2添加浓度在0.010mg/kg时，回收率在93.0%-110%之间p添加浓度在0.020mg/kg时，回收率在88.5%-108%之间g添加浓度在0.040mg/kg时，回收率在84.3%-110%之间。8.2.6 分割肉中蝇毒磷添加浓度及其回收率数据g添加浓度在0.010mg/l也E电r;日收率在91.6%-112%之间p添加浓度在0.020mg/kg巾，回收率在79.0%-102%之间，添加浓度在0.040
14、mg/kg船，回收率在73.9%-95.3%之间U8.2.7 蜂蜜中敌百虫添加浓度及其回收率数据企/添加浓度在0.010mg/kg时，回收率奄J470%110%之间号添加浓度在0.020mg/kg时，回吹应在79.0%-)04%之间$添加浓度在0.040mg/kg时j饭率在创-1%107%之间。8.2.8 蜂蜜中敌敌畏添加浓度在其回收率数据7添加浓度在0.010mg/kg啡，囚收Z存在70.0%-92.0%之间乡添加浓度在0.040mg/kg 4 SN/T 1920-2007 时间/min附录A(资料性附录)梯度洗脱程序表A.1流动相梯度洗脱程序甲醇/(%l50 mmol/L乙酸钱/(%l。1
15、0.0 90.0 5.00 10.00 18.口01日.0125.00 10.0 90.0 5.0 iil-_U 95.。5.0 10.0 90.0 4巳/ / 附录BI (资料性附录)1 API 4000 LC棚SiJ拉到敌百臭豆裁政畏二)毒磷参考条件, / J 90.0 / API 4000 LCMS/MS系统电顷雾离子源参考存锵za) 窗帘气(CUR), 5.00 Pa) 飞b) 雾化气(GS):40. 00 P约I ! c) 辅助加热气(GS肌45fOL/m; I /-, d) 碰撞气(CADl:7.00ya; / I ! . e) 离子源喷雾器电压(咛25002.0315j j j
16、f) 喷雾针温度:(TEM) :i50. 00101020 :t 30 10 :t 50 Relative intensitv/ (%) Permitted tolerances/ (%) 50 :t 20 201050 7 Calculation and expression of result Calculating the content of trichlorfor, dichlorvos and couma口hosresidue concentration in the sample is carried out by LC!MS!MS data processor or accor
17、ding to the formula (1) , x = c x V m x 1 0 ) 1 ( . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 SNIT 1920-2007 where X-the residue content of trichlorfor.dichlorvos and coumaphos in the test sample.mg/kg; c-the concentration of trichlorfor.dichlorvos and coumaphos in the test sample calculated by
18、 cali bration curve. ng/mL; m the corresponding mass of test sample in the final sample solution.g; V-the final volume of sample solution.mL. 8 Limit of quantification and recovery 8. 1 Limit of quantifi臼tionT叫n叫盯R阳e时削c。ove叫e盯ryL一一.，-牛j . / ./扩8.2. 1 According to the experimental date. tt旧吁ortifying
19、concentration of trichlorfor in casing and , its corresponding recoveries are, j 0.0创10m啕g/k崎g刷g岛g.t阳t0.020 m叫g/圳/川k崎g，t怕he陌阳cov四er叩yl阳s7冗8.00/4-9部5.00/0;二1 0.040 mg/k日.the recovery is 78. O佳.o.%_，一一一牛0.040 mg/烟.the recovery is 86. 0.010 mg/kg.the recovery is 75. 0%-95. 0%; 0.020 mg/kg. the recovery
20、 is 80. 0% -96. 0% ; 0.040 mg/kg.the recovery is77.0%-92.0%. 8.2.4 According to the experimental date. the fortifying concentration of trichlorfor in musle and its corresponding recoveries are , 0.010 mg/k日.therecovery is 92.0%-115%; 0.020 mg/kg.the recovery is 86. 5%-113%; 0.040 mg/闹.therecovery is
21、80.8%-101%. 12 SN/T 1920-2007 8.2.5 According to the experimental date. the fortifying concentration of dichlorvos in musle and its corresponding recoveries are: 0.010 mg!阔.therecovery is 93.0%-110% , 0.020 mg!阔.the recovery is 88. 5% -108% , 0.040 mg!阔.therecovery is 84. 3%-110%. 8.2.6 According to
22、 the experimental date. the fortifying concentration of coumaphos in musle and its corresponding recoveries are: 0.010 mg!kg. the recovery is 91. 0% -112% , its corresponding recoveries are: 0.020 mg/kg. the recovery is 71. / 0.040 mg/kg. the recovery is 70. / ( 1. / 1 8.2.9 According to the expe叫en
23、taldate. tife fortifying conentrat卡nof coumaphos in honey and its corresponding recoveries are占飞.，_，.， ( I 飞I 0.010 mg!kg.the recovery is 79. 0%-110%， / f / 飞0.020 mg/闸.the recovery is 74. 0%叫吗?缸_/L-/ 0.040 mg/kg.the recovery is71.0%-104%. 13 SN/T 1920-2007 Annex A (informative) The reference condit
24、ions of the elution gradient program Table A. 1-The elution gradient Time/min Methanol/ (% ) 50 mmol!L ammonium acetate/(%) 。5.00 10.00 18.00 18.01 25.00 10.0 10.0 95.0 95.0 10.0 10.0 Annex B (informative) 90.0 90.0 5.0 5.0 90.0 90.0 Referenced conditions for analysing trichlorfor, dichlorvos and co
25、umafos by API 4 000 LC-MS/MS system Referenced conditions for electrospray ionization source of API 4 000 LC/MS/MS system, a) Curtain gas (CUR) ,15.00 Pa , b) Nebulizer gas (GS1) ,40. 00 Pa , c) Auxiliary gas (GS2) ,45. 00 L/min, d) Collision gas (CAD) ,7. 00 Pa , e) lon spray voltage(IS) ,5 000. 00
26、 V, f) Probe temperature,550. OO C , 日)Transitions for confirmation and quantification, DP ,CE ,CXP see Table B. 1. Table B. 1-Transitions for confirmation and quantification,DP ,CE ,CXP Q1 Q3 Ta咱et口P/VCE/V cxP/V analyte m/z 肝、.z259.0 109.2 63.0 26.5 19.0 Trichlorfon 256.9 22 1. 2 63.0 16.0 13.0 22
27、1. 3 109.2 63.0 25.5 19.0 Oichlorvos 223.3 109.2 63.0 25.0 18目。363.3 307口96.0 25.0 20.0 Coumaph 363.3 227.0 96.0 36.0 13.0 a Quantitation ion阳t14 Annex C (informative) SN/T 1920-2007 LC/MS/MS extracting ion current(XIC)of+ MRM chromatograms for the mixture standard ii飞桌面1:-11O.U.jI咽.，.喃10_._.:0l1li1
28、IiII咱棚0.311;1.剿叮丽、0-恤.lJl.:1yj，0 19 20 21 22 23 24 二234567 百F丽画面:1:1.1111唱.111.10.呻.11.7 B 9 咽画画. 7 2 3 4 5 二6 7 8 9 ，川剧10 11 J 14 trichlorfor 259.0 -109.2 221.3 109.2 71 7 10 11 H._.!. 14 15 16 17 18 19 20 21 闹.lI.咽.230醉.( 22 23 24 11.11:.帽剧.，.，. 5.咽.11.l1li111咽川.:ma._，.I._旬，霄恤.coumafos 363.3哼307.0
29、? T 1 2 3 4 5 6 18 19 20 21 22 23 24 Figure C. 1一LC/MS/MSextracting ion current(XIC)of+MRM chromatograms for a mixture 。ftrichlorfor, dichlorvos and coumafos standard 1) the reference mass para町etersin Annex A are accomplished by API 4000 LC/MS/MS. the equipment and its type lnvolved in the standard
30、 method is onlfor reference and not related to any口)mmercial副m.and the analysts are encouraged to use 8quipments of different corporation or different type 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准迸出口动物源性食品中敌百虫、政敌畏、蝇毒磁残留量的检测方法液相色i曹质i昔/质谱法SN/T 19202007 峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷除开本880X1230 1/16 印张1.25 字数31干字2007年9月第一版2007年9月第次印刷印数12000 书号155066.2-18063定价12.元
