1、s 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1925-2007 进出口蜂产品中链霉素、双氢链霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法Determination of streptomycin and dihydrosteptomycin residues in bee products for import and export-LC-MS/MS 2007-05-23发布2007-12-01实施FE雪飞飞哩Fj中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T 1925-2007 前本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准由中华人民共和国浙
2、江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人2陈笑梅、谢文、迟浩超、陈小霞、单慧君、刘海山、俞春燕、英君阳.本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 1925-2007 进出口蜂产品中链霉素、双氢链霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了蜂产品中链霉素、双氢链霉素残留量的液相色谱串联质i吉测定方法。本标准适用于蜂蜜、蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素、双氢链霉素残留量的检测。2 试样制备与保存一18C下保存。取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解矿纭样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，础，并标明标记。一份作为者，另一份号也保存 .# 在制样的操作过
3、程中，应防止丰硕污染或发生残鼠物.k立凶奕华3 方法提要I i 试样采用稀磷酸溶解提取(蜂主券Z样品制日三兰氯乙酸沉淀蛋白民l经高速离心后再用阳离子交换酬Oa盹s4 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为4. 1 甲醇2高效液相色谱级。4.2 正己统g高效液相色谱级。4.3 乙脯高效液相色谱级。4.4 磷酸z二三85%。4.5 冰乙酸.4.6 三氯乙股.4.7 庚炕磺股纳z高效液相色i普级。4.8 叔了基甲E草。4.9 饱和氢氧化锁溶液。f 4.10 0.3%乙酸水溶液2移取3mL冰乙眩，用水定容至1000mL。4. 11 0.3%乙酸乙肪溶液2移取3mL冰乙般，用乙H肯定容至1000 mLo
4、4. 12 叔丁基甲酿十正己炕溶液，(4十1.你积比)。4. 13 磷酸溶液(pH二2)，1000 mL水中滴加磷酸，调节溶液pH为2。4.14 0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=8)，称取33.46g磷酸氢二何和1.05 g磷酸二氢何于950mL 水中，用磷酸调节溶液pH为8.加水定容至1000 mL。4.15 50%三氮乙酸溶液z称取100g三氯乙股溶于适量水，并用水稀释至100mLo 4. 16 0.5 mol/L庚炕磺股纳溶液称取11g庚炕磺酸锦溶于适量水，并用水稀释至100mL。SN/T 1925-2007 4. 17 0.01 mol/L庚皖磺酸纳股溶液(pH=3.3):称取
5、0.22g庚烧磺酸纳溶于90mL水中，用乙酸调节溶液pH为3.3.并用水稀释至100mL, 4. 18链霉素硫酸盐标准品(streptomycinsulfate , CAS号:3810-74心，分子式:C21 H N, OI S):纯度二三95.8%。4. 19 双氢链霉素硫酸盐标准昂(dihydrostreptomycinsulphate. CAS号:5490-27-7.分子式2CZ1 H4IN, OIX 3/2H, O X 3H，O):纯度99%。4.20 链霉素标准储备溶液3分别称取经折算相当于0.0100g链霉素的标准品(4.18).用水溶解定容至100mL.溶液浓度为100g/mL，
6、1C-4C冷藏保存，保有期1个月。4.21 双氢链霉素标准储备溶液2分别称取经折算相当于0.010 g双氢链霉素的标准品(4.19).用水溶解定容至100mL.溶液浓度为100g/mL，1C -4 c冷藏保存，保存期1个月.4.22 空白样品提取液=用不含链霉素、双氢链霉素的蜂蜜或蜂王浆样品，按照6.1和6.2制备空白样品溶液。4.23 标准工作榕液z根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成15ng/mL、25ng/mL、50 ng/mL、250ng/mL、300ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有6g/kg、10g/kg、20g!kg、100问!kg、120问/kg链霉素和双氢链霉
7、素，现配。4.24 苯磺酸型固相萃取柱:500mg.3 mL.或相当者。用5mL甲醇和10mL水预洗。4.25 Oasis(HLB)国相萃取柱:500mg.6 mL或相当者。用10mL甲醇和10mL水预洗。5 仪器和设备5. 1 液相色谱一串联质谱仪=配有电喷雾离子源。5.2 旋转蒸发器。5.3 pH t十。5.4 离心机:7000r/min , 5.5 旋涡混匀器。5.6 固相萃取装置。6 测定步骤6. 1 提取6. 1. 1 蜂蜜称取5g试样精确到u0.01 g)置于50时，具塞离心管巾，加入25mL磷酸溶液(4.13).混匀，以6 000 r/min离心7min，上消液待净化用6. 1.
8、 2 蜂王浆和王浆冻干粉称取10g蜂王浆或3.3g王浆冻干粉(精确到0.01g)置于50mL容量瓶中，加入40mL磷酸溶液(4. 13).混匀，再加入2mL 50%三氯乙酸，用磷酸溶液(4.13)定容，轻轻混匀，将溶液转移到50mL具塞离心管中，以6000 r/min离心7min，过滤.移取25mL滤液，用饱和氢氧化的溶液调pH为2.0.待净化用。6.2 净化6.2. 1 苯磺酸型国相萃取柱净化将上述待净化的清液转移至经预洗的苯磺酸型团相萃取柱(4.24).用5mL稀磷自主溶液(4.13)和10 mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液，再用30mL O. 2 mol/L磷酸盐缓冲溶液(4.14)
9、洗脱。在洗脱液中加入5mL O. 5 mol/L庚炕磺酸销溶液，摇匀，用磷股词pH为3.3。6.2. 2 Oasis HL固相萃驭柱净化将上述溶液(6.2.1)移入经预洗的OasisHLB固相萃取柱(4.25).月15mL稀磷酸溶液(4.13)淋2 SN/T 1925-2007 洗，在真空负压下，减压抽干5min，再用4mL叔丁基甲隧正己烧溶液(4.12)淋洗，同样减压抽干5 min，弃去全部淋出液。用5mL甲醇溶液以1.5 mL/min的流速洗脱链霉素和双氢链霉素，洗脱液在45C以下水?在减压浓缩至近干，用0.01mol/L庚烧磺酸钩酸溶液溶解并定容至2.0mL，混匀.供液相色i普-串联质谱
10、仪测定。6.3 测定6.3. 1 液相色谱-串联质谱条件a) 色谱柱:C1S ，5m，150 mmX4. 6 mm(内径)或相当者，b) 流动相0.3%乙酸水溶液:0.3%乙酸乙脂溶液(80: 20，体积比); c) 流速:400L/min;d) 进样量，30L，e) 离子源=电喷雾离子源pf) 扫描方式z正离子扫描;g) 检测方式z多反应监测，h) 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气或其他高纯气体;监测离子对(m/z)和其他参考条件参见附录A，6.3.2 色i曹测定根据试样中被测样液的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应
11、范围内.在上述色谱条件下链霉素、双氢链霉素的参考保留时间约为9.8mn，链霉素、双氢链霉素标准品多反应监测(MRM)色i吉图参见附录B中图B.1，外标法定量。6.4 定性、定量按照液相色谱一串联质i苦条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法.定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离于丰度/C%)50 40至5010至2099. 999%)or other high purity 9aS. Transitions (m/
12、z) and other 11 S:oI/T 1925-2007 instrumental settings may be adjusted. if necessary. to optimize performance. See Annex A. 6.3.2 lC-MS/MS determination According to the approximate concentration of analyte in sample solution. select the standard work ing solution with similar responses to that of s
13、ample solution. The responses of the analyte in the standard working solution and the sample solution should be within the linear range of the instrument detection. Under the above lC-MS!MS operating conditions. the retention time of streptomycin and dihydrostreptomycin is about 9. 8 min. MRM chroma
14、tograms of the standards are showed in Figure B. 1 of annex B. 6. 4 Confi rmation of l C-MS!MS I Under lC-MS!MS conditions. the wbrking.solutions.and sample solutioh are injected. If the retention 注。:fz:;:1:;工工工;:12:27;。:;l工:;1Jr:;:; / correspond to those of standard solution.)rnnsitions fo飞confirma
15、tion.The concentration of standard Relative intensty/ (%) 101020 10 L二lt)df J / ( J 1 7 Calc削Permitted tolerances/ (%) :t 50 6. 5 Blank test The operation of the blank test is Calculation the content of streptomycin and dihydrostreptomycin residue in the test sample by lC MS!MS data processor or acc
16、ording to the formula (1). the result was shown by the sum of strepto咽mycin and dihydrostreptomycin, X 旦兰卫二-m x 1 000 ) 1 ( . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . where X-the residue content of streptomycin or dihydrostreptomycin in the test sample. mg!kg, C the concentration of strepto
17、mycin or dihydrostreptomycin is from calibration curve. ng!ml, v the final volume of the sample solution. ml, m-mass of test sample of final sam口lesolution. g. 12 SN/T 1925一20078 Limit of quantification (LOQ) and recovery 8. 1 Limit of quantification The limits of quantification are both 0.01 mg/kg
18、for streptomycin and dihydrostreptomycin in honey and royal jelly. 8. 2 Recovery According to the experimental data. the corresponding recoveries of fortifying concentrations are listed in table 2: J _.-t r ，r$ilb&腼BFEL13 SN/T 1925-2007 a) 15 , 5500 V , b) G51 ,35 Pa , c) CUR, 25 Pa , d) G52, 45 Pa,
19、 e) TEM, 550C , f) CAD,6 Pa , Annex A (informative annex) API 4 000 LC-M5/M5 conditions g) Transitions, DP, CE ,CXP see table A. 1. Table A. 1一Transiti。阳，DP，臣，cxpMRM Transitions Com阳undDP/V m/z 582.3/263目6133 streptomycin 582.3/246.5 133 584.4/263.4 150 dihydrostreptomycin 584.4/246.3 150 a quantifi
20、eation. CE/V CXP/V 45 10 55 10 45 10 52 10 1) the reference mass parameters in Annex A are accomplished by API 4000 LC/MS/MS. the equipment and its model involved in the standa时methodare only for reference and not陀latedto any commercial aim and the analysts are enuraged to use equipments of differen
21、t corpo用tionor different model. 14 f4lf,ti-1l14 0000 000 000 842 的QU乐EZ言的4000才。IU 1 言2OOOi o -唱c 阳t。品的204-jQ I U 1 自言10，4C I l - C , O -m跚跚跚08642 的QU忠、AMazgz-Annex B (informative annex) MRM chromatograms of streptomycin and dihydrostreptomycin 2 3 4 5 streptornydn (582. 3/263. 6) 9.85 SN/T 1925一2007
22、10 11 2 3 4 6 二i6 t/rnin 7 8 9 10 11 2 3 4 5 9.86 streptomycin (582. 3/246. 5) 10 11 2 4 5 6 7 8 9 11 Figure B. l-MRM chromatograms of streptomycin and dihydrostrepomycin in standard 3 t/rnin dihydrostreptomycin (584. 4/263. 4) 9.85 1 6 t/min 7 8 9 tlmin 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准迸出口蜂产品中链霉素、双氢链霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法S:-JIT 1925-2007 唾中国标准出版社出版北京复兴门外兰里何北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本880X12301/16 印张1.25字数31千字2007年9月第一版2007年9月第一次印刷印数1-2000唔书号，155066.2-18068 定价12.元
