1、s 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1928-2007 进出口动物源性食品中硝基咪瞌残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of nih咀midazolesresidues in foodstuffs of animal origin for import and export-LC-MS/MS method 2007-05-23发布2007-12-01实施手，军主专:，基毒品:中华人民共和国发布,tr-ii7 国家质量监督检验检痊总局前言本标准的附录A、附录B、附录C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T 1928-200
2、7 本标准起草单位=中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人挠检验检疫局负责起草。本标准主要起草人2荣会、牟峻、张代辉、林黎明、张鸿伟、马书民、周晓、赵庆松。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I 1 范固进出口动物源性食品中础基眯瞠残留量检测方法液相色i昔-质i普/质谱法SN/T 1928-2007 本标准规定了动物源性食品中8种硝基眯瞠残留量、2种代谢物的液相色i昔质i苦/质说测定方法.本标准适用于牛肉、猪肉、禽肉组织及其肝脏、肾脏、乳及乳制品、蜂蜜、水产品中，4-lifj基眯略、异丙硝略、二甲硝眯瞠、洛硝贴瞠、甲硝瞠、氯甲硝咪瞠、地美硝略、苯硝眯瞪残留量及其代i射
3、物MNZOH(甲硝瞠代i射物)、HMMNI-H，(二甲硝咪瞠、?在硝眩瞠代谢物的测定和确证。2 试样制备与保存2. 1 试样制备2. 1. 1 肌肉组织及器脏组织类、水产品类从所取全部样品中取出有代表性样品约1烛，将其切成碎块后，依次用组织捣碎机将样品加工成馅状或浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。2. 1. 2 乳及乳制品类取军L及乳制品样品200g，将其混合或搅拌均匀，均分成两份作为试祥，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。2. 1. 3 蜂蜜类取代表性蜂蜜样品200g，对元结品的蜂蜜样品将其搅拌均匀，均分成两份作为试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭，标明
4、标记:对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60(:的水浴中温热，振荡，待佯品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。在融化时应注意防止水分挥发。2.2 试祥保存肌肉组织及器脏组织类、水产品类试样于18C以下冷冻保存;乳及乳制品类和蜂蜜类试样于OC -4C保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3 方法提要试样中残留的硝基咪瞠及其代谢物用甲脖-丙酬均质或超声波提取，经乙酸乙酣液一液分配，以凝胶色i吉柱净化，再经回相萃取柱净化，在相包i吉-串联质i吉测定和确证，外标法定量。4 试JrlJ与材料除
5、另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。4. 1 甲部:残留级。4.2 丙酣z残留级。4.3 乙酸乙醋残留级。4.4 环己烧=残留级.4.5 氯化纳。4.6 无水硫酸的=经650C灼烧4h，贮于密封容器中备用。4.7 甲酸2优级纯。 SN/T 1928-2007 4.8 饱和氯化倒水溶液。4.9 硅藻土:80目-120目。4.10 C团相萃取柱:1. 0 g.6 mL。4.11 微孔滤膜g有机系，0.45l.!ffi。4.12 10种硝基咪略及其代谢物标准物质2纯度均大于等于98%。4. 13 标准储备液的配制z分别准确称取适量的每种标准物质，用甲M:配制成浓度为1000 flg/mL的
6、标准储备液。该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0C-4C:冰箱中可保存12个月.4. 14 混合标准中间工作液的配制z分别准确移取一定体积的每种标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的混合标准中间工作液.该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0C-4C冰箱中可保存6个月。5.3 5.4 5.5 超声波发生器。5.6 旋转蒸发器。5. 7 高速离心机。5.8 氮吹仪。5.9 具塞锥型瓶:250mL. 5. 10 分液漏斗:250mL. 5. 11 浓缩瓶:50mL、250mL。6 测定步骤6. 1. 2 蜂蜜、乳及乳制晶样品j r _，-.-.o.-，一.o_叮分别准确称取约20g样品(精确至0.1g)于250m
7、L具塞锥形瓶中，加入10mL饱和氯化纳水溶液和70mL甲醇-丙酣(3+).超声波提取30mino移入离心管巾，于10000r/min条件下离心2min, 将上层提取液移入250mL浓缩瓶中.残渣每次再用50mL甲醉-丙阳(3+)重复提取两次，合并提取液。6. 1. 3 液液分配将6.1.1和6.1.2所得提取液于40C水浴中旋转浓缩至和j水相，并转移至250mL分液漏斗中，加入50mL饱和氧化纳水溶液和25mI.乙股乙酶，振摇3min，静分层，收集乙酸乙il相。水相再用2X20 mL乙酸乙酣重复提取两次，合并乙殷乙酶相.经无水硫般纳柱脱水，收集于250时，浓缩瓶中，于40C水浴巾旋转浓缩至近于
8、.加入5mL乙酸乙il-环己tt(十1)以洛解残渣，并用。.45m滤膜过滤，待净化。2 6.2 净化6.2. 1 凝胶色谱(GPC)净化6.2. 1. 1 凝胶色谱净化条件a) 净化柱，700rnrnX25 rnrn.Bio Beads S-X3.或相当者;川流动相s乙酸乙I-环己炕0+)，c) 流速，4.7rnL/rnin d) 样品寇量环，5.0rnL , ., $ e) 预淋洗体积，5Om时n川1让L斗$ f) 洗脱体积，210mL ; g) 收集体积，90rnL150 rnL。6.2.1.2 凝胶色谱净化步骤SN/T 1928-2007 将5rnL待净化液按6.2.1.1规泣的条件进行
9、净化，合并馆分收f，fJ器中的收集液于250rnL浓缩瓶中，于40C水浴中旋转浓缩至近干扣入5m问醇以济解残渣，待净础。6.2.2固相萃取(SPE)净化一一_-; / 使用前用5mL甲醇预淋洗CB因相萃取柱知将王mL溶解液1顷人C18固相萃取柱中，以1mL/min 速度收集i流出液，再用10mL甲醉进行洗脱/散集伞部洗脱浓于50时，浓缩瓶中，于40C7J(j谷中旋转浓缩至干。用甲障溶解并定容至1.0咿经0.45阳1滤践过注:后，供液相色谱质谱/白宫测定和确证。6. 3 ill定和确证 I 6.3. 1 液相色谱-质i昔/质谱条件I 1 a) 液相色i普-质谱/质i苦条件，见附录A， E 一飞干
10、一一_-写一-b) 流动相g见表1，一一-只1叫膊F飞时间/min流速/(，卢m.叫/ 甲院/(%) 0.1%甲股水溶液/(%)0.00 户口13.0 87.0 8.00 250 片1叶、87.0 8. 10 40. C 60.0 13.5 却o,-JI 1, 0矿0.00 19.0 250 + J 100 0.00 19. 1 与.1. G / 87.0 25.0 250-. 3险。，87.0 。进样量，10L。6.3.2 定量测定根据样液中被测硝基眯瞠药物含量，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和待狈样液中硝墓眯略药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对混合标准溶液与样液等体积分组
11、分时段参插进样扭定。外标法定量。在上述液相色谱串联质谱条件下，液相色谱-串联质谱总离子流图参见附录B。各硝基眯略及其代t物标准物质的保留时间参见附录c，6.3.3 定性测定对混合标准工作液及样液按上述规定的条件进行测定时，如果样液与混合标准工作浓的选择离子因中，在相同保留时间有峰出现，所有选择离子均应出现。则根据定性选择离子对的种类及其相对丰度比对其进行阳性确证。每利自1基眯瞠的选择离子对的种类、相对丰度比参见附录C.定性确证时相对离子丰度的是大允许偏差见表2，3 SN/T 1928-2007 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差:t20 土25土3010 :1: 50 相对离于丰度/(%
12、)允许的最大偏差/(%) 6.4 空白试验除不加样品外，按上述相同条件和步骤进行。50 20至5010至207 结果计算用色谱数据处理机或按式。计算试样中每种硝基眯瞠或代谢药物残留含章，汁算结果需扣除空白值。V一-m 口一-Ah A-X I ( . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 式中zx-一一试样中硝基眯瞠或代谢物i残留量，单位为微克每千克(g/kg); A一一一样液中硝基咪哇或代谢物z的峰顶积(或峰高); Ai3 标准工作液中硝基眯瞠或代i射物z的峰面积(或峰高); C 标准工作液中硝基咪瞠或代谢物z的浓度，单位为纳克每毫
13、升Cng/mLl; V 样液最终容体积，单位为毫升CmL);m一一最终样液代表的试样质量，单位为克Cg)。8 测定低限(LOQ)和回收率本方法对十种硝基眯瞠及其代谢物的测定低限及添加回收率见表3.4 mZH-UMlMOO吐10种硝基眯略及其代谢物方法的测定低限及添加回收率范围测定低限或回收率/(%)药物名称确i正低限/(mg/kg) 猪肉猪肝话肾牛肉牛肝牛肾鸡肉鸡肝鸡肾鱼肉奶粉蜂蜜72.2 71. 4 74. 7 77. 5 73. 6 75.4 79. 5 72. 7 72. 1 82. 3 77. 4 70. 7 4.硝基咪嗖0.001 102.1 99.5 89.1 97.8 87.9
14、92.8 98.2 86.4 103.9 95. 1 89.1 104.2 75.4 76.5- 80. 4 87. 3 78. 4 80. 7 73. 6 78.1 78. 2 88. 5 83. 2 72.4 异丙硝唾0.000 5 108.6 102.8 105.3 99.0 114.7 98.2 99. 7 103.5 99. 1 97.7 107.6 108.7 2甲硝咪瞠77.1 73. 9 76.2 75.8 72. 5 74.0 71. 7 71. 8 73. 2 79. 6 74. 8 69. 5 0.000 5 113.2 108.7 99.9 11 1. 6 106.3
15、100. 1 97.5 103.9 97.5 96.4 108.0 102.0 74. 4 72. 8 75.3- 72.5- 71. 3 74. 2 78. 7 73.0 71. 8 76. 8 74. 4 73. 3 洛硝n芷瞠0.001 97. 1 106.2 94.8 99. 2 98.1 11 1. 5 95.9 105.2 95.4 112. 6 11 1. 5 99.6 77.8 73. 5 77. 5 75. 4 73.1 74. 8 82. 2 75. 2 74. 5 80. 9 75. 9 72. 9 甲硝瞠0.000 5 98.3 105.9 96.2 96. 5 103
16、.2 100.3 99.1 107. 7 107.0 97.0 114.8 103.5 76. 6 74.0 78. 9 79. 7 76. 7 76. 9 80. 3 73. 6 75. 2 82: 3 73.0 70.2 氯甲硝咪瞠0.001 95.8 98.3 103.7 117.3 95.4 102.6 96.6 102.8 107.6 96.2 116.4 11 1. 3 78.2 72.5 77. 6 79.1 75. 8 77.3 79.0 76.3 73. 7 84. 7 74.5-72.3 地美硝瞠0.001 96.9 107.4 97.5 97.4 100.5 95. 7
17、94.8 105. 1 998. 7 98.5 11 1. 2 115. 1 74. 6 71. 9 78.1 82. 2 75. 2 77. 6 81. 9 75.5 74. 2 81. 4 77. 7 73. 8 苯硝眯瞠0.000 5 109.4 102.5 97.9 99.1 113.6 94.4 99.3 98.3 104.3 96.3 105.3 106.8 MNZOH 74. 7 72. 7 73. 8 8 1. 6 73. 9 71. 1 76.4 71. 9 72. 9 80. 2 73. 6 73.0 ( Metronidazue-。.00197.7 105.6 98.2
18、96.9 92.8 93.0 99.4 112.6 100.6 104.8 97.8 108.4 OHi 75. 5 74. O 75.1 83. 9 77. 6 80. 5 77.8 72.4 73.1 78.0 75.1 70.1 HMMNI-H, 0.001 112.5 11 1. 8 105.4 10 1. 7 94.0 96.7 104.0 101. 5 99.2 109. 6 100.7 96.6 表3由SN/T 1928-2007 附录(资料性附录)波相色谱质谱/质i晋条件A 表A.1 色i昔柱ZORBAX SB-CI8.150 mmX2.1 mm.3. 5m.或相当者柱温30C
19、 电离方式电喷雾ESI扫描方式正窝于扫描，多反应监把MRM电喷雾电压一;S:;O切I2o 10 50 I1 101020 1 ;10 阳rmittedrelative toleran四叭%)11 :t 20 1 士2511 :t 30 1 士50, , , 6. 4 81ank test / / The operation of the blank test is !same as that is described while there is no sample involved 7 Ca山m-the corresponding mass of test sample in the fin
20、al sample solution , g. 8 Limit of quantitation(LOQ) and recovery The LOQs of ten kinds of nitroimidazoles and theirs metabolites is shown in the Table 3. 15 mZ叫-UMltMDDU可Table 3-Recoveries and detection limits LOQ/ Recovery / ( % ) Name Chicken Chicken (mg/kgl Pork Pig liver Pig kidney Beef Cow liv
21、er Cow kidney Chicken Fish Milk阳werHoney liver kidney 72.2- 71. 4- 74.7- 77. 5- 73.6- 75.4- 79.5- 72.7- 72.1- 82.3- 77.4- 70.7-4-Nitroimidazole 口.001102.1 99.5 89.1 97.8 87.9 92.8 98.2 86.4 103.9 95.1 89.1 104.2 75.4- 76.5- 80.4- 87.3- 78.4- 80.7- 73.6- 78.1- 78.2- 88.5- 83.2- 72.4-Ipronidazole 。.00
22、05108.6 102.8 105.3 99.0 114.7 98.2 99.7 103.5 99.1 97.7 107.6 108.7 2-Methyl-5- 77.1- 73.9- 76.2- 75.8- 72.5- 74.0- 71.7- 71.8- 73.2- 79.6- 74.8- 69.5-0.0005 nitroimidazole 113.2 108.7 99.9 111.6 106.3 100.1 97.5 103.9 97.5 96.4 108.0 102.0 74.4- 72.8- 75.3- 72.5- 71.3- 74.2- 78.7- 73.0- 71.8- 76.8
23、- 74.4- 73.3-Ronidazole 0.001 97.1 106.2 94日99.2 98.1 111.5 95.9 105.2 95.4 112.6 11 1. 5 99.6 77.8- 73.5- 77.5- 75.4- 73.1- 74.8- 82.2- 75.2- 74.5- 80.9- 75.9- 72.9-Metronidazole 0.0005 98.3 105.9 96.2 96.5 103. 2, 100.3 99.1 107.7 107.0 97.0 114.8 103.5 5-Chlorc叫-methyl-76.6- 74.0- 78.9- 79.7- 76.
24、7- 76.9- 80.3- 73.6- 75.2- 82.3- 73.0- 70.2-0.001 4-nitroimidazole 95.8 98.3 103.7 117.3 95.4 102.6 96.6 102.8 107.6 96.2 116.4 111.3 78.2- 72.5- 77.6- 79.1- 75.8- 77.3- 79.0- 76.3- 73.7- 84.7- 74.5- 72.3-Dimetridazole 。.00196.9 107.4 97.5 97.4 100.5 95.7 94.8 105.1 998.7 98.5 11 1. 2 115.1 5-nitrob
25、enzimi- 74.6- 71.9- 78.1- 82.2- 75.2- 77.6- 81.9- 75.5- 74.2- 81.4- 77.7- 73.8-0.0005 dazole 109.4 102.5 97.9 99.1 113.6 94.4 99.3 98.3 104.3 96.3 105.3 106.8 74.7- 72.7- 73.8- 81. 6- 73.9- 71. 1- 76.4- 71.9- 72.9- 80.2- 73.6- 73.0-MNZOH 0.001 97.7 105.6 98.2 96.9 92.8 93.。99.4 112.6 100.6 104.8 97.
26、8 108.4 75.5- 74.0- 75.1- 83.9- 77.6- 80.5- 77.8- 72.4- 73.1- 78.0- 75.1- 70.1-HMMNI-H, O.口。1112.5 11 1. 8 105.4 101.7 94.0 96.7 104.0 101.5 99.2 109.6 100.7 96.6 H 白LC Column Column temperature lonizing mode S臼nningmodel Electrospray voltage Atomizing gas pressure Curtain gas pressure Assistant gas
27、 flow rate lon source temperature SNjT 1928-2007 Annex A (Informative) LC-MS/MS operating condition Table A. 1 ZORBAX SB-C1S , 150 mm x 2.1 mm.3. 5 I1m,or equivalent 30: Electrospraionization ESI Positive ionic scan ,mutiple reac!on mornitor(MRM) 5500 V 0.21 MPa 0.088 MPa 0.062 MPa 550: 17 SN/T 1928
28、-2007 Annex B ( Informative) l C-MS/MS TIC Chromatogram 1.1日.2 t DDe6 9DDt5 8 .DDe5 T DOt5 3 6DDe5 5DDt5 Dt5 JDOtS 2DOt5 皿d口E口2 1-4-Nitroimidazole; 5 8 6 4 4 10 7 / l / 2-MNZOH, 3-2-Methyl-5-nitroimidazole; 4-HMMNI-H3, 5-Metronidazole; J ( 6-Ronidazole;飞J7-Dim酬dazole;飞/8-5-Chloro-1-methyl-4-nitroimi
29、dazI， ,/ 、组/9-5-nitrobenzimidazole; 飞向民.-，-10-lpronidazole. 18 20 22 24 Figure日1一LC-MS/MSTIC chromatogram of ten kinds of nitroimidazoles and its metabolites 18 No 1 2 3 4 5 E 7 8 9 10 SN/T 1928一2007Annex C (Informative) The retention times of 10 kinds of nitroimidazoles and their metabolites, and t
30、he parameters setting-up of selecting ions for detecting Table C. 1 Retention Qualitative Collision Declustering Quantitative Com四undtimes/ 阳irsgas energ/ Potential min 阳irs01 ion of ion eV voltage/V 114.0/67.9 23 4-Nitroimidazole 2.4 114.0/83.7 64 114.0/83.7 19 187.7/123.3 18 MNZOH 3.2 187.7/123.3
31、55 187.7/126.2 25 128.0/41.9 42 Ipronidazole 3.6 128.0/41.9 79 128.0/81.6 24 157.8/140.2 17 HMMNI-H, 、4.3157.81140.2 50 157.8/55.1 27 2-Methyl-5. 172.0/127.8 20 4.9 172.0/81.7 59 nitroimdazole 172.0/81. 7 34 气201. 1/139.7 17 Ronidazole 5.5 201.1/64.8 59 2口1.1/54.834 142.0/95.9 24 Metronidazole 6.9 1
32、42.0/95.9 69 142.0/80.7 36 5-Chloro-1-methyl- 161.9/115.8 25 9.2 161.9/115.8 76 4-nitroimidazole 161.9/144.8 22 183.9/117.8 30 Dimetridazole 10.0 163.9/117.8 74 183.9190.9 52 169.5/124.3 25 5-nitrobenzimidazole 15.1 169.5/124.3 65 169.5/109.1 35 Relatively intensit/ (% base peak) 21 95 35 25 80 19 75 66 30 95 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准迸出口动物源性食品中硝基眯瞠残留量检测方法液相色i曹-质谱/质谱法SN/T 1928-2007 铸中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码.100045网址电话.6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷幡开本880X 1230 1/16 印张1.5字数19千字2007年9月第一版2007年9月第次印刷印数1-2o陪书号，155066.2-18071 定价13.00元
