1、中共和瞌撞撞行叫;住SN/T 1941 .2-20 07 进口晶中乳酸验方法2部zEE前rifill蓝眼那时:飞缸wsaeDetection of lactic acid bacteria in food for import and export-. Pal.t 2 : PetrifHm enumeration method 2007斗8-06发布2008心3-01实施中华人民共如出发布国家旗量监督检验检技总局前言S只/丁19111(进出口食品r:11乳酸商i检验方法分为三个部分:-_._-第1部分:分商与l立方法:一一:第2部分:Petrjfilrnnl测试片法;第3部分:乳酸柯:菌的刊欢
2、j去。4-部分为SN!T194J的第2部分肯卒部分的附录人为规范性附录a本部分18因家认fr认可监督管j奥委员会提出并归口。SN月1941.2-2007*部分起草单位:中华人民共和国i1:11入境检验检疫炜、中华人民共和!现黑龙江山人境检验检使扇。本部分主要iii;草人:关斌、秦成、王攻、李苏龙、玉刚、芳:接二百。部分系前发布的fJj入境检验检哎行lv.t准。1 范围进出口食品中乳酸菌检验方法第2部分:Petrifilm 测试片法SN/丁1941的本部分规定了乳酸菌的Petrifilm川、测定方法。本部分适用于天然或添加乳酸菌的食品及原料中乳酸雨的测埠。2 术语和定义下列术语制定义适用2. 1
3、 Petrifilm细菌总数测试片(bateria testing 种预先制备好的(T1C)指示剂.时增强南乎在计数效/1.0 商进行计数。3 设备和材料3. 1 恪养箱:36C士1C和25C3.2 微最移攘器1000 !止。3. 3 微需氧捕养设备:3.5 3. 6 样品稀将瓶:500mL样品稀3. 7 压板。4 培养基和试剂除另有现定夕|、，试剂均为分析iIj是4. 1 磷酸盐援冲液(见第l.1章)。4.2 MRS肉汤(见第人.2章t)。4. 3 Petrflrr川5 检输方法5.1 方法摆要SN/T 1941.2-2007 plates (used for lactic acid 。可用
4、具双拥压力叶的Petrifilm是一种用于乳酸商计数的可再生点合物的干膜.它自上F阅后薄膜组成.下层的聚乙烙印有网梅并且覆盖有乳酸菌生长所需的培养基，上底是聚内烯薄膜。使用时只需接种1mL 测样品的稀粹1t更在下层的土高养基上.盖上上层的聚阿姆薄膜，此时聚乙烯层上的培养慕由于水的作用成水合物，适合乳酸菌生长。Petrflm? 1式片是采用TTCC氧化三苯四氮尽是)作为菌落指示剂.可对品rp存在的乳酸国进行计数。1941、2-20075. 2 检验的i金验序见;可1制f妥协lRS商1才会6 操作队16. 1. 1 6. 1. 2 jbJ 6. 1. 3 6. 1. 4 6. 2 样品匀j夜的制6
5、. 2.1 附体和!半闭的函飞ZI i : 4巳i 川扣6. 2. 2 的6. 2. 3 手11(政哩)1 n 日日,) SN/T 194 1.2- 20 07 6. 2.4 用1mL元前吸管立J:微母路液器吸取1: 10样品匀液1.0 ml川沿管黯缓隐性于装有9mL稀释液的无商试管rjl(注意吸管尖端不要触及稀择液)，振摇试管QJZ换HJ一支无菌峻管反复吹打使其棍合均匀，常IJJ1t1 : 100的样l导I匀液。6. 2. 5 另取JmL无菌1监管X:微量移液器吸头，按上述操作顺序.做10倍递增样品匀液，如此每递增稀释次，P! iJ 央用1次1mL灭i挡嗷管或r!&头。6. 3 接种6.3.
6、 1 制各两倍榷度的MRS肉阂。根据食品卫生标准妥求成别标本污染情况的估计，1去拌2个3个边且稀释皮检验。对1lj个稀释j立的试管伞从中吸取JmL i容旦到一支;无菌试管中，在!吸取5rnL 两伯被度的MRSI药踢到该试管中充分棍匀后制JllGMIS和样品匀液.再从中吸取lmL液体进行接fi ;或者对知个稀释皮的Jt管.用做盎移ff支黯吸取0，5mL样品辛苦释攘，再I吸取0.5mL两借故度的MRS肉汤后j丑行接种。6.3. 2 将测试片置于平坦去四处，揭开上层膜，月1脱管、做量移掖器将|二述制备好的1mL MRS肉汤和样品匀液理平在滴力u在测试片的中央处。将!品层膜盖下，允许上层膜直接落F，但
7、不要能动上层膜，将用极(凹而底朝f)放皆在上层膜中央处，轻轻地HiF，使样被均匀覆带子回形的培养面积上，l)J勿扭转j王板，拿起l王板，静置至少1min以使培养基凝i甜。每个稀释度接种两张测试片，每张1rnL Q 6. 4 培养将测试片的透明而朝上建于1尺氧i音养设备l村，口p在盏至20片如果测试片越过20片，可以Jll坚硬的分l瑞物将测试片分奸后培养，于民氧条件下30Cr-.- :3 5 C培养48h土3h 0 6 , 5 计数JIJ B视、月3际准商蔼叶数器或放大镜来计数红色菌落。i在取囱珞i在25r. 250之间的棚试片作为l数1耐住当tj;在数大250时，可以选取1个-2个具有代表性的
8、方格来计数，十数表格边缘的商落时遵循数左不数右，数r.不数下的原则，最后以每个方惰的平均菌落数乘以20米报告估算商落数。6.6 计数说明6.6. 1 不论菌落大小都成计数。6.6.2 当乳酸商浓度很高时，整个测试片会变成红色或粉红色，将结果记泣为多不可计二6. 6. 3 有时乳酸菌战度很高时测试片中央可能没有可见菌落，但圆形培养面积的边缘有i午多小的前落，其结果也记录为多不可计;要求对拌品进行进步的稀释也可获得准确的读数。6. 6.4 异型乳酸自立在测试片上去J;ffi为产气，但在距离剧形边缘6.4mm的班回内.1可能不产生J视的炮，问型乳酸的不产生气泡。红色菌格不管是沓产气者I计数为乳酸蕉。
9、6. 7 计算方法6. 7. 1 若只有一个前释度测试片仁的出落敬在适宜计数范围内，计算两个测试片在1落数的平均恼，再将平均值乘以相应和释倍数，作为侮克(毫升)中菌落总数结果G6.7. 2 若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时只计数在25250前落数的测试片?按式(1)计算:Nzxc/(771十。1712)d 式中:r一样品中菌落数:主C一浏i式片(含适宜范|我i搞?在数的测试片)革洛数之和;111远直:沼固菌l在数的第一稀释度(俑)拥试片个数:2主;自范围由市数的第二稀特度(离)测试片个数:d一稀释因子(搞一稀释度)。. ( 1 ) 3 SN/T 1941.2-2007 示伊1:1 : 20
10、叭声在内稀精度232. 244 33,35 f , , 232卜244十:3+ 35 N口;Cj(nl .+ 0. 1. 112 ld且由_.盯艾石?买旷日E可口D丁而=49 455 上述数据去是四舍五入后，表示为，19000或4.9XI01。6.7.3 轩所有稀释度的测试片上茵落数均大于250，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测j式片可记录为多不可汁，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6. 7. 4 若所有稀释度的测试片菌落数均小于25，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.7.5 若所有稀择!变包括掖体样品原被)y则试片均无菌器生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.
11、7.6 若所有稀f季度的测试)41直落数均不;在25250之间，其中于250或小于25时，则以最甸回圈跑回明白白.iif;霹酣睡Z酣睡睡在:.睡接近25或250的平均菌落数乘以稀7 报告结果释倍数即得梅克(毫升样品中乳酸菌数。示例自检验:fT10斗的稀释液在二j则i式片上生成的JT乳酸i街为:A. 1 磷酸盐缓冲稀释液A. 1. 1 储存液磷酸二二氧仰蒸悔水川大约175mL的l冰箱。A.2 MRS肉;3;A. 2.1 成分古拉l陈牛肉酵即浸出液葡萄糖吐温-80拧攘酸锻乙酸tl与硫酸镇硫酸锦磷酸氢二伸蒸锚水A. 2. 2 制法将各成分加入蒸锚水巾，最终pH7.:3立0.20附录A(规范性附录)培养基和试剂SN/1、1941.2-200734.0 g 500 mL if.)jJ蒸惚水稀粹主i1 000 mL后销存，1210C高压j(商15min o 成分完全溶解，1210C高压灭菌15min , 俨J F町俨f俨飞号:，、-hmvr如L飞Fdh产ru斗/丁1J川o2007r11到如准出版社出版门外_l往ii 1) 100045 问11t:叫)t:，i也话:己;二p目标准:Jj版社秦皇岛印刷厂印刷千字后才，次1:11 1* :q: 11 飞(。?干斗、116 年11月第s版r:p 己擎二1941
